第 3 0卷 第 2期

    2 0 0 3年 6月

    福 建 林 业 科 技 J o u r o f F u j i a n F o r e s t r y S c i a n d Te e h

    V0 1 . 3 0 No. 2

    J u n. ，2 0 0 3

    油茶随机扩增多态 DN A条件的研究

    张 云 ， 黄儒珠 ， 刘大林 ， 齐清琳 ， 刘 国敏 ， 叶 锋

    ( 1 .福建师范大学生物工程学院， 福建 福州 3 5 0 0 0 7；2.福建省林业厅，福建 福州 3 5 0 0 0 3；3 .福建闽侯桐 口国有林场， 福建 闽侯 3 5 0 1 0 0 )

    摘要： 以改进的C T A B法提取油茶嫩叶总D N A ， 进行随机扩增多态D N A ( R A P D ) 分析， 分别测试了Md 浓度、 引物浓度、d NT P浓度、 模板 D NA浓度和 T a q DN A聚合酶 用量对反应结果的影响， 确定了油茶 R A P E ) 分析 的最适反应体 系： 在

    2 5 v . I P C R反应体积中， 含 2 0 r i g模板 D N A， 2 . 5 r et oo l · L —Mg C 1 2 ， 0 . 2 m mo l · L～d N TP ， 0 . 3 ~ mo l · L - 1 引物， 1 U T a q DN A聚合

    酶。扩增程序为： 9 4 ℃预变性 1 8 0 s ； 9 4 ℃变性 6 0 s ， 3 7 C退火 9 0 s ， 7 2 C延伸 1 2 0 s ， 反应 4 0个循环； 最后在 7 2 C延伸 5 mi n 。

    关键词： 油茶； 随机扩增多态 DN A； 反应条件

    中图分类号： 7 9 4 . 4 文献标识码： A 文章编号：1 0 0 2 —7 3 5 1 ( 2 0 0 3 ) 0 2 —0 0 0 5 —0 4

    S t u d y o n t h e Ra n d o m Amp l i f i e d Po l y mo r p h i c DNA Co n d i t i o n o f Ca me l l i a o l e i f e r a

    ZHANG Yu n ， HUANG RQ - z hu 1 , LI U va - n n2 ，QI Qi l l g - l i n 2 ， L I U Gu o - mi n 3 ， YE Fe n 8 3

    ( 1 . T h e Oi o c n g i n e ~i n g Co l l e g e o fFu j i a a No r ma l U n i v e r s i t y， Fu z h o u 3 5 0 0 0 7 ， C h i n a；2. Fu j i a n Fo r e s t r y De p a r t mmt ，Fu r . 1 mu 3 5 0 0 0 3 ， C h i n a ；3. T o n g k o u Na t i o n a l Fo r at Fa r m o ，Mi n h o u， Fu j i a n， Mi n h o u 3 5 0 1 0 0 ， )

    Ab s t r a c t ： Th e C ame l l i a o l c i f c r a s u i t a b l e r e a c t i o n s y s t e m a n a l y s 硝 b yRAPDwa s d e t e r mi n e d a sf oU o wa ： 2 5 o fP CR r e a c ti o n v o l —

    m e c o n t a i n e d 2 0 n g o f t e m p l a t e DNA， 2. 5 mmo l · L～ o f Mg Cl z ， 0. 2 mmo l · L～ o f d NTP， 0. 3 a n o l · L～ o f p r ime r ， a n d 1 U o f Ta q

    DNA y T n 啪 s e . Th e a u g r a e n t af i o n p r o c e d u r e wa s ： p r e - d e n a t u r a t i o n a t 9 4 C f or 1 8 0 s ； d e n a t u r a t i o n a t 9 4 ℃ f or 6 0 s ； a n n e a l i n g a t

    3 7 C f o r 90 s； e xt e n s i o n a t 72' ( 3 f or 1 20s ， r e ac t i o n of 40 c yc l e s ； a nd e xt e n s i o n a t 7 2 ( 3 f o r 5 mi nu t e s a t l a s t .

    Ke y wo r d s ： C a me l l i a o l df e r a； r a nd o m a mp l i f i e d p o l y mo r p h i c DNA； r e ac t i o n c on d i t i o n

    随机扩增多态 D NA( R a n d o m A mp l i f i e d P o l y mo r p h i c D NA) 是 9 0年代由J . G. Wi l l i a ms [ 】 和J . we l s h t ]

    等建立起来的一种独特的检测 D NA多态性 的技术， 由于其具有覆盖信息量几乎是无限的以及实验操作

    快速、 高效等优点， 在短短的十几年内被广泛应用于分类学、 物种亲缘关系、 品种识别、 特定性状分子标记

    以及基因定位、 遗传图谱构建等各个方面的研究。R A P D分析最适的扩增条件在不同的研究中存在一定

    差异， 这就要求对反应条件进行优化， 建立稳定可靠的反应体系， 以确保 能获得重复性 高的实验 结果 。油

    茶是我国四大木本油料树种之一， 栽培历史悠久。目前国内对油茶的研究主要集 中在生理生态 、 栽培技术

    等宏观水平上， 分子水平上的研究未见报道。应用分子生物学手段， 从分子水平上进行油茶种质资源鉴定

    和遗传背景分析具有重要 的理论和实践意义。本文就油茶 R A P D反应体系 中的 Mg 浓度 、 d NT P浓度、引物浓度、 模板 D NA浓度以及 T a q DN A聚合酶用量对反应结果 的影响进行研 究， 建 立了油茶 R AP D分

    析的最适反应体系， 为进一步分析油茶的多样性提供基础。

    1 材料和方法

    1 . 1 材料

    从 1 9 8 5年营建在闽侯桐口国有林场内的华南油茶良种工区的油茶杂交试验林筛选出的 3 2个杂优品

    系中随机抽取 1个品系闽 2 1 ， 剪取其带嫩叶的枝条， 置于封 口塑料袋中， 带 回实验室后 ， 将枝条插于盛清

    水的三 角瓶中保存。

    收稿日期：2 0 0 2—1 1 —0 8 ； 修回日期 ： 2 0 0 3—0 2 —2 4

    基金项目：福建省林业厅科技项目( C 2 0 0 2 0 4 1 )

    作者简介：张~( 1 9 7 8 一) ， 女， 福建福州人， 福建师大生物工程学院在读硕士生， 从事植物分子生物学研究。

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    1 . 2 模板 DN A的制备与定量

    从插枝上剪下嫩叶 ......