采用低毒溶剂提取脂质

    韩 菊3

    魏福祥 云自厚 (河北科技大学环境科学与工程学院 ,石家庄 050018) (北京师范大学化学系 , 北京 100875)

    摘 要 报道了采用低毒溶剂正己烷P 异丙醇从肉制品中提取脂质的方法。对影响提取率的重要因素进行了

    考察 ,建立了最佳提取条件;通过对粗提物不同纯化条件的研究 ,确定了适宜的纯化方法。样品用正己烷P 异

    丙醇(3∶ 2 ,VP V)混合溶剂提取10 min ,再向粗提物中加入10 mL 10 gP L 的Na2 SO4 溶液洗去非脂成分 ,获得了与

    氯仿P 甲醇法相近的提取率。测定了 6 种肉制品的脂质含量及脂肪酸组成 ,结果与氯仿P 甲醇法一致;统计检

    验表明 ,两方法间无显著性差异 ,但本法更加安全、简便、快速。

    关键词 正己烷P 异丙醇 ,脂质提取 ,肉制品

    2001205217收稿;2001209228接受

    1 引 言

    脂质是食物中三大产能营养素之一 ,是人类从饮食中摄取能量的主要来源 ,具有重要的生理功能。

    研究发现 ,膳食中不饱和脂肪酸能够降低血胆固醇水平;而经常摄取过多总脂或过多饱和脂肪 ,会增加

    心血管疾病和某些癌症的发病率。可见 ,科学合理的膳食结构非常重要。WHO建议膳食中总脂肪所提

    供的热能最多不超过膳食总热能的30 %。自1994年5月起 ,美国食品与药物管理局(FDA)开始对食品

    实施强制性营养标示 ,要求食品制造商准确测定并标示其商品的脂肪含量。上述情况表明 ,脂质与营

    养、疾病 ,甚至食品加工密切相关。因此 ,脂质的测定具有重要意义 ,研究适宜的脂质测定方法十分必

    要。

    长期以来 ,氯仿P 甲醇(CM)法1

    一直被用作从各类样品中提取脂质的标准方法。但近年来发现氯

    仿是一种可疑的致癌物 ,甲醇能损害视神经。为减小有毒试剂对人体的危害及环境污染 ,研究低毒高效

    的提取体系来替代氯仿P 甲醇法势在必行。笔者2

    曾采用二氯甲烷代替氯仿提取脂质 ,在一定程度上减

    小了试剂毒性 ,但提取剂中仍含有毒性较强的甲醇。Hara 和 Radin

    3

    探讨用低毒溶剂正己烷P 异丙醇

    (HIP)从鼠脑样品中提取脂质 ,获得了与氯仿P 甲醇法相近的提取率。本文将 HIP法用于肉制品中脂质

    的提取 ,进一步研究其代替氯仿P 甲醇法的可行性。探讨了最佳提取条件及粗提物的纯化方法 ,并用于

    实际样品测定。对比分析了样品的脂质含量和脂肪酸组成 ,结果与氯仿P 甲醇法一致;统计检验表明 ,两

    方法间无显著性差异。本研究还进一步扩大了 HIP法的应用范围。

    2 实验部分

    2. 1 仪器与试剂

    103气相层析仪(上海分析仪器厂) ;氯仿 ,甲醇 ,石油醚(沸程 30～60 ℃) ,氢氧化钾 ,无水硫酸钠 ,提

    取剂:正己烷P 异丙醇(3∶ 2 ,VP V) ,以上试剂均为分析纯。脂肪酸甲酯标样为 E.Merk产品。

    2. 2 气相色谱条件

    2 m× 3 mm不锈钢柱 ,内装10 %DEGS + 2 % H3 PO4P Chromosorb W AW DMCS(0. 18～0. 25 mm) ;柱温

    180 ℃,汽化室温度260 ℃,检测器温度 240 ℃;氮气流速 40 mLP min ,氢气流速 60 mLP min ,空气流速 400

    mLP min。

    2. 3 实验方法

    2. 3. 1 正己烷P 异丙醇( HIP)法 准确称取粉碎的样品 1 g于 100 mL 碘量瓶中 ,加入 18 mL 提取剂 ,充

    分振摇10 min。用砂芯漏斗抽滤 ,并用3 × 2 mL 提取剂洗碘量瓶及残渣。滤液转入250 mL 分液漏斗中 ,第30卷

    2002年4月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第4期

    450～453再向该粗提物中加入10 mL 10 gP L 的Na2 SO4 溶液 ,振摇1 min ,静置分层。

    分出下层水相 ,用3 × 2 mL 正己烷P 异丙醇(7∶ 2 ,VP V)进行反萃取。合并上层有机相于已称量的三

    角瓶中 ,置于70 ℃水浴上挥干溶剂 ,再转入100～105 ℃烘箱中烘10 min ,冷至室温后称量 ,计算样品脂质

    含量。

    2. 3. 2 氯仿P 甲醇( CM)法 为进行对照实验 ,对每一样品同时采用 CM4

    法测定脂质含量。

    2. 3. 3 脂肪酸测定 分别称取 HIP法和 CM法所得脂质0. 1 g于15 mL 具塞试管中 ,加入 3 mL 石油醚

    使脂质完全溶解 ,再加入5 mL 0. 4 molP L 的 KOH2CH3OH溶液 ,振摇15 min ,然后加入 1 mL 蒸馏水 ,静置

    分层 ,取适量上层清液做 GC分析。采用纯物对照并结合碳数规律及文献对照定性 ,用峰面积归一化法

    定量。

    3 结果与讨论

    3. 1 最佳提取条件的选择

    3. 1. 1 提取剂配比 由于样品中既含有中性脂又含有极性脂 ,为保证对各类脂质提取完全 ,必须对提

    取剂的配比进行优化 ,找出适宜的极性。为此 ,实验了 3 种不同配比的提取剂。其它条件都相同 ,以标

    准方法 CM法的测定结果视为提取率100 % ,计算不同配比提取剂的相对提取率。

    当 HIP的配比为3∶ 1 ( VP V)时 ,相对提取率为 81. 8 % ,提取效果较差。这主要是由于提取剂中异丙

    醇的比例较小 ,导致对样品中的极性脂提取不完全。配比为 2∶ 1 时 ,随着提取剂极性的增加 ,相对提取

    率增至94. 4 %。配比为3∶ 2时 , 相对提取率达 99. 9 % ,与 CM法十分相近。说明此时溶剂的极性最合

    适 ,对极性脂和中性脂都能提取完全 ,故确定为最佳条件。

    3. 1. 2 提取时间 在2～20 min内考察了提取时间的影响 ,结果表明 ,充分振摇10 min可提取完全。

    3. 1. 3 提取剂用量 当提取剂配比为 3∶ 2 ,提取时间 10 min 时 ,对提取剂用量进行了选择。最后确定

    为18 mL。

    3. 1. 4 反萃取 实验表明 ,对水相不进行反萃取或只反萃取 1 次时 ,脂质含量偏低;当反萃取 3 次时 ,对脂质回收较完全。

    3. 2 粗提物的纯化

    在脂质提取过程中 ,往往会萃入一些非脂成分 ,需进行纯化处理。为确定粗提物中是否含有非脂成

    分 ,首先做了不洗实验 ,即将粗提物直接挥干溶剂称量。结果挥发时间长 ,含量明显偏高 ,说明粗提物中

    图1 清蒸牛肉脂肪酸甲酯色谱分离图

    Fig. 1 Chromatogram of steamed beaf

    1. C14∶ 0 ;2. C16∶ 0 ;3. C16∶ 1 ;4. C18∶ 0 ;5. C18∶ 1 ;6. C18∶ 2 ......