经济林研究 2 0 0 4 ，2 2( 2 ) ： 5 3 — 5 5

    油茶种子 e D NA文库构建中的问题与对策

    石 明旺 。 ，谭 晓风 ，王义强 ，胡芳 名

    ‘ 1 .中南林 学院经 济林 育种 与栽 培国 家林业 局重点 实验 室 湖南 株洲 ， 4 1 2 0 0 6； 2 . 河南 科技 学院 河南 新 乡. 4 5 3 0 0 3 )

    [ 摘 要]以湘林1号和湘林. 1 号油茶优良无性系近成熟种 为材料. 总结了构建油茶种子c D N A文库过程中存在的一些关键问题

    和应 采取 的对 策. 为今 后油 茶和其 它 油料植 物种 子的 mRNA提 取 、 构建 高质量 的 e DNA文 库及 E S T s文库 等提供 技 术参 考和理 论指

    导 。

    [ 关键词]经济林； 油茶； c D NA； m R N A； 文库构建

    [ 中图分类号] 7 9 1 . 4 1 [ 文献标识码]A [ 文章编号]1 0 0 3 ～8 9 8 1 ( 2 0 0 4 ) 0 2 —0 0 5 3 0 3

    Qu e s t i o n a n d S o l u t i o n o f Co n s t r u c t i o n c DNA Li b r a r y f r o m

    S e e d o f C a me l l i a o l e i f e r a

    SHI M i ng— W ang ， FAN Xi a o— Fe ng ，W ANG Y.i — Qi a n g .HU F a n g — Mi n g

    (1 .The Ke y La bor a t or y of Nonwoo d For e s t r y Tr e e Br e e di ng and Cul t i v at i on of Na t i ona l For e st r y Mi ni s t r y.CSFU .

    Z hu z ho u 4 l 2 0 0 6 .Hu n a n.Chi n a；2 . S c i e n c e a n d Te c h n o l o g y I n s t i t u t e o f He n a n.Xi n x i a ng 4 5 3 0 0 2.He n a n.Ch i n a )

    Ab s t r ac t：The ke y que s t i ons and s ol ut i ons of e DNA Li br ar y c ons t r uct i on f r om t he appr oxi ma t el y r i p e s e e d of

    Came l l i a o l e m c ol l e c t e d f r om Xi angl i n 1 s t an d 4 t h.whi c h wer e exc el l e nt as e xual f or es t wer e s um mar i z ed. The

    t e c hn ol ogi c al r e f e r enc e a nd t he or et i ca l di r e ct i on f or i s ol at i n g t uRNA.a nd c ons t r u ct i on of c DNA a nd ESTs of Ca me l l i a

    o l e 知r d a n d o t h e r o i l pl a n t s we r e of f e r e d

    Ke y wo r d s：n o n wo o d f or e s t ：Ca me l l i a o l e i f e , ' a；e DNA；mRNA：l i b r a r y c o n s t r u c t i o n

    油茶 是原产于我国的优质木 本油料树种之一 ， 栽培历史悠久 ， 适 应性广 ， 茶油是优 质食用油 。 但有关油茶 的

    分子生物学 和重要基因分离克隆 的研究 未见文献报道 。为 了分离 克隆油茶种子 中与油脂合成有 关的关键酶基

    因， 并 为油茶和其它油脂植物遗传 改 良奠定物质基础 。 我们 以湘林 1号和湘林 4号油茶优 良无性 系近成熟的种

    子为材料 ， 构建 了油茶种子 油脂转 化高峰 期的 e DNA 文库 ， 对 c DNA 文库 构建过 程中存在 的一些关键 问题和

    相应对策进行 了总结 。

    1 油茶种子总 RNA的提取与 mRNA的分离

    构建高质量 的 e DNA文库 ， 是高效地 筛选 目的基 因的关键 。构建高质量 的 e DNA 文库的前提是提取 并分

    离出高质量的 mRNA。因此提取纯度高 、 完整性好 的 mRNA 就成为构建 e DNA 文库流程 中的核心步骤 ， 直接

    关系到文库构建成败和文库质 量L 1 一 。

    1 . 1 油茶种子选择

    油茶 种子 RNA 提取 和 mRNA 分离的方法与其它植物 种子 RNA 提取 和 mRNA 分离的方法基本相同 ， 但

    由于油茶近成熟 种子含油量较高 ， 取材 的时期成 为一个 十分关键 的步骤 。 油茶种子 油脂转 化主要于 8 ～1 0月 份

    进行 ， 9月 中下旬 是转 化的高峰期 。我们在 9月下旬取材 ， 此时种子 中已经开始脂类转 化 ， 但整个种 仁含油量 不

    高 ， 种仁中活细胞多 ， 可以减少 油脂对提取 RNA 的影 响。而成熟的种子含油多 ， 对 RNA提取不利 。此次构建

    [ 收稿 日期 ]2 f I 1 ) J _ f 】 _ 3l 2

    [ 基金项目1国家自然科学基 资助课题“ 油茶E S T文库构建及重要基因的分离t j 鉴定” ： 教育部骨1 ： 教师资助课题 油荣 D NA文库掏

    建及探针 筛选 ” 项 目的部 分内容 ......