苯溴马隆及其杂质的质量研究

    倪坤仪3 1

    于清峰1

    郁 建1

    周和林2

    屠树滋1

    1

    (中国药科大学 ,南京 210009) 2

    (武进制药厂 ,常州 213172)

    摘 要 建立了用 HPLC和 TLC两种方法测定新药苯溴马隆的杂质限量 ,以确保药物的质量。用反相 HPLC

    法 ,ODS柱 ,甲醇2水2冰醋酸(88∶ 12∶ 2. 5) (pH 3. 5)为流动相 ,检测波长 254 nm ,流速 1. 0 mLP min ,分离出两种主

    要杂质 ,其结构已确证 ,在国内外文献中均未见报道。在制定苯溴马隆质量标准时 ,已将所建立 RPHPLC法 ,作为该药物有关物质的测定方法。

    关键词 苯溴马隆 ,高效液相色谱法 ,薄层色谱法

    2001206208收稿;2001212205接受

    本文系国家医药管理局资助项目(962药203)

    1 引 言

    苯溴马隆是治疗痛风病的优良药物。随着人民生活水平的提高 ,痛风病发病率呈上升趋势。以前

    该药一直依靠进口 ,我们在国内首次合成了该新药 ,并已批准生产。苯溴马隆是一种强力去尿酸的苯并

    呋喃衍生物。该化合物不仅能抑制肾小管对尿酸的重吸收 ,促进尿酸排泄 ,而且是一种良好的嘌呤氧化

    酶抑制剂 ,能抑制尿酸的生成 ,对降低血尿酸浓度具有双重功能1 ,2。本文对我校合成的新药苯溴马隆

    进行质量研究 ,建立了高效液相色谱法测定苯溴马隆含量及其杂质的方法 ,并分离出两种主要杂质 ,确

    定了结构。上述研究内容均未见国内外文献报道。

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂

    Waters 600泵 ,681紫外检测器;PC800色谱工作站;三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂) 。

    苯溴马隆(进口品与自制品) ,杂质A(32对甲氧基苯甲酰基222乙基苯并呋喃 ,最后第二步中间体 ,自

    制) ;杂质B(32对羟基苯甲酰基222乙基苯并呋喃 ,最后一步中间体 ,自制) ;杂质 C(32(32溴242羟基)苯甲

    酰基222乙基苯并呋喃 ,自制) ;杂质 D(322′ ,3′ ,5′ ,52四溴24′ 2羟基苯甲酰基222乙基苯并呋喃 ,自制) 。甲

    醇(色谱纯) 、重蒸馏水(自制) 、硅胶 GF254、氯仿、丙酮、冰醋酸、二氯甲烷、石油醚等试剂均为分析纯。

    2. 2 实验方法

    2. 2. 1 高效液相色谱法 (1)色谱条件 色谱柱4. 6 × 200 mm ,填料为 Spherisorb C18 ,5 μm。流动相为甲

    醇2水2冰醋酸(88∶ 12∶ 2. 5) ,pH 3. 5 ,流速1 mLP min。进样量 20μ L ,检测波长 254 nm ,柱效以苯溴马隆峰

    计算为4000。(2)供试液配制 样品液配制:取本品5 mg ,精密称定 ,置 10 mL 量瓶中 ,加流动相溶解并

    稀释至刻度 ,摇匀(0. 5 gP L) 。杂质对照液配制:取杂质 A、 B、 C、 D 适量 ,分别用流动相配制成 2. 5 mgP L

    的浓度。混合试液配制:取苯溴马隆与4种杂质适量 ,用流动相配制成浓度分别为 10 mgP L 和 2. 5 mgP L

    的浓度。(3)检测波长的选择 苯溴马隆在流动相中的λ max为 356 nm ,肩峰 242 nm ,检测波长选为 356

    nm时 ,杂质A , B几乎无吸收;检测波长为242 nm时 ,杂质 A , B 灵敏度不如苯溴马隆。当检测波长为

    256 nm时 ,三者灵敏度较为一致 ,故选254 nm为检测波长 ,用归一化法测定有关物质较为有利。(4)样

    品测定 混合试样、粗品、合格样品的色谱图见图 1、 2。苯溴马隆以及杂质 A、 B、 C、 D 保留时间分别为

    5. 64、 3. 72、 4. 90、 4. 19、 8. 80 min。在此色谱条件下 ,原料药与杂质 A、 B (最后两步中间体)完全分离 ,并

    发现了两种新的杂质 C、 D。在合格样品中一般不出现杂质A、 B ,而杂质 C、 D 均存在。目前自制品苯溴

    马隆 C、 D杂质均可控制在0. 2 %以下 ,进口品苯溴马隆 C、 D杂质分别测定为0. 14 %和 0. 36 %。在粗品

    中也出现较多的 C、 D杂质 ,说明 C、 D很可能是合成过程中的副产物。作者合成了多种反应副产物 ,最

    第30卷

    2002年5月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第5期

    564～567

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.后确证杂质 C为32(32溴242羟基)苯甲酰基222乙基苯并呋喃;杂质D为322′ ,3′ ,5′ ,52四溴24′ 2羟基苯甲酰

    基222乙基苯并呋喃。

    图1 混合试样色谱图

    Fig. 1 Chromatogram of mixed sample

    图2 苯溴马隆有关物质检查色谱图

    Fig. 2 Chromatograms of related impurities benzbromarone

    a.粗品(rough product) ;b. 自制品(made by ourself) 。

    2. 2. 2 薄层色谱法 (1)色谱条件 薄层板 ,取0. 7 %CMC2Na 液100 mL ,加硅胶 GF25430 g ,混合均匀 ,铺

    在10 × 20或20 × 20 cm玻璃板上 ,自然晾干 ,105 ℃活化 1 h ,放干燥器备用。点样 10μ L 展开后 ,在 254

    nm紫外灯下检测。展开系统A. 氯仿2丙酮2冰醋酸(100∶ 2∶ 1) ;B. 二氯甲烷2丙酮2冰醋酸(94∶ 5∶ 1) , C.

    石油醚2丙酮2冰醋酸(88∶ 20∶ 2) ,苯溴马隆最小检测量为 0. 2μg。(2)样品溶液配制 供试液制备 ,以氯

    仿为溶剂 ,配成10 gP L 的溶剂。对照液制备 ,用氯仿稀释供试液 ,配成 0. 1 gP L 的溶液。光照样液:供试

    液经太阳光照射二个月后的样液。杂质对照液的制备 ,以氯仿为溶剂杂质A、 B、 C、 D 各配成 1 gP L 的溶

    液 ......