第29卷

    2001年7月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第7期

    796～798

    高效液相色谱2核磁共振仪联用技术

    在耐哌地尔杂质检测中的应用

    杨 春 司伊康 贺文义3

    (中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所 ,北京 100050)

    摘 要 用高效液相色谱2核磁共振(HPLC 2CNM)联用技术中的连续流动和停止流动两种模式对萘哌地

    尔中杂质进行检测 ,根据1

    HNMR ,1

    H21

    HCOSY谱完成了主要杂质 12萘环2丙三醇结构鉴定。HPLC 2NMR是

    解决合成药物中杂质结构确证的简便、快速方法。

    关键词 高效液相色谱2核磁共振 ,萘哌地尔

    2000208225收稿;2001201205接受

    本文系国家自然科学基金资助项目(No. 39870863)

    1 引 言

    随着核磁共振仪灵敏度的提高,抑制溶剂峰方法的成熟 ,高效液相色谱2核磁共振仪联用技术

    (HPLC2NMR)已广泛应用于药物代谢〔 1〕 和植物化学的研究中〔 2〕,为混合物的即时分离、鉴定提供了一种

    简便、快速、准确的方法。检测药物中的杂质是这一技术应用领域之一 ,这里报道采用 HPLC2NMR方法

    对杂质含量在9 %水平的药物杂质检测的结果。

    2 实验部分

    211 高效液相色谱

    所有的高效液相色谱采用Varian公司的 Prostar2230高效液相色谱仪 ,分析柱为 Inertsil ODS 23柱(4. 6

    I. D. × 250 mm ,5μm) 。萘哌地尔样品用乙腈溶解 ,浓度为5 g L。连续流动的进样量为20μ L ,停止流动

    的进样量为50μ L。检测器为Varian Prostar2330二极管阵列检测器 ,紫外检测波长为210 nm。HPLC分离

    条件为乙腈∶磷酸缓冲溶液 = 65∶ 35 (pH 7. 8～8. 0) 。

    212 核磁共振

    所有的图谱均在 INOVA2500核磁共振仪上完成。普通的1

    H NMR 测定采用选择开关探头 ,内标为

    TMS ,以 CDCl3 为溶剂 ,谱宽 6000Hz ,累加次数为 32 次。HPLC2NMR采用反相 60μ L 流动探头。WET脉

    冲序列抑制乙腈和重水的溶剂峰 ,同时抑制乙腈的卫星峰。高效液相色谱2核磁共振氢谱中以乙腈的溶

    剂峰δ2. 0为标准。 1

    H21

    H COSY图采用 WETCOSY脉冲序列 ,dl 弛豫延迟为1 s ,采样时间为0. 205 s ,F1 和

    F2 域谱宽皆为10000. 0Hz ,nt = 256 ,increment = 128 ,总采样时间为12 h。

    3 结果与讨论

    萘哌地尔是一种新型抗高血压药物。HPLC检测发现产物中存在一个主要杂质峰 ,含量为原型药物

    的910 %。为确证杂质的结构 ,采用 HPLC2NMR 联用技术中的连续流动模式对高效液相色谱分离的色

    谱峰进行连续监测。HPLC和1

    HNMR假二维图谱如图 1 所示。从图中观测到 t = 9. 50 min 时萘哌地尔

    的核磁信号在δ8. 5～6. 5和δ4. 5～2. 5区域 , 而 t = 5. 41 min时杂质的核磁信号在δ8. 2～6. 8和δ4. 8

    ～4. 2区域 ,后者的信号较弱 ,而其它杂质则几乎看不到有核磁共振信号。图中其他峰为乙腈和未完全

    氘代的重水信号 ......