异硫氰酸荧光素_牛血清白蛋白标记物的化学发光反应.PDF
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黄春保 慈云祥 常文保
异硫氰酸荧光素,牛血清白蛋白,化学发光反应,流动注射法
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参见附件(139KB，3页)。
异硫氰酸荧光素_牛血清白蛋白标记物的化学发光反应.PDF
异硫氰酸荧光素2牛血清白蛋白标记物的化学发光反应
黄春保3 1
慈云祥2
常文保2
1
(黄冈师范学院化学系 ,黄州 438000) 2
(北京大学化学与分子工程学院 ,北京 100871)
摘 要 采用反相流动注射法 ,系统地研究了碱性介质中和阳离子在表面活性剂 CTMAB存在下 ,NaClO氧化
异硫氰酸荧光素2牛血清白蛋白标记物的化学发光行为和化学发光反应的条件 ,提出了反相流动注射化学发
光测定牛血清白蛋白的新方法。该法测定牛血清白蛋白线性范围为0. 08～16 mgP L ;检出限为0. 032 mgP L。讨
论了蛋白质标记物化学发光增强作用的原因。
关键词 异硫氰酸荧光素 ,牛血清白蛋白 ,化学发光反应 ,流动注射法
2001205217收稿;2001211226接受
1 引 言
蛋白质测定在临床医学和生命科学研究中具有重要意义。这方面的研究引起了人们的广泛重视。
近年来 ,常见蛋白质测定方法的报道 ,其中大多是利用蛋白质与生色探针的结合作用 ,生成有色复合物
后以分光光度法测定1 ～3
,少数是将蛋白质用卟吩、四环素等荧光探针标记后 ,用荧光光度法测定4 ,5
,也见有蛋白质电分析方法的报道6。这些方法在临床检测和生化分析中具有一定的应用价值。
研究发现 ,在碱性条件下 ,选用某些氧化剂氧化异硫氰酸荧光素(FITC) ,能产生化学发光 ,但强度很
弱。若在碱性介质中 ,将异硫氰酸荧光素标记到蛋白质分子上 ,生成的蛋白质标记物则更易于氧化 ,不
仅化学发光能力极大增强 ,而且发光强度与蛋白质的含量呈良好的线性关系。本文采用反相流动注射
方法 ,研究了碱性介质中 ,次氯酸钠氧化异硫氰酸荧光素2牛血清白蛋白(BSA)标记物的化学发光行为、反应条件和阳离子表面活性剂的增敏作用 ,提出了反相流动注射化学发光测定牛血清白蛋白的新方法。
体系的发光强度与BSA的含量在0. 08～16 mgP L 范围内呈良好的线性关系;检测限为0. 032 mgP L。由于
采用反相流动注射进样方式 ,消除了样品背景干扰 ,故方法的灵敏度高 ,且稳定性好。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
GD21型微光测量仪(西北有色地质研究所) ;LP21 型蠕动泵(北京东方仪器设备公司) ;自动平衡记
录仪(上海大华仪表厂) ;821型pH计(中山大学) 。
BSA(A. R. ,Sigma公司) 。FITC溶液(1 gP L) :称取 50 mg FITC(第三军医大学朝晖制药厂) ,用 5 mL
0. 5 molP L 碳酸盐缓冲溶液和少量水使其溶解后转入50 mL 容量瓶中定容。9. 0 × 10
- 2
molP L NaClO溶液
(pH = 9. 5) :移取1. 5 molP L NaClO溶液 ,适当稀释 ,用 HCl 调节溶液酸度至pH = 915 (酸度计测量) ,然后
定容 ,该溶液在使用前配制。8. 0 ×10
- 4
molP L CTMAB 溶液; 0. 5 molP L NaHCO32Na2CO3 缓冲溶液(pH =
9. 5) 。所用试剂均为分析纯 ,用二次蒸馏水配制溶液。
2. 2 实验方法
2. 2. 1 FITC2BSA标记物的制备与分离 准确称取40 mg BSA置于比色管中 ,依次加入 1. 5 mL 水 ,0. 5
mL 碳酸盐缓冲溶液 ,摇匀后缓慢滴加1 mL FITC溶液 ,混合均匀后置于冰箱(4 ℃)中反应 12 h。用 G 225
色谱柱分离游离的 FITC。收集 FITC2BSA标记物并定容20 mL。该液准确稀释250倍后用于化学发光体
系的条件实验。
2. 2. 2 测定方法 采用反相流动注射法。测定装置流程和抽取试液速度、试液混合顺序如图 1 所示。
NaClO溶液通过旋转六通阀注入 ,每次注射体积为100μ L。试液在流动过程中混合 ,并立即流进发光仪
第30卷
2002年4月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第4期
447～449 图1 流动注射体系
Fig. 1 Schematic diagram of the flow injection system
P. 蠕动泵(peristaltic pump) ;S. 注射器(injector) ;D1 检测体系
(detection system) ; R1 记录仪( recorder) ;W1 废液(waste) ; R1 .
fluorescein isothiocyanate2bavine serum albumin ( FITC2BSA) ; R2 .
8. 0× 10 - 4
molP L cetyltrimethylammonium bromide ;R3 . 9. 0× 10 - 2
molP L NaClO ......
黄春保3 1
慈云祥2
常文保2
1
(黄冈师范学院化学系 ,黄州 438000) 2
(北京大学化学与分子工程学院 ,北京 100871)
摘 要 采用反相流动注射法 ,系统地研究了碱性介质中和阳离子在表面活性剂 CTMAB存在下 ,NaClO氧化
异硫氰酸荧光素2牛血清白蛋白标记物的化学发光行为和化学发光反应的条件 ,提出了反相流动注射化学发
光测定牛血清白蛋白的新方法。该法测定牛血清白蛋白线性范围为0. 08～16 mgP L ;检出限为0. 032 mgP L。讨
论了蛋白质标记物化学发光增强作用的原因。
关键词 异硫氰酸荧光素 ,牛血清白蛋白 ,化学发光反应 ,流动注射法
2001205217收稿;2001211226接受
1 引 言
蛋白质测定在临床医学和生命科学研究中具有重要意义。这方面的研究引起了人们的广泛重视。
近年来 ,常见蛋白质测定方法的报道 ,其中大多是利用蛋白质与生色探针的结合作用 ,生成有色复合物
后以分光光度法测定1 ～3
,少数是将蛋白质用卟吩、四环素等荧光探针标记后 ,用荧光光度法测定4 ,5
,也见有蛋白质电分析方法的报道6。这些方法在临床检测和生化分析中具有一定的应用价值。
研究发现 ,在碱性条件下 ,选用某些氧化剂氧化异硫氰酸荧光素(FITC) ,能产生化学发光 ,但强度很
弱。若在碱性介质中 ,将异硫氰酸荧光素标记到蛋白质分子上 ,生成的蛋白质标记物则更易于氧化 ,不
仅化学发光能力极大增强 ,而且发光强度与蛋白质的含量呈良好的线性关系。本文采用反相流动注射
方法 ,研究了碱性介质中 ,次氯酸钠氧化异硫氰酸荧光素2牛血清白蛋白(BSA)标记物的化学发光行为、反应条件和阳离子表面活性剂的增敏作用 ,提出了反相流动注射化学发光测定牛血清白蛋白的新方法。
体系的发光强度与BSA的含量在0. 08～16 mgP L 范围内呈良好的线性关系;检测限为0. 032 mgP L。由于
采用反相流动注射进样方式 ,消除了样品背景干扰 ,故方法的灵敏度高 ,且稳定性好。
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
GD21型微光测量仪(西北有色地质研究所) ;LP21 型蠕动泵(北京东方仪器设备公司) ;自动平衡记
录仪(上海大华仪表厂) ;821型pH计(中山大学) 。
BSA(A. R. ,Sigma公司) 。FITC溶液(1 gP L) :称取 50 mg FITC(第三军医大学朝晖制药厂) ,用 5 mL
0. 5 molP L 碳酸盐缓冲溶液和少量水使其溶解后转入50 mL 容量瓶中定容。9. 0 × 10
- 2
molP L NaClO溶液
(pH = 9. 5) :移取1. 5 molP L NaClO溶液 ,适当稀释 ,用 HCl 调节溶液酸度至pH = 915 (酸度计测量) ,然后
定容 ,该溶液在使用前配制。8. 0 ×10
- 4
molP L CTMAB 溶液; 0. 5 molP L NaHCO32Na2CO3 缓冲溶液(pH =
9. 5) 。所用试剂均为分析纯 ,用二次蒸馏水配制溶液。
2. 2 实验方法
2. 2. 1 FITC2BSA标记物的制备与分离 准确称取40 mg BSA置于比色管中 ,依次加入 1. 5 mL 水 ,0. 5
mL 碳酸盐缓冲溶液 ,摇匀后缓慢滴加1 mL FITC溶液 ,混合均匀后置于冰箱(4 ℃)中反应 12 h。用 G 225
色谱柱分离游离的 FITC。收集 FITC2BSA标记物并定容20 mL。该液准确稀释250倍后用于化学发光体
系的条件实验。
2. 2. 2 测定方法 采用反相流动注射法。测定装置流程和抽取试液速度、试液混合顺序如图 1 所示。
NaClO溶液通过旋转六通阀注入 ,每次注射体积为100μ L。试液在流动过程中混合 ,并立即流进发光仪
第30卷
2002年4月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第4期
447～449 图1 流动注射体系
Fig. 1 Schematic diagram of the flow injection system
P. 蠕动泵(peristaltic pump) ;S. 注射器(injector) ;D1 检测体系
(detection system) ; R1 记录仪( recorder) ;W1 废液(waste) ; R1 .
fluorescein isothiocyanate2bavine serum albumin ( FITC2BSA) ; R2 .
8. 0× 10 - 4
molP L cetyltrimethylammonium bromide ;R3 . 9. 0× 10 - 2
molP L NaClO ......
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