第 8卷第 4期

    1 9 9 1 年 1 2 月

    中 目 尊 f 拳 毒

    VI ROLOGI CA SI Nl CA

    VoI . 8 N . 4

    D ec. 1 991

    油桐尺蠖核型多角体病毒的空斑测定

    盟 壑 、 ，_

    ‘中国 科学 院 武汉 病 毒 武 ”

    疋

    提 要

    在 油 桐尺 蠖 卵 巢 细胞 系 上对 油 桐 尺 蠖 桉 型 多 角 体 病 毒 (B s NPV ) 进 行 了 空 珏 测定 。

    用此方 法测定 了B s NP V灼感 染力 ，并将所 得的 结果 与~T C I D l 进行比较， 结果显示这 两

    种 方 法 在 列定 病 毒感 染 力 对 敏感 性 相 似 。

    关键词 ：油桐尺蠖棱型多角体病 毒 空斑 罚 1 定 半 数组织 培养惑 染剂 量

    油桐 尺蠖核型 多角 体病毒 ( Bu z u r a s u p p r e s s a v i a n u c J e a p o l y b e d r o s i s v i r u s ，B s NP V) 是 七寸 年代末 在我 国发 现的。 它对 于茶园 和森 林的主 要害 虫之一 油 桐尺 蠖 具

    有较高的感染力和致死作用，所 以被作为病毒杀虫剂而受到重视，对它的一般生物学性

    质和生物化学性质进行了广泛的研究。本文报道在油桐尺蠖卵巢细胞系上对B s NP V进行

    的空斑测定 。

    材 料 和 方 法

    一

    、 细囊 油桐尺 蠖卵巢细胞系 B s - - 4 8 4 1 1 l ，培 养液为T C— l o o 2 n t 0嘶小牛血清。

    二 、龠毒 二种来 源：I . 直 接采取B s NP V 感 染的油 桐尺蠖 幼虫的血淋 巴，~2 5 0 0 r m离心2 s 分

    钟 ， 取 上清部分过滤除菌后置于 4℃ 保存特用 2 . B s NP V感 染的 组织培养 物， 经 2 5 0 8 r m 离心

    2 s 分钟，取 其上清保存于 4℃待用

    三、T CI D d 测定 在直径为0. 6 e m的 6 孔组织培养塑料 板 (C o s t a r ) 上 . 每 孔加入0 . i ml 细 胞 ，细胞浓度为5 ×1 0 个 ml 在2 4 小时 内， 将培 养液吸出， 每 孔加入0 . 0 5 ml 待测 赢毒 悬液 病 毒悬

    液 是用无血清TC — t O O 对病 毒原液 作工 0 。 - 倍连 续稀释 而得 ，共 1 2 个稀释度 ，每十稀释度 怍 8孔 。于

    2 6 ℃吸附3 小时后 ，每 孔加 入含1 0和小牛血 清的T c 一 1 0 0 0 . I m1 ，重放 A , 2 6 ℃培养 以细胞 接内出现

    多角体为病变特征 。所得 结果用Re e d — Mu e n e h 方法计算I .病毒 的瘟染力 阻T C I D E l m1 表 示 。

    四 、 空 斑 涮 定

    I . 1袖琼脂糖 营养覆 盖层 的制备：用无血清 的 TC — l o o 培 养液将 低 凝 点 琼 脂 糖 (si g ma

    Che mi c a 1 Co mp a ny产 品 ) 配 成 2嘶的溶 液 ， 8磅I S分钟 高 压 灭 菌. 特 冷 却 至4 0℃ 时 ， 与 预 先 在 4 0℃

    预热的含l 0呼 矗 ‘ 、 牛血清曲TC — t O 0 培养液等量混 占均句，即为l 舶琼脂糖 营养 覆盖层 。

    本文于 1 9 9 1 年3 月1 6 再救勤，1 9 9 1 年4 月4日修回。

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    第 4期 得志红等：油桐尺蠖榜型多角体病毒的空斑测定 341

    2. 空斑检 测：在2 4 孔组织培养塑料板 (1 6 mm，C o s t a r)中 ......