人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定

http://www.100md.com 任向荣 熊 盛② 唐永红 粟宽源 陈文吟 郑业华

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     任向荣；熊盛；唐永红；粟宽源；陈文吟；郑业华；余宙耀 华南理工大学生物工程系；解放军第458医院全军传染病中心 广州510602 中国免疫学杂志 2002 12

    关键词：噬菌体表面呈现；乙型肝炎表面抗原；单链抗体；表达；复性；生物活性

    目的 :制备有活性的人源性抗HBsAg单链抗体。方法 :应用噬菌体表面呈现技术获得人抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗体的Fab片段 ,并将VH 和VL 基因以 (Gly4Ser) 3linker连接成单链 ,插入表达载体pQE40 ,筛选大肠杆菌高表达菌株。结果 :工程菌表达优化试验表明 ,在OD6 0 0 为 0 6时开始诱导 ,持续 6h ,目的蛋白表达量最高可达菌体总蛋白的 31%。包涵体变性后上样镍离子螯合层析柱一步纯化 ,收集目的峰 ,透析复性 ,得纯度为 97%的重组单链抗体 ,其亲和常数为 0 2 3× 10 8mol L。结论 :抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌内获得高效表达 ,经变性和复性 ,得到有活性...

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