乌桕叶主要黄酮类物质的定性定量.PDF
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2006年2月23日
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参见附件(392KB，4页)。
2004, Vol. 25, No. 10 食品科学 ※分析检验 280
乌桕叶主要黄酮类物质的定性定量
霍光华1，高荫榆2
(1. 江西农业大学生物工程系， 江西 南昌 330045 ；2. 南昌大学生命科学学院， 江西 南昌 330047)
摘 要：通过硅胶和Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离乌桕叶黄酮类物质，HPLC 鉴别其纯度和定量，UV 、IR 、NMR 、LC-MS 定性，结果显示乌桕叶所含主要黄酮类物质为槲皮素、山柰酚及其组成的甙，其中槲皮素、山
柰酚和槲皮素甙百分含量分别为0.0965 、0.1232 、0.6975 。
关键词：乌桕叶；黄酮类物质；定性定量
The Qualitative and Quantitative Analysis of Main Flavonoids from Chinese Tallow Leaf
HUO Guang-hua 1 ，GAO Yin-yun 2
(1.Bioengineering Department, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China ；
2.Life Science College, Nanchang University, Nanchang 330047, China)
Abstract ：Flavonoids were separated from Chinese tallow leaf (CTL) using silica and sephadex LH-20 gel column
chromatography, identified their purity and analyzed quantitatively using HPLC, analyzed quanlitatively using UV,IR,NMR,LC-MS. The results showed that CTL flavonoids consist of quercetin, kaempferol and their glycosides. Contents (g100g dry
mass) of quercetin, kaempferol and quercetin glycoside are 0.0965, 0.1232,0.6975 in CTL respectively.
Key words ： Chinese tallow leaf ； Flavonoids ； Qualitative and quantitative analysis
中图分类号 ： Q946 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1002-6630(2004)10-0280-04
收稿日期：2004-0-0
作者简介：霍光华(1963-) ，男，副教授，博士，从事生物资源及其功能成分研究。
黄酮类物质在抑制癌细胞、保护心血管、调节脂
代谢、雌性激素样作用、抗微生物、抗炎症、抗变
态反应、清除自由基等方面显示活性[1,2] ，因此黄酮类
物质作为功能因子倍受关注。乌桕原产我国，栽培历
史悠久，对其脂质研究利用较为广泛，对其叶的研究
相对较少。乌桕叶具有消痈肿、治癣疾、抗病菌、杀
害虫等效[3,4] 。为确定其相关功能因子，对乌桕叶主要
黄酮类物质进行了提取分离和定性定量分析。
1 实验部分
1.1分离材料
硅胶(160-200 目，柱层析用) ，GF 254 ( 薄层检测用) ，青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20( 凝胶柱层析) ，Pharmacia 公司产。
1.2仪器
浓缩设备 旋转蒸发器RE52-98( 金叶) 上海亚荣生化
仪器厂；循环水式多用真空泵SHB- ⅢA 河南太康教
材仪器厂；紫外光谱仪 美国Beckman DU-7 紫外可见扫
描分光光度计；三用紫外线分析仪 波长为365nm ，255nm 。上海顾村电光仪器厂；红外光谱仪 美国伯乐
公司FTS-40 傅里叶红外光谱仪；核磁共振波谱仪 美国
Varian UNTY-500NMR Spectrometer ；液- 质联用仪 美国
Waters Platform ZMD 4000 LC-MS ；高压液相色谱仪 美
国Waters 公司产高压液相色谱仪。
1.3样品
乌桕叶(Chinese tallow leaf ， 简称CTL) 于11 月中旬
采自江西农业大学校园内的结籽鸡爪桕叶，而后室内除
湿风干，硅胶干燥，粉碎过 40 目筛，备用。
1.4实验方法
1.4.1 总黄酮提取
乌桕叶粉2kg ，用10 倍70% 的乙醇水溶液水浴提
取2次，每次3h ，纱布挤滤后，渣再用70% 的乙醇水
溶液淋洗，合并挤滤液和淋洗液，过布氏漏斗抽滤获
得滤液。滤液减压浓缩得浸膏，用水制得悬浮液再分
别以石油醚、乙酸乙酯萃取。其中乙酸乙酯部分减压
浓缩回收溶剂后，获得乙酸乙酯浸膏58.36g ，备用。
1.4.2 黄酮类成分的分离281 ※分析检验 食品科学 2004, Vol. 25, No. 10
乙酸乙酯浸膏，加适量甲醇热溶，拌入层析硅
胶，挥去甲醇后加到已装好的硅胶柱上端，反复以氯
仿- 甲醇梯度洗脱，收集组分，再上Sephadex LH-20 ，用甲醇洗脱，冷藏放置析出晶体S-1 、S-2 、S-3 。
1.4.3 乌桕叶黄酮类物质的纯度鉴定及含量测定[5,6]
HPLC 归一化法测定纯度，将分离的黄酮类物质和
70% 乙醇提取物，溶于色谱纯的甲醇溶剂中，浓度控
制在0.1mgml 左右进样。色谱条件：Waters 1525 泵，2487 紫外检测器，Breeze 色谱工作站，SSI C 18 (250 ×
4.6mm ) ； 流动相为甲醇: 水=60:40 ，pH=3( 磷酸调) ，流
速0.7mlmin ，检测波长360nm 。
1.4.4 乌桕叶黄酮类物质的定性
1.4.4.1 熔点测定 毛细管熔点测定法[7] 。
1.4.4.2 位移试剂的紫外光谱测定[8]
取分离化合物S-1 、S-2 、S-3 各约0.1mg ，溶解于
10ml 色谱纯甲醇中，紫外可见扫描分光光度计上测定
MeOH 谱，而后加入三氯化铝溶液记录AlCl 3谱，再加
3滴浓盐酸，测定并记录AlCl 3HCl 谱。另份甲醇液中
加入过量粉碎的无水乙酸钠，立即测定NaOAc 谱 ......
乌桕叶主要黄酮类物质的定性定量
霍光华1，高荫榆2
(1. 江西农业大学生物工程系， 江西 南昌 330045 ；2. 南昌大学生命科学学院， 江西 南昌 330047)
摘 要：通过硅胶和Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离乌桕叶黄酮类物质，HPLC 鉴别其纯度和定量，UV 、IR 、NMR 、LC-MS 定性，结果显示乌桕叶所含主要黄酮类物质为槲皮素、山柰酚及其组成的甙，其中槲皮素、山
柰酚和槲皮素甙百分含量分别为0.0965 、0.1232 、0.6975 。
关键词：乌桕叶；黄酮类物质；定性定量
The Qualitative and Quantitative Analysis of Main Flavonoids from Chinese Tallow Leaf
HUO Guang-hua 1 ，GAO Yin-yun 2
(1.Bioengineering Department, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China ；
2.Life Science College, Nanchang University, Nanchang 330047, China)
Abstract ：Flavonoids were separated from Chinese tallow leaf (CTL) using silica and sephadex LH-20 gel column
chromatography, identified their purity and analyzed quantitatively using HPLC, analyzed quanlitatively using UV,IR,NMR,LC-MS. The results showed that CTL flavonoids consist of quercetin, kaempferol and their glycosides. Contents (g100g dry
mass) of quercetin, kaempferol and quercetin glycoside are 0.0965, 0.1232,0.6975 in CTL respectively.
Key words ： Chinese tallow leaf ； Flavonoids ； Qualitative and quantitative analysis
中图分类号 ： Q946 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1002-6630(2004)10-0280-04
收稿日期：2004-0-0
作者简介：霍光华(1963-) ，男，副教授，博士，从事生物资源及其功能成分研究。
黄酮类物质在抑制癌细胞、保护心血管、调节脂
代谢、雌性激素样作用、抗微生物、抗炎症、抗变
态反应、清除自由基等方面显示活性[1,2] ，因此黄酮类
物质作为功能因子倍受关注。乌桕原产我国，栽培历
史悠久，对其脂质研究利用较为广泛，对其叶的研究
相对较少。乌桕叶具有消痈肿、治癣疾、抗病菌、杀
害虫等效[3,4] 。为确定其相关功能因子，对乌桕叶主要
黄酮类物质进行了提取分离和定性定量分析。
1 实验部分
1.1分离材料
硅胶(160-200 目，柱层析用) ，GF 254 ( 薄层检测用) ，青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20( 凝胶柱层析) ，Pharmacia 公司产。
1.2仪器
浓缩设备 旋转蒸发器RE52-98( 金叶) 上海亚荣生化
仪器厂；循环水式多用真空泵SHB- ⅢA 河南太康教
材仪器厂；紫外光谱仪 美国Beckman DU-7 紫外可见扫
描分光光度计；三用紫外线分析仪 波长为365nm ，255nm 。上海顾村电光仪器厂；红外光谱仪 美国伯乐
公司FTS-40 傅里叶红外光谱仪；核磁共振波谱仪 美国
Varian UNTY-500NMR Spectrometer ；液- 质联用仪 美国
Waters Platform ZMD 4000 LC-MS ；高压液相色谱仪 美
国Waters 公司产高压液相色谱仪。
1.3样品
乌桕叶(Chinese tallow leaf ， 简称CTL) 于11 月中旬
采自江西农业大学校园内的结籽鸡爪桕叶，而后室内除
湿风干，硅胶干燥，粉碎过 40 目筛，备用。
1.4实验方法
1.4.1 总黄酮提取
乌桕叶粉2kg ，用10 倍70% 的乙醇水溶液水浴提
取2次，每次3h ，纱布挤滤后，渣再用70% 的乙醇水
溶液淋洗，合并挤滤液和淋洗液，过布氏漏斗抽滤获
得滤液。滤液减压浓缩得浸膏，用水制得悬浮液再分
别以石油醚、乙酸乙酯萃取。其中乙酸乙酯部分减压
浓缩回收溶剂后，获得乙酸乙酯浸膏58.36g ，备用。
1.4.2 黄酮类成分的分离281 ※分析检验 食品科学 2004, Vol. 25, No. 10
乙酸乙酯浸膏，加适量甲醇热溶，拌入层析硅
胶，挥去甲醇后加到已装好的硅胶柱上端，反复以氯
仿- 甲醇梯度洗脱，收集组分，再上Sephadex LH-20 ，用甲醇洗脱，冷藏放置析出晶体S-1 、S-2 、S-3 。
1.4.3 乌桕叶黄酮类物质的纯度鉴定及含量测定[5,6]
HPLC 归一化法测定纯度，将分离的黄酮类物质和
70% 乙醇提取物，溶于色谱纯的甲醇溶剂中，浓度控
制在0.1mgml 左右进样。色谱条件：Waters 1525 泵，2487 紫外检测器，Breeze 色谱工作站，SSI C 18 (250 ×
4.6mm ) ； 流动相为甲醇: 水=60:40 ，pH=3( 磷酸调) ，流
速0.7mlmin ，检测波长360nm 。
1.4.4 乌桕叶黄酮类物质的定性
1.4.4.1 熔点测定 毛细管熔点测定法[7] 。
1.4.4.2 位移试剂的紫外光谱测定[8]
取分离化合物S-1 、S-2 、S-3 各约0.1mg ，溶解于
10ml 色谱纯甲醇中，紫外可见扫描分光光度计上测定
MeOH 谱，而后加入三氯化铝溶液记录AlCl 3谱，再加
3滴浓盐酸，测定并记录AlCl 3HCl 谱。另份甲醇液中
加入过量粉碎的无水乙酸钠，立即测定NaOAc 谱 ......
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