一种丹参高质量总RNA的提取方法.PDF
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2006年2月23日
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参见附件(240KB，4页)。
西北植物学报 2004, 24 (10) : 1936—1939
Acta B ot . B orea l . -Occiden t . S in.
文章编号: 100024025 (2004) 1021936204
一种丹参高质量总RNA 的提取方法X
闫亚平, 刘世海, 王吉吉之3
(陕西师范大学 生命科学学院, 西安 710062)
摘 要: 高质量RNA 的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Th iocyanate, GT )
法、尿素法、 CTAB 法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法, 以丹参组织培养的幼苗为材料, 进行丹参RNA 的分离
试验, 发现所采用的几种方法获得的RNA 都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种
次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT 法进行了改良, 在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10%～
20% )沉淀20m in 对于高质量总RNA 的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT 法无论对于组织培养中
幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA 分离效果。mRNA 电泳检测发现所得
mRNA 集中分布在 500 b～ 3 kb 之间且质量较高, 完全可以满足丹参各种RNA 相关的分子生物学实验要求, 为丹
参RT - PCR、 No r thern 杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。
关键词: 丹参; 总RNA; 提取方法; 异硫氰酸胍
中图分类号:Q 943. 2 文献标识码:A
A method for h igh qua l ity of tota l RNA extracted
from Sa lvia m il tor rh iza
YAN Ya2 p ing,L IU Sh i2 hai,WAN G Zhe2 zh i
3
(Co llege of L ife Sciences, ShaanxiNo rmal U niversity, Xi’an 710062, Ch ina)
Abstract : The acqu isit ion of h igh2 quality RNA is a foundat ion of launch ing mo lecu le b io logical study of
S a lv ia m il torrh iz a Bunge . Bu t the iso lat ion of RNA f rom var iou s t issues of S a lv ia m il torrh iz a is no to r iou s2
ly diff icu lt due to the abundance of so lub le po lypheno lic compounds, am ylo se and second m etabo lites .
Based on the Guan idine Th iocyanate (GT ) m ethod of ZHAN G J S, et al, W e descr ibe an eff icien t, p ract i2
calm ethod fo r iso lat ion of h igh quality to tal RNA p re2 coo led guan idine? guan idin ium salt s . The p ro tein s,genom ic DNA and secondary m etabo lites in the ex t ract w ere then removed by p recip itat ion w ith p re2 coo led
sodium acetate and repeated pheno l? ch lo rofo rm ex t ract ion s . The RNA w as recovered by ethano l p recip ita2
t ion . The RNA ob tained f rom th is k ind of m ethod is su itab le fo r RT 2 PCR and no r thern b lo t exper im en t s .
Key words: S a lv ia m il torrh iz a. to tal RNA; ex t ract ion m ethod; guan idine th iocyanate
丹参(S a lv ia m il torrh iz a. Bge . )为唇形科鼠尾
草属多年生草本植物, 以根入药, 别名血参、赤参、紫
丹参、红根等。我国大部分省份有野生资源分布, 栽
培地域较广泛。其根的主要成分为脂溶性的二萜醌
类化合物, 如丹参酮êA ( tan sh inone ê A )、丹参酮 I
( tan sh inone I)、丹参酸甲酯(m ethylan sh inonate)、去甲丹参酮 (no r tan sh inone)、二氢丹参酮 (dihy2
dro tan sh inone)、隐丹参酮(cryp tan sh inone)、丹参酮
X 收稿日期: 2004205220; 修改稿收到日期: 2004208220
基金项目: 陕西省陕南中药产业发展领导小组办公室资助
作者简介: 闫亚平(1980- ) , 男(汉族) , 陕西宝鸡人, 在读硕士研究生, 主要从事植物生物技术研究。
3 通讯联系人。Co rrespondence to: zzwang@snnu . edu . cn .
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.ê B ( tan sh inone ê B )等以及水溶性成分, 主要有丹
参酸A (丹参素)、 B、 C, 丹参酚酸A、 B、 C、 D、 E、 G,迷迭香酸, 齐墩果酸(o leano licacid) , B 2谷甾醇和原
茶儿醛等。具有活血调经、祛瘀生新、镇静安神、凉血
消痈、消肿止痛等功能, 可用于治疗月经不调、痛经、产后瘀阻腹痛、关节酸痛、神经衰弱、失眠、心悸、痈
肿疮毒等症, 特别是在治疗心脑血管系统疾病方面
的开发应用较多。
随着中药丹参在治疗心脑血管疾病、降低“氧化
疲劳”和抗病毒等方面的广泛应用, 其使用量越来越
大, 种植面积也在逐年扩大。同时, 丹参染色体数目
少(2n= 14) , 次生代谢产物种类多(上万种) , 具有
中药分子生物学研究模式物种的各种有利条件。高
质量RNA 的获得是进行丹参分子生物学研究的重
要基础, 但是由于丹参组织中富含多糖、多酚以及各
种已知或未知的次生代谢物质[ 1～ 3 ]
, 用一般植物
RNA 提取方法很难从丹参中获得高质量的RNA。
近年来, 关于富含多糖、多酚植物组织RNA 的提取
已有不少报道[ 4, 5 ]
, 但对于药用植物却涉及的较少,丹参RNA 的提取也未见报道。为了对进一步开展
丹参分子生物学实验打下基础, 我们对现在使用较
多的几种方法均做了尝试并在此基础上对常规的提
取方法进行了改进。发现改良后的异硫氰酸胍法对
于丹参总RNA 具有良好的提取效果。产物经琼脂
糖凝胶电泳检测, 所得RNA 质量较好, 进一步分离
mRNA 结果显示, 所得片段大多分布在 500 bp -
3 000 bp 之间, 且分布均匀, 可以满足 cDNA 文库
的构建、 No r thern 杂交等分子生物学的研究需要 ......
Acta B ot . B orea l . -Occiden t . S in.
文章编号: 100024025 (2004) 1021936204
一种丹参高质量总RNA 的提取方法X
闫亚平, 刘世海, 王吉吉之3
(陕西师范大学 生命科学学院, 西安 710062)
摘 要: 高质量RNA 的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Th iocyanate, GT )
法、尿素法、 CTAB 法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法, 以丹参组织培养的幼苗为材料, 进行丹参RNA 的分离
试验, 发现所采用的几种方法获得的RNA 都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种
次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT 法进行了改良, 在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10%～
20% )沉淀20m in 对于高质量总RNA 的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT 法无论对于组织培养中
幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA 分离效果。mRNA 电泳检测发现所得
mRNA 集中分布在 500 b～ 3 kb 之间且质量较高, 完全可以满足丹参各种RNA 相关的分子生物学实验要求, 为丹
参RT - PCR、 No r thern 杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。
关键词: 丹参; 总RNA; 提取方法; 异硫氰酸胍
中图分类号:Q 943. 2 文献标识码:A
A method for h igh qua l ity of tota l RNA extracted
from Sa lvia m il tor rh iza
YAN Ya2 p ing,L IU Sh i2 hai,WAN G Zhe2 zh i
3
(Co llege of L ife Sciences, ShaanxiNo rmal U niversity, Xi’an 710062, Ch ina)
Abstract : The acqu isit ion of h igh2 quality RNA is a foundat ion of launch ing mo lecu le b io logical study of
S a lv ia m il torrh iz a Bunge . Bu t the iso lat ion of RNA f rom var iou s t issues of S a lv ia m il torrh iz a is no to r iou s2
ly diff icu lt due to the abundance of so lub le po lypheno lic compounds, am ylo se and second m etabo lites .
Based on the Guan idine Th iocyanate (GT ) m ethod of ZHAN G J S, et al, W e descr ibe an eff icien t, p ract i2
calm ethod fo r iso lat ion of h igh quality to tal RNA p re2 coo led guan idine? guan idin ium salt s . The p ro tein s,genom ic DNA and secondary m etabo lites in the ex t ract w ere then removed by p recip itat ion w ith p re2 coo led
sodium acetate and repeated pheno l? ch lo rofo rm ex t ract ion s . The RNA w as recovered by ethano l p recip ita2
t ion . The RNA ob tained f rom th is k ind of m ethod is su itab le fo r RT 2 PCR and no r thern b lo t exper im en t s .
Key words: S a lv ia m il torrh iz a. to tal RNA; ex t ract ion m ethod; guan idine th iocyanate
丹参(S a lv ia m il torrh iz a. Bge . )为唇形科鼠尾
草属多年生草本植物, 以根入药, 别名血参、赤参、紫
丹参、红根等。我国大部分省份有野生资源分布, 栽
培地域较广泛。其根的主要成分为脂溶性的二萜醌
类化合物, 如丹参酮êA ( tan sh inone ê A )、丹参酮 I
( tan sh inone I)、丹参酸甲酯(m ethylan sh inonate)、去甲丹参酮 (no r tan sh inone)、二氢丹参酮 (dihy2
dro tan sh inone)、隐丹参酮(cryp tan sh inone)、丹参酮
X 收稿日期: 2004205220; 修改稿收到日期: 2004208220
基金项目: 陕西省陕南中药产业发展领导小组办公室资助
作者简介: 闫亚平(1980- ) , 男(汉族) , 陕西宝鸡人, 在读硕士研究生, 主要从事植物生物技术研究。
3 通讯联系人。Co rrespondence to: zzwang@snnu . edu . cn .
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.ê B ( tan sh inone ê B )等以及水溶性成分, 主要有丹
参酸A (丹参素)、 B、 C, 丹参酚酸A、 B、 C、 D、 E、 G,迷迭香酸, 齐墩果酸(o leano licacid) , B 2谷甾醇和原
茶儿醛等。具有活血调经、祛瘀生新、镇静安神、凉血
消痈、消肿止痛等功能, 可用于治疗月经不调、痛经、产后瘀阻腹痛、关节酸痛、神经衰弱、失眠、心悸、痈
肿疮毒等症, 特别是在治疗心脑血管系统疾病方面
的开发应用较多。
随着中药丹参在治疗心脑血管疾病、降低“氧化
疲劳”和抗病毒等方面的广泛应用, 其使用量越来越
大, 种植面积也在逐年扩大。同时, 丹参染色体数目
少(2n= 14) , 次生代谢产物种类多(上万种) , 具有
中药分子生物学研究模式物种的各种有利条件。高
质量RNA 的获得是进行丹参分子生物学研究的重
要基础, 但是由于丹参组织中富含多糖、多酚以及各
种已知或未知的次生代谢物质[ 1～ 3 ]
, 用一般植物
RNA 提取方法很难从丹参中获得高质量的RNA。
近年来, 关于富含多糖、多酚植物组织RNA 的提取
已有不少报道[ 4, 5 ]
, 但对于药用植物却涉及的较少,丹参RNA 的提取也未见报道。为了对进一步开展
丹参分子生物学实验打下基础, 我们对现在使用较
多的几种方法均做了尝试并在此基础上对常规的提
取方法进行了改进。发现改良后的异硫氰酸胍法对
于丹参总RNA 具有良好的提取效果。产物经琼脂
糖凝胶电泳检测, 所得RNA 质量较好, 进一步分离
mRNA 结果显示, 所得片段大多分布在 500 bp -
3 000 bp 之间, 且分布均匀, 可以满足 cDNA 文库
的构建、 No r thern 杂交等分子生物学的研究需要 ......
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