中药材鳖甲的位点特异性PCR鉴定研究.PDF
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2006年2月23日
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参见附件(130KB，3页)。
·药材
中药材鳖甲的位点特异性PCR 鉴定研究
刘忠权, 王义权, 周开亚a
(南京师范大学遗传资源研究所, 江苏 南京 210097)
摘 要: 目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲DNA 分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动
物的 12S rRNA 基因片段的序列数据库, 找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点, 设计 1 对能特异性鉴别
中华鳖的引物, 然后利用鳖甲中残存的DNA , 通过PCR 扩增, 即可准确鉴别鳖甲。 结果 用这对引物对不同来源的
10 块鳖甲进行鉴定结果表明, 其中有 3 块为伪品, 结果与DNA 序列分析鉴定一致。还测定了斑鼋和鳖甲一伪品
12S rRNA 基因片段序列。结论 该引物配置药材鉴定试剂盒可在鳖甲类药材鉴定使用。
关键词: 鳖甲; 位点特异性引物; 鉴别PCR,中图分类号: R282174013 文献标识码:A 文章编号: 0253 2670 (2001) 08 0736 03
Authen t ica t ion of TCM Ca rap ax Tr ionycis by a llele- spec if ic
diagnost ic polymera s cha in react ion
L IU Zhong2 quan, WAN G Yi2 quan, ZHOU Kai2 ya
( Inst itute of Genet ic Resources, N anjing No rmalU niversity, N angjing J iangsu 210097, Ch ina)
Abstract : Object To develop a conven ien t and p ract ical m ethod fo r the iden t if icat ion of Ca rap ax
T riony cis1Methods Based on the sequence var iat ion s of 12S rRNA gene betw een P elod iscus sinensis and
o ther sof t shell tu r t les, a pair of allele2specif ic p r im ers w as designed to dist ingu ish P. sinensis f rom o ther
species of T r ionych idae . DNA w ere ex t racted and anp lif ied and Ca rap ax T riony cis cou ld be iden t if ied accu2
rately by po lym erase chain react ion (PCR ) u sing the p r im ers1 Results Ten samp les of tu r t le shell f rom
differen t sou rces w ere inden t if ied by the allele2specif ic PCR w ith the p r im ers1 The resu lt indicated that
th ree samp les w ere sub st itu tes of Ca rap ax T riony cis, con silien t w ith the resu lt f rom DNA sequence analy2
sis1 The m itochondr ial 12S rRNA gene f ragm en t of P. m acu la tus and a faked im itat ion had also been se-
quenced1 Conclus ion The p r im ers cou ld be u sed as key componen t s in Ca rap ax T riony cis iden t if icat ion
k it1
Key words: Ca rap ax T riony cis; allele2specif ic p r im er; diagno st ic po lym erase chain react ion (PCR )
早在《神农本草经》就有鳖甲可入药记载, 李时
珍在《本草纲目》中又增添了鳖甲的药用总结。1995
年版中国药典规定中药鳖甲为鳖科动物鳖 T riony x
sinensisW iegm ann 的背甲[ 1 ]
( T riony x sinensis 现为
P elod iscus sinensis
[ 2 ])。具有滋阴潜阳, 软坚散结, 退
热除蒸之功效。但药材原动物来源较复杂, 据报道伪
混品有山瑞鳖 P elea steind achneri (Sieben rock) 和
缘板鳖L issemy s p uncta ta (Bonnater re)以及鼋 P e2
lochely s bibron i (Ow en)的背甲[ 3, 4 ]
, 由于药材进口,鳖甲的商品药材来源可能还要复杂一些。鳖甲传统
鉴定主要依据药材性状, 粉末特征及组织结构等形
态学特征[ 3 ]。由于传统鉴定方法与鉴定者的经验有
关, 受主观影响程度较大。为寻找新的鉴定方法, 王
亚明等首次从药材鳖甲中抽提出DNA 并扩增约
500bp 的线粒体Cyt b 基因片段[ 5 ]; 吴平等从中华鳖
和山瑞鳖原动物组织材料中提取DNA , 扩增约110
bp 的线粒体 12S rRNA 基因片段并测序, 结果表
明, 中华鳖与其它 2 种鳖科动物的这段DNA 序列
有明显差异[ 6 ]
, 从而达到鉴定鳖甲原动物的目的。然
而DNA 测序成本高, 技术复杂, 实际应用有困难。
本文根据已有的中华鳖和鳖甲混淆品原动物山
瑞鳖、缘板鳖的12S rRNA 基因片段的序列数据库,以及测定的斑鼋该段序列, 经对位排列, 找出中华鳖
与其它鳖有明显区别的位点, 设计 1 对能特异性鉴
· 637 · 中草药 Ch inese T radit ional and HerbalD rugs 2001 年第 32 卷第 8 期
a 收稿日期: 2000211210
基金项目: 国家自然科学基金(No139870913)、江苏教委科学基金(98KJB360010)和江苏省“333 工程”人才培养基金资助 作者简介: 刘忠权(19632) , 男, 江苏兴化市人, 副教授, 博士生。分别在《P lantaM edica》、《药学学报》、《中草药》等刊物上发表论文10 多篇。 现从事动物分子生物学和中药材分子鉴定等研究工作。
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.定中华鳖的引物, 然后利用鳖甲中残存的DNA , 通
过PCR 扩增, 即可准确鉴别鳖甲 ......
中药材鳖甲的位点特异性PCR 鉴定研究
刘忠权, 王义权, 周开亚a
(南京师范大学遗传资源研究所, 江苏 南京 210097)
摘 要: 目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲DNA 分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动
物的 12S rRNA 基因片段的序列数据库, 找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点, 设计 1 对能特异性鉴别
中华鳖的引物, 然后利用鳖甲中残存的DNA , 通过PCR 扩增, 即可准确鉴别鳖甲。 结果 用这对引物对不同来源的
10 块鳖甲进行鉴定结果表明, 其中有 3 块为伪品, 结果与DNA 序列分析鉴定一致。还测定了斑鼋和鳖甲一伪品
12S rRNA 基因片段序列。结论 该引物配置药材鉴定试剂盒可在鳖甲类药材鉴定使用。
关键词: 鳖甲; 位点特异性引物; 鉴别PCR,中图分类号: R282174013 文献标识码:A 文章编号: 0253 2670 (2001) 08 0736 03
Authen t ica t ion of TCM Ca rap ax Tr ionycis by a llele- spec if ic
diagnost ic polymera s cha in react ion
L IU Zhong2 quan, WAN G Yi2 quan, ZHOU Kai2 ya
( Inst itute of Genet ic Resources, N anjing No rmalU niversity, N angjing J iangsu 210097, Ch ina)
Abstract : Object To develop a conven ien t and p ract ical m ethod fo r the iden t if icat ion of Ca rap ax
T riony cis1Methods Based on the sequence var iat ion s of 12S rRNA gene betw een P elod iscus sinensis and
o ther sof t shell tu r t les, a pair of allele2specif ic p r im ers w as designed to dist ingu ish P. sinensis f rom o ther
species of T r ionych idae . DNA w ere ex t racted and anp lif ied and Ca rap ax T riony cis cou ld be iden t if ied accu2
rately by po lym erase chain react ion (PCR ) u sing the p r im ers1 Results Ten samp les of tu r t le shell f rom
differen t sou rces w ere inden t if ied by the allele2specif ic PCR w ith the p r im ers1 The resu lt indicated that
th ree samp les w ere sub st itu tes of Ca rap ax T riony cis, con silien t w ith the resu lt f rom DNA sequence analy2
sis1 The m itochondr ial 12S rRNA gene f ragm en t of P. m acu la tus and a faked im itat ion had also been se-
quenced1 Conclus ion The p r im ers cou ld be u sed as key componen t s in Ca rap ax T riony cis iden t if icat ion
k it1
Key words: Ca rap ax T riony cis; allele2specif ic p r im er; diagno st ic po lym erase chain react ion (PCR )
早在《神农本草经》就有鳖甲可入药记载, 李时
珍在《本草纲目》中又增添了鳖甲的药用总结。1995
年版中国药典规定中药鳖甲为鳖科动物鳖 T riony x
sinensisW iegm ann 的背甲[ 1 ]
( T riony x sinensis 现为
P elod iscus sinensis
[ 2 ])。具有滋阴潜阳, 软坚散结, 退
热除蒸之功效。但药材原动物来源较复杂, 据报道伪
混品有山瑞鳖 P elea steind achneri (Sieben rock) 和
缘板鳖L issemy s p uncta ta (Bonnater re)以及鼋 P e2
lochely s bibron i (Ow en)的背甲[ 3, 4 ]
, 由于药材进口,鳖甲的商品药材来源可能还要复杂一些。鳖甲传统
鉴定主要依据药材性状, 粉末特征及组织结构等形
态学特征[ 3 ]。由于传统鉴定方法与鉴定者的经验有
关, 受主观影响程度较大。为寻找新的鉴定方法, 王
亚明等首次从药材鳖甲中抽提出DNA 并扩增约
500bp 的线粒体Cyt b 基因片段[ 5 ]; 吴平等从中华鳖
和山瑞鳖原动物组织材料中提取DNA , 扩增约110
bp 的线粒体 12S rRNA 基因片段并测序, 结果表
明, 中华鳖与其它 2 种鳖科动物的这段DNA 序列
有明显差异[ 6 ]
, 从而达到鉴定鳖甲原动物的目的。然
而DNA 测序成本高, 技术复杂, 实际应用有困难。
本文根据已有的中华鳖和鳖甲混淆品原动物山
瑞鳖、缘板鳖的12S rRNA 基因片段的序列数据库,以及测定的斑鼋该段序列, 经对位排列, 找出中华鳖
与其它鳖有明显区别的位点, 设计 1 对能特异性鉴
· 637 · 中草药 Ch inese T radit ional and HerbalD rugs 2001 年第 32 卷第 8 期
a 收稿日期: 2000211210
基金项目: 国家自然科学基金(No139870913)、江苏教委科学基金(98KJB360010)和江苏省“333 工程”人才培养基金资助 作者简介: 刘忠权(19632) , 男, 江苏兴化市人, 副教授, 博士生。分别在《P lantaM edica》、《药学学报》、《中草药》等刊物上发表论文10 多篇。 现从事动物分子生物学和中药材分子鉴定等研究工作。
? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.定中华鳖的引物, 然后利用鳖甲中残存的DNA , 通
过PCR 扩增, 即可准确鉴别鳖甲 ......
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