乌桕叶抑菌活性功能成分的研究.PDF
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2006年2月23日
| 第1页 |
参见附件(96KB，5页)。
乌桕叶抑菌活性功能成分的研究
霍光华1
高荫榆2
陈明辉1
1 (江西农业大学生物工程系 ,南昌 , 330045) 2 (南昌大学 ,南昌 ,330047)
摘 要 分析了乌桕叶中的抑菌活性功能成分。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌 ,依次测定不同种质乌
桕叶水、 70 %乙醇和乙酸乙酯 3 种溶剂提取物的抑菌活性和其所含总酸和总黄酮物质的含量 ,分析它们的相关
性。用碱中和法和分离的黄酮类物质的实测法确定了抑菌活性物质。结果显示 ,总酸在乌桕叶极性溶剂提取物
抑菌中起主要作用。总酸在水、 70 %乙醇、乙酸乙酯 3 种溶剂提取物中抑菌分别占其抑菌活性的 72 %、 6312 %和
315 %。黄酮苷比苷元抑菌活性强。酸类物质和黄酮类物质是乌桕叶抑菌活性的功能成分。
关键词 乌桕叶 , 酸类物质 , 黄酮类物质 , 抑菌
植物源如香辛料植物、中草药、果蔬等天然源防
腐剂备受人们喜爱[1 ]。乌桕( S apium sebif erum ) 原
产我国 ,其种子由于出油率高、品质优、用途广而具有
重要经济价值 ,被列为我国 4 大木本油料植物。受国
际上棕榈油市场的冲击 ,乌桕脂生产受到很大影响。
为了综合利用 ,更好地实现这一特色资源的经济优
势 ,作者在原乌桕类可可脂研究的基础上 ,拓宽到乌
桕叶的开发利用研究上。急性毒理实验数据表明 ,乌
桕叶风干物属无毒类型 ,这使得开发乌桕叶食品添加
剂或防腐剂成为可能。对乌桕叶的抗菌活性已有报
道[2 ]
,但所用种源笼统单一 ,仅初步涉及乌桕叶粗提
物的抗菌效果 ,文中对其进行了较为深入的研究。
1 实验部分
111 实验材料
11111 受试样品
乌桕叶:山乌桕叶采自江西省黎川县岩泉自然保
护区 ,无籽鸡爪桕叶和结籽鸡爪桕叶采自江西农业大
学校园 ,赣四鸡爪桕、玉山大粒铜锤桕、赣三长穗葡萄
桕、赣二狗尾桕、广西蜈蚣桕、广西疏果桕、云南铜锤
桕、浙江铜锤桕、广西棒槌桕、寿桃桕、赣一铜锤桕、大
粒葡萄桕等品种叶均采自江西省广丰县乌桕种质基
地。时间均为 11 月中旬。乌桕叶黄酮类分离物:S 21 ,S 22 ,S 23为笔者从结籽鸡爪桕叶中分离并鉴定的产物。
11112 菌 种
大肠杆菌 ( Escherichia col i ) 、金黄色葡萄球菌
( S taphylococcus aureus) ,由江西农业大学微生物教
研究室提供。
11113 试 剂
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、 NaCl、蔗糖、葡萄糖、 NaOH、HCl、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯甲酸钠、柠檬酸等。
11114 实验仪器
超净工作台、手提式灭菌锅、恒温控制箱、冰箱、游标卡尺、镊子、接种针、牛津杯、茄子瓶、三角瓶、培
养皿、记号笔等。
212 实验方法
21211 受试物的制备
受试物的制备流程见图 1。
第一作者:博士,副教授。
收稿时间:2004 - 09 - 13 ,改回时间:2004 - 12 - 16
21212 乌桕叶类总黄酮含量和总酸的测定
类总黄酮测定参照文献[3 ]
,总酸含量的测定参照
文献[4 ]。
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
52 2005 Vol . 31 No . 3 (Tot a l 207)
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.21213 培养基的准备
按文献[5 ] 配制肉汤蛋白胨培养基 ,与包扎好的
培养皿、移液管、牛津杯、分装有培养基的茄子瓶、试
管等一起放入灭菌锅中高压蒸汽灭菌 20 min
(10314kPa) 。灭菌后将茄子瓶和试管倾斜放置获斜
面培养基。
21212 种菌的制备
在超净工作台上将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分
别接种于试管斜面的肉汤蛋白胨培养基上 ,在 37 ℃
恒温培养箱中培养 48 h。制成种菌备用。
21214 抑菌试验
在超净工作台上将灭菌后的肉汤蛋白胨培养基 ,倒入培养皿中 ,每皿 15 mL ,放置冷却。用无菌水洗
脱试管斜面种子菌制成种子菌液 ,无菌移液管取 013
mL 细菌液加于平皿中 ,玻璃推棒将菌液涂布均匀 ,制成带菌平板。用镊子将牛津杯放在平板上 ,依次在
各杯中加相应空白对照水或丙酮、乌桕叶提取物和分
离物各0125 mL。标记各皿和杯位号后 ,于32 ℃恒温
箱培养 48 h ,观察各皿菌落生长情况 ,并用游标卡尺
量取抑菌圈直径 ,记录数据。
用011 mol L 的 NaOH 调结籽鸡爪桕叶 3 种溶
剂提取物溶液至 pH 710～712 ,然后将未调自然 pH
的原提取液加消耗碱液等体积的蒸馏水 ,同上进行抑
菌试验。
21216 统计分析
表1 和表 2 数据为 3 次重复的平均值加标准差
( ? x ±s) ,显著性检验用 t 测验法[6 ]。
表 1 不同种质乌桕叶提取物对大肠杆菌的
抑制作用(抑菌圈直径, cm)
材料名称 热水提取物 70 %乙醇浸提物 乙酸乙酯浸提物
山乌桕 1165 ± 01023 1130 ± 01046 1106 ± 01065
无籽鸡爪桕 1172 ± 01104 1149 ± 01108 1135 ± 01049
结籽鸡爪桕 1143 ± 01050 1176 ± 01055 1136 ± 01081
赣 4 鸡爪桕 1171 ± 01147 1168 ± 01070 1114 ± 01210
玉山大粒铜锤桕 1162 ± 01046 1197 ± 01055 0180 ± 01000
赣 3 长穗葡萄桕 1179 ± 01040 1131 ± 01064 0180 ± 01000
赣 2 狗尾桕 1179 ± 01072 1134 ± 01025 0180 ± 01000
广西蜈蚣桕 1166 ± 01047 1183 ± 01164 1129 ± 01134
广西疏果桕 1179 ± 01012 1158 ± 01074 0180 ± 01000
云南铜锤桕 1129 ± 01173 1136 ± 01061 1121 ± 01057
浙江铜锤桕 1157 ± 01040 1118 ± 01032 1101 ± 01056
赣 1 铜锤桕 1168 ± 01105 1135 ± 01042 0198 ± 01026
大粒葡萄桕 1164 ± 01082 1119 ± 01076 1100 ± 01026
苯甲酸钠 1110 ± 01144 1110 ± 01144 1110 ± 01144
水对照 0180 ± 01000 0180 ± 01000 0180 ± 01067
表 2 不同种质乌桕叶提取物对金黄色葡萄球菌
的抑制作用(抑菌圈直径, cm)
材料名称 热水提取物 70 %乙醇浸提物 乙酸乙酯浸提物
山乌桕 2127 ± 01259 1178 ± 01110 1158 ± 01045
无籽鸡爪桕 2110 ± 01242 1162 ± 01075 1156 ± 01101
结籽鸡爪桕 1185 ± 01114 1181 ± 01119 1148 ± 01151 ......
霍光华1
高荫榆2
陈明辉1
1 (江西农业大学生物工程系 ,南昌 , 330045) 2 (南昌大学 ,南昌 ,330047)
摘 要 分析了乌桕叶中的抑菌活性功能成分。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌 ,依次测定不同种质乌
桕叶水、 70 %乙醇和乙酸乙酯 3 种溶剂提取物的抑菌活性和其所含总酸和总黄酮物质的含量 ,分析它们的相关
性。用碱中和法和分离的黄酮类物质的实测法确定了抑菌活性物质。结果显示 ,总酸在乌桕叶极性溶剂提取物
抑菌中起主要作用。总酸在水、 70 %乙醇、乙酸乙酯 3 种溶剂提取物中抑菌分别占其抑菌活性的 72 %、 6312 %和
315 %。黄酮苷比苷元抑菌活性强。酸类物质和黄酮类物质是乌桕叶抑菌活性的功能成分。
关键词 乌桕叶 , 酸类物质 , 黄酮类物质 , 抑菌
植物源如香辛料植物、中草药、果蔬等天然源防
腐剂备受人们喜爱[1 ]。乌桕( S apium sebif erum ) 原
产我国 ,其种子由于出油率高、品质优、用途广而具有
重要经济价值 ,被列为我国 4 大木本油料植物。受国
际上棕榈油市场的冲击 ,乌桕脂生产受到很大影响。
为了综合利用 ,更好地实现这一特色资源的经济优
势 ,作者在原乌桕类可可脂研究的基础上 ,拓宽到乌
桕叶的开发利用研究上。急性毒理实验数据表明 ,乌
桕叶风干物属无毒类型 ,这使得开发乌桕叶食品添加
剂或防腐剂成为可能。对乌桕叶的抗菌活性已有报
道[2 ]
,但所用种源笼统单一 ,仅初步涉及乌桕叶粗提
物的抗菌效果 ,文中对其进行了较为深入的研究。
1 实验部分
111 实验材料
11111 受试样品
乌桕叶:山乌桕叶采自江西省黎川县岩泉自然保
护区 ,无籽鸡爪桕叶和结籽鸡爪桕叶采自江西农业大
学校园 ,赣四鸡爪桕、玉山大粒铜锤桕、赣三长穗葡萄
桕、赣二狗尾桕、广西蜈蚣桕、广西疏果桕、云南铜锤
桕、浙江铜锤桕、广西棒槌桕、寿桃桕、赣一铜锤桕、大
粒葡萄桕等品种叶均采自江西省广丰县乌桕种质基
地。时间均为 11 月中旬。乌桕叶黄酮类分离物:S 21 ,S 22 ,S 23为笔者从结籽鸡爪桕叶中分离并鉴定的产物。
11112 菌 种
大肠杆菌 ( Escherichia col i ) 、金黄色葡萄球菌
( S taphylococcus aureus) ,由江西农业大学微生物教
研究室提供。
11113 试 剂
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、 NaCl、蔗糖、葡萄糖、 NaOH、HCl、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯甲酸钠、柠檬酸等。
11114 实验仪器
超净工作台、手提式灭菌锅、恒温控制箱、冰箱、游标卡尺、镊子、接种针、牛津杯、茄子瓶、三角瓶、培
养皿、记号笔等。
212 实验方法
21211 受试物的制备
受试物的制备流程见图 1。
第一作者:博士,副教授。
收稿时间:2004 - 09 - 13 ,改回时间:2004 - 12 - 16
21212 乌桕叶类总黄酮含量和总酸的测定
类总黄酮测定参照文献[3 ]
,总酸含量的测定参照
文献[4 ]。
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
52 2005 Vol . 31 No . 3 (Tot a l 207)
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.21213 培养基的准备
按文献[5 ] 配制肉汤蛋白胨培养基 ,与包扎好的
培养皿、移液管、牛津杯、分装有培养基的茄子瓶、试
管等一起放入灭菌锅中高压蒸汽灭菌 20 min
(10314kPa) 。灭菌后将茄子瓶和试管倾斜放置获斜
面培养基。
21212 种菌的制备
在超净工作台上将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分
别接种于试管斜面的肉汤蛋白胨培养基上 ,在 37 ℃
恒温培养箱中培养 48 h。制成种菌备用。
21214 抑菌试验
在超净工作台上将灭菌后的肉汤蛋白胨培养基 ,倒入培养皿中 ,每皿 15 mL ,放置冷却。用无菌水洗
脱试管斜面种子菌制成种子菌液 ,无菌移液管取 013
mL 细菌液加于平皿中 ,玻璃推棒将菌液涂布均匀 ,制成带菌平板。用镊子将牛津杯放在平板上 ,依次在
各杯中加相应空白对照水或丙酮、乌桕叶提取物和分
离物各0125 mL。标记各皿和杯位号后 ,于32 ℃恒温
箱培养 48 h ,观察各皿菌落生长情况 ,并用游标卡尺
量取抑菌圈直径 ,记录数据。
用011 mol L 的 NaOH 调结籽鸡爪桕叶 3 种溶
剂提取物溶液至 pH 710～712 ,然后将未调自然 pH
的原提取液加消耗碱液等体积的蒸馏水 ,同上进行抑
菌试验。
21216 统计分析
表1 和表 2 数据为 3 次重复的平均值加标准差
( ? x ±s) ,显著性检验用 t 测验法[6 ]。
表 1 不同种质乌桕叶提取物对大肠杆菌的
抑制作用(抑菌圈直径, cm)
材料名称 热水提取物 70 %乙醇浸提物 乙酸乙酯浸提物
山乌桕 1165 ± 01023 1130 ± 01046 1106 ± 01065
无籽鸡爪桕 1172 ± 01104 1149 ± 01108 1135 ± 01049
结籽鸡爪桕 1143 ± 01050 1176 ± 01055 1136 ± 01081
赣 4 鸡爪桕 1171 ± 01147 1168 ± 01070 1114 ± 01210
玉山大粒铜锤桕 1162 ± 01046 1197 ± 01055 0180 ± 01000
赣 3 长穗葡萄桕 1179 ± 01040 1131 ± 01064 0180 ± 01000
赣 2 狗尾桕 1179 ± 01072 1134 ± 01025 0180 ± 01000
广西蜈蚣桕 1166 ± 01047 1183 ± 01164 1129 ± 01134
广西疏果桕 1179 ± 01012 1158 ± 01074 0180 ± 01000
云南铜锤桕 1129 ± 01173 1136 ± 01061 1121 ± 01057
浙江铜锤桕 1157 ± 01040 1118 ± 01032 1101 ± 01056
赣 1 铜锤桕 1168 ± 01105 1135 ± 01042 0198 ± 01026
大粒葡萄桕 1164 ± 01082 1119 ± 01076 1100 ± 01026
苯甲酸钠 1110 ± 01144 1110 ± 01144 1110 ± 01144
水对照 0180 ± 01000 0180 ± 01000 0180 ± 01067
表 2 不同种质乌桕叶提取物对金黄色葡萄球菌
的抑制作用(抑菌圈直径, cm)
材料名称 热水提取物 70 %乙醇浸提物 乙酸乙酯浸提物
山乌桕 2127 ± 01259 1178 ± 01110 1158 ± 01045
无籽鸡爪桕 2110 ± 01242 1162 ± 01075 1156 ± 01101
结籽鸡爪桕 1185 ± 01114 1181 ± 01119 1148 ± 01151 ......
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