阻抑聚丙烯酰胺催化蛋白质2亚甲基蓝褪色光度法测定痕量铋

    刘佳铭3

    饶志明 杨天隆 (漳州师范学院化学系 ,漳州 363000)

    摘 要 在加热条件下 ,基于Bi D对聚丙烯酰胺(PAM)催化蛋白质2亚甲基蓝(MB)褪色反应有强的抑制作用 ,建立了动力学光度测定铋的新方法。 ΔA 与 CBi D呈线性关系的范围为0108～0. 48μgP L ;检出限为 0. 004μgP L ;

    对0. 004和0. 40μg Bi DP L测定的 RSD分别为614 %和216 %。本阻抑2催化褪色反应对Bi D 、蛋白质2亚甲基蓝

    和 PAM为一级反应;表观活化能为49122 kJP mol。该方法已用于某些谷物、人发和水样中Bi D的测定 ,结果满

    意。

    关键词 铋 ,蛋白质2亚甲基蓝 ,聚丙烯酰胺 ,阻抑2催化褪色光度法

    2001205204收稿;2001209231接受

    1 引 言

    测定痕量铋的方法有Bi I

    -

    4 与罗丹明B、丁基罗丹明B、罗丹明6Gε= 1. 1～1. 3 ( ×10

    5) ]

    1

    和碱性偶

    氮染料( ε= 9. 2× 10

    4)

    2

    等生成离子缔合物光度法 ,32硝基苯基荧光酮法( ε= 5. 0 ×10

    4)

    3

    ,二硫腙法( ε=

    7. 9 × 10

    4)

    4

    ,碘淀粉放大法( ε= 3×10

    5)

    5

    等。近年来 ,相继报道了抑制碘酸钾氧化结晶紫( ε= 1. 07 ×

    10

    5)

    6

    及溴化十六烷基三甲铵抑制 H2O2 氧化荔枝红色素( ε= 9. 3× 10

    5)

    7

    褪色光度法测定痕量铋等 ,但

    诸类方法的ε仅达10

    5

    数量级。实验研究发现 ,PAM可催化蛋白质(Pro)2MB 的褪色反应 ,而Bi D对该催

    化褪色反应有显著的抑制作用 ,据此建立了阻抑 PAM催化 Pro2MB 褪色光度测定痕量铋的新方法。此

    方法的ε 670 = 5. 0× 10

    7

    L· mol

    - 1

    · cm- 1

    ,比前述各方法的ε大两个数量级 ,灵敏度高 ,且选择性与重现性

    好 ,用于谷物、人发和水样中痕量铋的测定 ,结果与AAS法相吻合。

    2 实验部分

    211 试剂和仪器

    Bi D工作溶液:取Bi D基准试剂逐级稀释为 110μgP L Bi D的水溶液;0. 01 %( W V)MB 水溶液;1. 0

    gP L PAM(阳离子型 ,M = 300万)水溶液;3. 0 mgP L Pro (大豆纯化蛋白)水溶液;试剂除了Bi D基准级、 Pro

    生化试剂级外 ,其余均为AR级 ,水为二次亚沸重蒸馏水。723型分光光度计(上海第三分析仪器厂) ,超

    级恒温水浴锅( ± 0. 2 ℃,重庆试验设备厂) ,PHS 23B 精密pH计(上海雷磁仪器厂) 。

    212 实验方法

    往25 mL 具塞比色管中准确加入适量Bi D ,1100 mL MB ,1. 50 mL Pro , 0. 50 mL PAM, 用水稀释至刻

    度 ,混匀 ,置于50 ± 0. 2 ℃恒温水浴反应15 min ,取出迅速用流水冷却至室温 ,用 1 cm比色皿 ,以水作参

    比 ,于670 nm处测量试剂空白的吸光度 A0 及试液的吸光度 Ai。

    3 结果与讨论

    311 测定波长

    按实验方法用723型分光光度计扫描测定体系溶液的吸收光谱如图1。结果表明:体系溶液均有最

    大吸收峰 ,各峰形相似 ,MB的λmax = 670 nm(曲线1) ; Pro 可使MB 褪色 ,但褪色幅度小(曲线 2) ;PAM显

    著地催化Pro2MB 的褪色反应(曲线3) ;Bi D却能抑制PAM的催化褪色反应(曲线4) ;且Pro、 PAM、 Bi D等

    的加入不改变MB 的λ max ,故选择λmax = 670 nm作为测定Bi D含量的工作波长。此时 ,峰值表观摩尔吸

    光系数ε 670 = 5. 0× 10

    7

    L· mol

    - 1

    · cm- 1。

    第30卷

    2002年4月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报

    Chinese Journal of Analytical Chemistry

    第4期

    422～424 图1 吸收光谱

    Fig. 1 Absorption spectra

    1. 1. 00 mL 亚甲基蓝(methylene blue ,MB) ; 2.

    1 + 1. 50 mL 蛋白质(protein ,Pro) ; 3. 2 + 0. 50

    mL 聚丙烯酰胺(polyacrylamide ,PAM) ; 4. 3 +

    10. 0 ng Bi D 。

    312 测定条件

    31211 试剂的浓度与用量 取 10 ng Bi D ,分别改变 MB、 Pro、PAM的浓度或用量 ,按实验方法进行单因素优选实验。结果表

    明:当0. 01 % MB 1. 00 mL、 3. 0 mgP L Pro 1. 50 mL 和 1. 0 gP L PAM

    0. 50 mL 时 ,体系溶液的ΔA = ( Ai - A0 )值最大且恒定。此时 ,溶

    液的pH值为6150 ......