植物病理学报

    ACTA P HYTOPATHOLOG1 CA S 1 N1 CA 3 4( 6 ) ： 4 9 5 — 5 0 0( 2 0 0 4)

    马尾松萎蔫病树一种线虫分离物的鉴定

    杨佩文 一，王 峰 ，王 扬 ，冯士明。 ，徐正会 ， 喻盛甫卜

    ( 1 云南农业大学 云南省植物病理重点实验室，昆明 6 5 0 2 0 1 ；。云南省农业科学院植物保护研究所，昆明 6 5 0 2 0 5 ；。云南省森林病虫防治检疫站，昆明 6 5 0 0 5 1 ； 西南林学院保护生物学院，昆明 6 5 0 2 2 4 )

    摘要：2 0 0 2年从贵阳市南明区采集到濒临死亡的马尾松标样 ， 用改进的浅盘分离法对其进行了病原物的分离、 纯化、 形态

    学及分子生物学鉴定。结果表明， 萎蔫死亡松树分离出的线虫形态特征与 Ma mi y a报道的拟松材线虫形态特征相符。用伞

    滑 刃线虫 I T S区( i n t e r n a l t r a n s c r i b e d s p a c e r ) 通用引物 VRF 1( 5 C GTA ACA AGG TAG C TGT AG 3 ) 和 VR F 2( 5 TC —

    c Tc c Gc TAA AT GATAT G 3 ) 对其基因组DNA进行 P C R扩增 ， 并对其P CR产物进行回收、 克隆和测序。 测序结果显示，此 I TS序列与南京松材线虫的同源性为 7 7 . 6 ， 与基因库已报道拟松材线虫序列 U9 3 5 5 4的同源性为 9 3 . 5 ， 而与云南拟

    松材线虫江川种群、 峨山种群和西畴种群的同源性为 9 7 . 9 。通过以上形态学和分子生物学的研究 ， 将贵阳市南明区采集

    到的马尾松萎蔫病树线虫分离物鉴定为拟松材线虫( B u r s a p h e l e n c h u s mu c r o n a t u s ) 。

    关键词 ：马尾松；萎蔫病；拟松材线虫 ； 形态鉴定； I TS分析

    I de nt i f i c a t i o n of a n e ma t o d e i s o l a t e f r o m wi l t Pi n u s ma s s o ni a na YANG P e i — we n ～，WANG

    Fe n g ， W ANG Yan g ，FENG Shi — mi ng。 ，XU Zh e ng - hu i ，YU Sh e ng— f u。 ( Ke y La b o r a t o r y f o r P l a n t

    Pa t h o l o g y o f Yu n na n Pr o v i n c e，YAU，Ku n mi n g 6 5 0 2 01 ， Ch i n a ； I n s t i t u t e o f P l a n t P r o t e c t i o n，Yu n n a n Ac a d e my o f Ag r i —

    c u l t u r a l S c i e n c e s，Ku n mi n g 6 5 0 2 0 5.Ch i n a ；。Qu a r a n t i n e a n d Co n t r o l S t a t i o n f o r F o r e s t Di s e a s e a n d I n s e c t o f Yu n n a n

    Pr o v i n c e ，Ku n mi n g 6 5 0 0 5 1 ，Ch i n a ； Fa c u l t y o f Pr o t e c t i o n Bi o l o g y，S o u t h we s t Fo r e s t r y Co l l e g e ，Ku n mi n g 6 5 0 2 2 4 ，Ch i n a )

    Abs t r a c t ：W i l t pi n e s ampl e s we r e c o l l e c t e d f r o m Gui ya ng i n 2 00 2 .M or p hol o gi c a l a nd mol e c ul a r i de n t i f i —

    c a t i on of t he ne ma t o de whi c h i s ol a t e d a nd pu r i f i e d f r om t h e s a mp l e we r e c a r r i e d o ut .The mor ph ol o gi c a l

    d e n t i f i c a t i o n s h o we d t h a t c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e n e ma t o d e wa s s i mi l a r t o wh a t Ma mi y a r e p o r t e d .Po l v —

    me r a s e Cha i n Re a c t i on (PCR)a mp l i f i c a t i on of t he i nt e r na l t r a ns c r i be d s p a c e r( I TS)o f t he r i b os oma l

    DNA of t h e s a mpl e s wa s d on e wi t h u ni v e r s a l pr i me r s VRF1( 5 CGTAACAAGGTAGCTGTAG 3 )a nd

    VRF2( 5 TCCTCCGCTAAATGATATG 3 ) ，a nd t he PCR pr o du c t s wer e c l on e d i n t o p GEM — T v e c t or .

    Se que nc i ng r e s ul t s s ho we d t ha t t he h omol o gy be t we e n t he s a mp l e s a nd Bu r s a ph e l e n c hu s： c yl o ph i l u s ( Na n —

    j i n g )wa s 7 7 . 6 ，a n d s h a r e d 9 3 . 5 a n d 9 7 . 9 h o mo l o g y wi t h U9 3 5 5 4( B.? l l l J c r o l l a t l l s s e q u e n c e i n

    Ge n Ba n k)a n d 3 p o p u l a t i o n s o f B.r r l u c r o r l a l t t s i s o l a t e d f r o m Yu n n a n，r e s p e c t i v e l y .Th e r e s u l t s r e v e a l e d

    t h a t t h e n e ma t od e i s o l a t e f r om Gui y an g wa s B.T H1 A C F O t l a t “ s .

    Ke y wo r d s：Pi nu s mas s o n i an a；wi l t di s e a s e；Bur s a phe l e n c h us muc r o n at u s ；mo r p hol ogi c i de nt i f i c a t i o n；

    I TS an a l ys i s

    中图分类号： 4 3 2 . 4 5 ； 7 6 3 . 7 1 2 . 4 8 文献标识码 ：A 文章编号 ：0 4 1 2 — 0 9 1 4 ( 2 0 0 4 ) 0 6 — 0 4 9 5 — 0 6

    伞滑刃属线虫( Bu r s a p h de c h u s s p p . ) 是重要

    的植物寄生线虫 ......