油茶总RNA及mRNA的分离与纯化.pdf
http://www.100md.com
2006年2月23日
第1页 |
参见附件(130KB,3页)。
第 2 3卷 第 2期
·
2 0 0 3年 4月
中 南 林 学 院 学 报
J OURNAL OF CENTRAL S OUTH F ORESTRY UNI VERS I TY
Vo l 23 No.2
Apr . 2003
[ 文章_号]1 0 0 0 —2 5 0 2 ( 2 0 0 3 ) 0 2 - -0 0 7 6 —0 3
油茶总 RNA及 mRNA的分离与纯化
张 智俊 , 谭 晓风 , 陈永忠。
( 1 .中膏林 学 冀经济 韩膏 种 与藏培 国采林 业局 重点 实验室 ,湖南 株洲 4 1 2 0 0 6t 2 .湖南 省林 科院 ,湖南 长抄 4 1 2 0 0 0 )
[ 摘 要] 利用馥良的C TA B法· 从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总R N A· 并从总R NA中, 通过两次过O l i g o ( d T)
柱 分离纯 化得 剜 mRNA· 实 验结果 证 明 z 所 提取 的 R NA和 mRNA完 整 , 质量较 高 , 并 应用 到 油茶 c DNA 文库 的构 建·
[ 关奠词] 经浙林· 油茶I R NAl mR N A}分离与纯化
[ 中田分类号] 7 9 4 . 4 [ 文献标识码] A
I s o l a t i o n a n d Pu r i f i c a t i o n o f To t a l RNA a n d mRNA f r o m Ca me l l i a o l e i f e r a
ZHANG Z h i — j u n ,TAN Xi a o — f e n g ,CHENG Yo n g — z h o n g 。
( 1 .Th e Ke y La bo r a t o r y of No n - t i mbe r For e s t Tr e e B r e e di n g a nd Cu l t i v a t i o n of Na t i o n a l For e s t r y Mi n i s t r y.
Ce n t r a l S ou t h For e s t r y Uni v e r s i t y·Zh uz ho u 4 1 2 0 0 6,Hun a n·Chi n a;2.For e s t r y Ac ad e my o f Hun a n·Ch a ng s h a,Hu n a o.Chi n a)
Ab s t r a c t ;B y u s i n g t h e mo d i f i e d CTAB me t h o d ·t o t a l RNA wa s i s o l a t e d f r o m C a me l l i a o l e i f e r a l e a v e s r i c h i n s u c h s e c o n d a r y
p r o du c t s a s po l yp h on e s a n d p ol yme r i c c a r bo h yd r a t e 3a n d t h e n mRNA wa s i s ol a t e d a nd p u r i f i e d t hr o ug h d ou b l e 3 e l e c t i on s us i ng ol i g o
( dT)c e I l u l o s e .The r e s ul t s s h o w t h a t t he o bt a i ne d RNA a nd mRNA ar e of h i g h qu a l i t y a n d c a n b e us e d f or t h e c o ns t r u c t i o n of a
c DNA l i br a r y.
Ke y wo r d s :n o n - t l mb er f o r e s t s Ca me l l i a o [ e i f e r a t o t a l RNA;mRNA~i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n
植 物 RNA提 取技术 是一项植 物分子生物 学基本实 验技术 , 是 RT— P C R、 c DNA 文库 构建 等进 一步 的分子
克隆- rC g的前提.目前 已建 立 了很 多 RNA 提取 方法D .常规提取 总 RNA 最常 用的是 Ch o mc z y n s k i 等提 出
的异硫氰酸 胍一 酚一 氯仿一 步法[ 1 ] , 从总 RNA 中分 离 mRNA 经典 的方法 是 Ol i g o ( d t ) 纤维 素柱 法. 虽 然对 大多
数 的植 物异硫 氰酸胍一 酚一 氯仿 一步 法都能得到质 量很好 的 RNA样 品, 但 对某些 富含多 酚、 多糖等 次生物 质 的
植物结果 并不很 理想. 另外 , 在获得 总 RNA 后 , 由于 mRNA 仅 占总 RNA 量 的 1 一5 , 加之 半衰 期短 易降
解, 往往导致要 分离纯化得 到高质量 mR NA 难度相对较大 , 其 成功 与否也关系到下一 步工作的成 败.
油茶 C a me l l i a o l e i f e r a是世界上四大木本油料树种之一, 同其它山茶属植物一样, 体内含有蛋白质、 酚类、多 糖、 单 宁 、 茶皂 甙、 鞣 质 、 生 物 碱 等 复 杂 物质[ 6 ] , 造 成 RNA 提 取 的 困难. 针 对 此 问 题 , 本 研 究 采 用 改 良 的
C TA Bt 法除去多糖 、 多 酚, 成功地从 富含次生物 质的油茶 叶片 中提取 了总 RNA, 并通过 Ol i g o ( d t ) 纤 维素柱
分离得 到 了油茶 的 mRNA.
1 材料与方法
1 . 1 材 料
实验材料是中南林 学院经济林育种与栽培 国家林业局重点实验室培育的普通油茶湘林 4号的组 培苗叶 片.
1 . 2 方 法
1 . 2 . 1 油茶总 RNA的分离
称取组培苗叶片 0 . 2 g , 液氮中研磨成粉末 , 加入 0 . 8 mI ,抽提液缓 冲液 S o l u t i o n l ( 2 % C TAB, 2 P VP, I O O
[ 收疆 日期]2 0 0 3 - 0 1 — 0 3
[ 基盒项 目]教育部骨干教师资助课题。 油茶c D N A文库构建及探针筛选” 项目的部分内容.
[ 作者简介]张智俊( 1 9 7 4 一) . 男. 甘肃武戚人. 博士研究生. 现主要从事林木分子生物学研究.
维普资讯 http:www.cqvip.com 第 2期 张智 俊等 : 油茶 总 RNA 及 mRNA 的分 离 与纯 化 7 7
mmo [ Tr i s HCl , 2 5 mmo [EDTA ......
·
2 0 0 3年 4月
中 南 林 学 院 学 报
J OURNAL OF CENTRAL S OUTH F ORESTRY UNI VERS I TY
Vo l 23 No.2
Apr . 2003
[ 文章_号]1 0 0 0 —2 5 0 2 ( 2 0 0 3 ) 0 2 - -0 0 7 6 —0 3
油茶总 RNA及 mRNA的分离与纯化
张 智俊 , 谭 晓风 , 陈永忠。
( 1 .中膏林 学 冀经济 韩膏 种 与藏培 国采林 业局 重点 实验室 ,湖南 株洲 4 1 2 0 0 6t 2 .湖南 省林 科院 ,湖南 长抄 4 1 2 0 0 0 )
[ 摘 要] 利用馥良的C TA B法· 从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总R N A· 并从总R NA中, 通过两次过O l i g o ( d T)
柱 分离纯 化得 剜 mRNA· 实 验结果 证 明 z 所 提取 的 R NA和 mRNA完 整 , 质量较 高 , 并 应用 到 油茶 c DNA 文库 的构 建·
[ 关奠词] 经浙林· 油茶I R NAl mR N A}分离与纯化
[ 中田分类号] 7 9 4 . 4 [ 文献标识码] A
I s o l a t i o n a n d Pu r i f i c a t i o n o f To t a l RNA a n d mRNA f r o m Ca me l l i a o l e i f e r a
ZHANG Z h i — j u n ,TAN Xi a o — f e n g ,CHENG Yo n g — z h o n g 。
( 1 .Th e Ke y La bo r a t o r y of No n - t i mbe r For e s t Tr e e B r e e di n g a nd Cu l t i v a t i o n of Na t i o n a l For e s t r y Mi n i s t r y.
Ce n t r a l S ou t h For e s t r y Uni v e r s i t y·Zh uz ho u 4 1 2 0 0 6,Hun a n·Chi n a;2.For e s t r y Ac ad e my o f Hun a n·Ch a ng s h a,Hu n a o.Chi n a)
Ab s t r a c t ;B y u s i n g t h e mo d i f i e d CTAB me t h o d ·t o t a l RNA wa s i s o l a t e d f r o m C a me l l i a o l e i f e r a l e a v e s r i c h i n s u c h s e c o n d a r y
p r o du c t s a s po l yp h on e s a n d p ol yme r i c c a r bo h yd r a t e 3a n d t h e n mRNA wa s i s ol a t e d a nd p u r i f i e d t hr o ug h d ou b l e 3 e l e c t i on s us i ng ol i g o
( dT)c e I l u l o s e .The r e s ul t s s h o w t h a t t he o bt a i ne d RNA a nd mRNA ar e of h i g h qu a l i t y a n d c a n b e us e d f or t h e c o ns t r u c t i o n of a
c DNA l i br a r y.
Ke y wo r d s :n o n - t l mb er f o r e s t s Ca me l l i a o [ e i f e r a t o t a l RNA;mRNA~i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n
植 物 RNA提 取技术 是一项植 物分子生物 学基本实 验技术 , 是 RT— P C R、 c DNA 文库 构建 等进 一步 的分子
克隆- rC g的前提.目前 已建 立 了很 多 RNA 提取 方法D .常规提取 总 RNA 最常 用的是 Ch o mc z y n s k i 等提 出
的异硫氰酸 胍一 酚一 氯仿一 步法[ 1 ] , 从总 RNA 中分 离 mRNA 经典 的方法 是 Ol i g o ( d t ) 纤维 素柱 法. 虽 然对 大多
数 的植 物异硫 氰酸胍一 酚一 氯仿 一步 法都能得到质 量很好 的 RNA样 品, 但 对某些 富含多 酚、 多糖等 次生物 质 的
植物结果 并不很 理想. 另外 , 在获得 总 RNA 后 , 由于 mRNA 仅 占总 RNA 量 的 1 一5 , 加之 半衰 期短 易降
解, 往往导致要 分离纯化得 到高质量 mR NA 难度相对较大 , 其 成功 与否也关系到下一 步工作的成 败.
油茶 C a me l l i a o l e i f e r a是世界上四大木本油料树种之一, 同其它山茶属植物一样, 体内含有蛋白质、 酚类、多 糖、 单 宁 、 茶皂 甙、 鞣 质 、 生 物 碱 等 复 杂 物质[ 6 ] , 造 成 RNA 提 取 的 困难. 针 对 此 问 题 , 本 研 究 采 用 改 良 的
C TA Bt 法除去多糖 、 多 酚, 成功地从 富含次生物 质的油茶 叶片 中提取 了总 RNA, 并通过 Ol i g o ( d t ) 纤 维素柱
分离得 到 了油茶 的 mRNA.
1 材料与方法
1 . 1 材 料
实验材料是中南林 学院经济林育种与栽培 国家林业局重点实验室培育的普通油茶湘林 4号的组 培苗叶 片.
1 . 2 方 法
1 . 2 . 1 油茶总 RNA的分离
称取组培苗叶片 0 . 2 g , 液氮中研磨成粉末 , 加入 0 . 8 mI ,抽提液缓 冲液 S o l u t i o n l ( 2 % C TAB, 2 P VP, I O O
[ 收疆 日期]2 0 0 3 - 0 1 — 0 3
[ 基盒项 目]教育部骨干教师资助课题。 油茶c D N A文库构建及探针筛选” 项目的部分内容.
[ 作者简介]张智俊( 1 9 7 4 一) . 男. 甘肃武戚人. 博士研究生. 现主要从事林木分子生物学研究.
维普资讯 http:www.cqvip.com 第 2期 张智 俊等 : 油茶 总 RNA 及 mRNA 的分 离 与纯 化 7 7
mmo [ Tr i s HCl , 2 5 mmo [EDTA ......
您现在查看是摘要介绍页,详见PDF附件(130KB,3页)。
闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閸濄儮鍋撳鐓庡籍鐎规洘绻堥獮鎺楀籍閸ヮ灝鈥愁渻閵堝棗绗掗悗姘煎墰閳ь剚鑹鹃ˇ閬嶅焵椤掆偓缁犲秹宕曢柆宥呯疇閹兼惌鐓夌紞鏍煏閸繍妲归柣鎾存礋閺屻劌鈹戦崱妤佹婵犵鈧偨鍋㈤柟顔荤矙椤㈡稑顫濋鐐寸亷闁诲氦顫夊ú妯兼崲閸岀偛鐓″璺猴功閺嗭箓鏌涢妷銏℃珦婵℃煡顥撶槐鎾诲磼濮橆兘鍋撻幖浣哥柈妞ゆ牜鍋涢崹鍌滄喐閻楀牆绗氶柛瀣枑閵囧嫰寮介顫勃闂佺粯甯$粻鏍蓟閺囩喓绠鹃柛顭戝枛婵酣姊虹拠鍙夊攭妞ゆ泦鍡楃倒闂備焦鎮堕崕鑽ゅ緤閼恒儲娅犻柟缁樺础瑜版帗鍋傞幖娣灩濞堟鎮楃憴鍕┛缂傚秳绶氶妴渚€寮崼婵堫槰濡炪倕绻愬ú銊х不閺屻儲鈷掑ù锝堟鐢盯鏌eΔ浣圭闁伙絿鍏橀、妤呭磼濠婂懎顦╅梻浣虹帛閸旓箓宕滃▎鎿冩晪閺夊牄鍔嶉崣蹇旀叏濡も偓濡鏅堕鐐寸厱闁绘ê寮堕崵鍥煛瀹€鈧崰鎾诲焵椤掍胶鈯曞畝锝嗗閺呭爼顢楁担铏圭槇闂侀€炲苯澧柟宄版嚇瀹曠兘顢樺☉娆戜簷闂傚倷绶氶埀顒傚仜閼活垱鏅舵导瀛樼厓鐟滄粓宕滃┑瀣剁稏濠㈣泛饪村ḿ鈺呮煏婵炲灝濡烽柛娆撶畺濮婄粯鎷呴崨濠傛殘闁汇埄鍨辩敮鎺曠亱濠电偞鍨惰彜闁哄妫冮弻鐔衡偓娑欋缚婵″洭鏌$€n偆澧甸柡灞炬礃缁绘盯宕归鐓庮潛闂備礁鎼崐鐢稿磻閹炬枼鏀介柣鎰摠缂嶆垿鏌涘顒夊剶闁硅櫕绻冮妶锝夊礃閵娧呮瀫闂備礁鎲¢崝姗€藟閸℃瑦鍠嗛柛鏇ㄥ墮椤庢挾绱撴担鍦槈妞ゆ垵妫涚槐鐐茬暆閸曨兘鎷洪梻鍌氱墛缁嬫帡鏁嶉弮鍫熺厵闁告垯鍊栫€氾拷
婵犵數濮甸鏍窗濡ゅ啯宕查柟鐗堟緲缁狀垶鏌ㄩ悤鍌涘 pdf闂傚倸鍊烽懗鑸电仚缂備浇顕ч悧鎾崇暦濠靛棭鍚嬪璺猴工閸ゆ垿姊虹捄銊ユ珢闁瑰嚖鎷� 闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹缁嬫5娲偐鐠囪尙锛涢梺鐟板⒔缁垶宕戦敓鐘崇厸闁搞儲婀圭花濂告倵濮樼偓瀚� 5 缂傚倸鍊搁崐椋庣矆娓氣偓钘濆ù鐘差儏閸ㄥ倸霉閸忓吋缍戦柛銊ュ€块獮鏍庨鈧俊浠嬫煛閸滀礁澧撮柡灞剧洴椤㈡洟鏁愰崶鈺冩殼闂佹眹鍩勯崹杈ㄧ箾婵犲洤绠栫憸鐗堝笒缁犳稒銇勯弽鐢电ɑ缂傚秴鐗撳鐑樻姜閹峰苯鍘¢梺绋款儍閸婃洟鎮惧畡鎷旂喖鎼圭憴鍕暦闂備線鈧偛鑻晶顕€鏌嶇拠鑼у┑锛勫厴婵℃悂鏁愰崟顒傛綎闂傚倷绀侀幖顐⒚洪妸鈺佺;闁绘劕鎼壕褰掓煥閻曞倹瀚�婵犵數濮甸鏍闯椤栨粌绶ら柣锝呮湰瀹曟煡鏌熼悧鍫熺凡濡楀懏绻濋姀锝呯厫闁告梹娲熼幆灞轿旀担鍏哥盎闂佸搫绉查崝搴ㄥ箠娴h櫣纾奸柕濠忛檮缁舵煡鎽堕悙鐑樼厸濠㈣泛顑呴婊勩亜閵夛妇鐭岄柟鎻掓憸閺侇噣顢欓挊澶樹紦10濠电姷鏁搁崑鐐哄垂閸洖绠归柍鍝勫€婚々鏌ユ煟閹邦剛浜柛娆撶畺濮婄粯鎷呴崨濠傛殘闁汇埄鍨兼禍顏堢嵁韫囨稒鏅搁柨鐕傛嫹闂傚倸鍊烽悞锔锯偓绗涘懐鐭欓柟娆¤娲、姗€濮€閻橀潧濮︽俊鐐€栫敮鎺楁晝閵壯€鍋撳鐐
闂備礁鎼崐绋棵洪妸鈺傚仧闁绘垼濮ら崑瀣煕椤愩倕鏋戠紓宥佸亾闂佽绻掗崑鐔煎磻濡壈濮虫い鎺戝閸屻劑鏌i弮鍌滃笡闁哥喎鐏濋湁闁挎繂妫涢惌瀣箾閻撳海澧涚紒鍌氱Ч閹喚鈧潧鎽滈ˇ顕€姊洪崗鑲╂菇闁稿孩鐓″畷鎴濐吋閸ャ劌顎涢梺闈涚墕鐎氼垳绮堢€n偅鍙忔繝闈涘閳ь剚鐗犲鎼佸礃閳哄啠鏋栭悗骞垮劚閹虫劙寮惰ぐ鎺撳仩婵ḿ鍘ф禍婵嬫煛娴d警鏀伴柕鍥ㄥ姍瀵潙顫濇潏顐ょ濠电姰鍨归悥銏ゅ礃閹勬珒闂備胶枪缁绘劗绮旈悜钘夊瀭闁稿瞼鍋為埛鎾绘煕濞戙垹浜伴柛銈冨灲閺屻劌鈽夊Ο鑲╁姰濡炪倖娲﹂崜鐔煎蓟閸ヮ剦鏁婄紓浣癸供閸嬨劑姊洪悷鎵憼闁绘绮撳顐﹀传閵夛箑鐝板┑鐘绘涧椤戝倿宕戦幘鎰佹僵閺夊牃鏅涘銊╂⒑閻熸壆鎽犻柛銊ュ暱楗即骞嬮敂鑺ユ珫闁诲繒鍋為崕鎶芥倶婢跺⊕褰掓偑閳ь剟宕滃璺烘瀬鐟滅増甯掔粈鍡椕归懖鈺勊夐柛瀣尭椤繃娼忛埡浣哥哗闂備礁鎲¢懝楣冨礄閻e本顫曟繝闈涙搐椤曡鲸鎱ㄥΟ澶稿惈鐟滄澘鐭傞弻娑樜旈埀顒勫疮閸ф鍎嶉柕蹇嬪€曠粻鏍煏婵炑冨閺嗙姵绻涙潏鍓хɑ缂侇喖鐭傞獮鏍槼缂佸倹甯楅幆鏃堝閳╁啫顏扮紓鍌氬€搁崯顖炲垂瑜版帗鍋熸い鏍仜缁€鍡涙煟濡偐甯涢柣婵堝枛閺屾洟宕遍鐔奉伓