杯[8]芳烃与铈形成的镧系超分子作荧光探针测定蛋白质.PDF
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高建华 翟海云 陈彬
蛋白质,铈D,杯8,芳烃,镧系超分子,荧光探讨
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杯[8]芳烃与铈形成的镧系超分子作荧光探针测定蛋白质.PDF
杯[8 ]芳烃与铈D形成的镧系超分子作荧光探针测定蛋白质
高建华 翟海云3
陈 彬 (郑州大学化学化工学院 ,郑州 450052)
摘 要 研究了 Ce D2杯8 芳烃2蛋白质体系的相互作用和荧光发光情况。实验结果表明:Ce D可产生λ ex ,max
= 254 nm , λ em,max = 361 nm的自身荧光。杯8 芳烃在一定条件下能猝灭其荧光 ,加入蛋白质后体系的荧光又
进一步猝灭 ,故可利用杯8 芳烃2Ce D形成的镧系超分子作荧光探针测定蛋白质 ,同时 ,初步探讨了体系的相
互作用机理。该实验方法的线性范围为111～11. 4 mg L ;检出限为 2. 83 ×10 - 3
mg L。本方法简便、可靠、灵
敏度高。
关键词 蛋白质 ,铈 D ,杯8 芳烃 ,镧系超分子 ,荧光探讨
2001204227收稿;2001210211接受
1 引 言
许多蛋白质通过与之结合的 Ca C、 Mg C完成其生物功能。了解它们间的相互作用对阐述它们的生
物功能有重要意义1。Ca C、 Mg C属惰性结构 ,利用光谱探测它们在生物体内的行为是困难的。稀土
离子具有丰富的光谱性质 ,与 Ca C、 Mg C有非常相近的物理化学性质 ,因而稀土离子发光探针可用于许
多重要的生物体系的研究2 ～5。
镧系离子 Eu D 、 Tb D与多联吡啶类、杯烷通过静电、氢键、范德华力等作用形成的镧系超分子可被
用作荧光探针测定生物大分子6。
Ce D的水合离子发射很强的荧光7。研究发现 ,Ce D与杯8 芳烃可形成镧系超分子 ,该超分子与
蛋白质相作用后发生由超分子到蛋白质之间的静电作用 ,从而使体系的荧光猝灭。因而 Ce D与杯8
芳烃形成的镧系超分子可用作测定蛋白质的优良荧光探针。
2 实验部分
211 仪器与试剂
日立850型荧光分光光度计。
铈 D储备液由 Ce2 (SO4) 3 (上海公私合营华贸化工厂)溶于水 ,经标准 EDTA溶液标定 ,操作液 215 ×
10 - 4
mol L。
磺酸基杯8 芳烃(依文献9
合成)水溶液浓度为0. 12 %。
牛血清蛋白(BSA) (储备液浓度为5. 69× 10 - 3
g mL ,其操作液浓度为 5. 69 ×10 - 4
g mL 牛血清蛋白
由上海生物工程公司提供 ,保存于0～4 ℃冰箱) 。
(0. 1 mol L) Tris2HCl (pH = 5. 0)缓冲溶液控制酸度 ,110 mol L NaCl 溶液;试剂均为分析纯 ,水为二次
去离子水。
212 实验方法
按顺序准确移取0. 40 mL Ce D操作液于10 mL 比色管中 ,分别加入Tris2HCl 缓冲溶液110 mL、杯8
芳烃水溶液110 mL 和一定量的蛋白质溶液。最后加水至刻度 ,混匀后于850 型荧光分光光度计上测其
荧光强度。
3 结果与讨论
311 荧光光谱特征
第30卷
2002年3月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第3期
295～297Ce D 、 Ce D2杯8 芳烃、 Ce D2杯8 芳烃2蛋白质 3 种体系的荧光光谱如图 1 所示。由图可知 ,Ce D
有很强的荧光 , λex ,max = 254 nm , λem ,max = 361 nm;3种体系荧光强度不同 ,证明蛋白质与杯8 芳烃和Ce D
图1 荧光光谱
Fig. 1 Fluorescence spectra
1 ,2 ,3.激发光谱(excitation spectra) :Ce D ) , Ce D2杯8 芳
烃( calix 8 arenes ) , Ce D2calix 8 arenes 2bovine serum
albumin (BSA) ; 1′ ,2′ ,3′ . 发射光谱(emission spectra) :Ce
D , Ce D2calix8 arenes , Ce D2calix8 arenes 2BSA。
形成的超分子相互作用 ,影响其荧光强度。
312 反应时间的影响
按212实验方法配制反应体系,考察了室温下放置
对荧光强度的影响。实验表明:体系形成并迅速达到平
衡 ,在1 h内荧光强度变化不大。
313 Ce D浓度的影响
考察了不同浓度的 Ce D对体系的相对荧光强度
( F0 F)的影响 ,当 Ce D的浓度在 9. 0 ×10 - 6
～1. 1 ×
10 - 5
mol L 范围内体系的 F0 F达到最大且稳定 ......
高建华 翟海云3
陈 彬 (郑州大学化学化工学院 ,郑州 450052)
摘 要 研究了 Ce D2杯8 芳烃2蛋白质体系的相互作用和荧光发光情况。实验结果表明:Ce D可产生λ ex ,max
= 254 nm , λ em,max = 361 nm的自身荧光。杯8 芳烃在一定条件下能猝灭其荧光 ,加入蛋白质后体系的荧光又
进一步猝灭 ,故可利用杯8 芳烃2Ce D形成的镧系超分子作荧光探针测定蛋白质 ,同时 ,初步探讨了体系的相
互作用机理。该实验方法的线性范围为111～11. 4 mg L ;检出限为 2. 83 ×10 - 3
mg L。本方法简便、可靠、灵
敏度高。
关键词 蛋白质 ,铈 D ,杯8 芳烃 ,镧系超分子 ,荧光探讨
2001204227收稿;2001210211接受
1 引 言
许多蛋白质通过与之结合的 Ca C、 Mg C完成其生物功能。了解它们间的相互作用对阐述它们的生
物功能有重要意义1。Ca C、 Mg C属惰性结构 ,利用光谱探测它们在生物体内的行为是困难的。稀土
离子具有丰富的光谱性质 ,与 Ca C、 Mg C有非常相近的物理化学性质 ,因而稀土离子发光探针可用于许
多重要的生物体系的研究2 ～5。
镧系离子 Eu D 、 Tb D与多联吡啶类、杯烷通过静电、氢键、范德华力等作用形成的镧系超分子可被
用作荧光探针测定生物大分子6。
Ce D的水合离子发射很强的荧光7。研究发现 ,Ce D与杯8 芳烃可形成镧系超分子 ,该超分子与
蛋白质相作用后发生由超分子到蛋白质之间的静电作用 ,从而使体系的荧光猝灭。因而 Ce D与杯8
芳烃形成的镧系超分子可用作测定蛋白质的优良荧光探针。
2 实验部分
211 仪器与试剂
日立850型荧光分光光度计。
铈 D储备液由 Ce2 (SO4) 3 (上海公私合营华贸化工厂)溶于水 ,经标准 EDTA溶液标定 ,操作液 215 ×
10 - 4
mol L。
磺酸基杯8 芳烃(依文献9
合成)水溶液浓度为0. 12 %。
牛血清蛋白(BSA) (储备液浓度为5. 69× 10 - 3
g mL ,其操作液浓度为 5. 69 ×10 - 4
g mL 牛血清蛋白
由上海生物工程公司提供 ,保存于0～4 ℃冰箱) 。
(0. 1 mol L) Tris2HCl (pH = 5. 0)缓冲溶液控制酸度 ,110 mol L NaCl 溶液;试剂均为分析纯 ,水为二次
去离子水。
212 实验方法
按顺序准确移取0. 40 mL Ce D操作液于10 mL 比色管中 ,分别加入Tris2HCl 缓冲溶液110 mL、杯8
芳烃水溶液110 mL 和一定量的蛋白质溶液。最后加水至刻度 ,混匀后于850 型荧光分光光度计上测其
荧光强度。
3 结果与讨论
311 荧光光谱特征
第30卷
2002年3月 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第3期
295～297Ce D 、 Ce D2杯8 芳烃、 Ce D2杯8 芳烃2蛋白质 3 种体系的荧光光谱如图 1 所示。由图可知 ,Ce D
有很强的荧光 , λex ,max = 254 nm , λem ,max = 361 nm;3种体系荧光强度不同 ,证明蛋白质与杯8 芳烃和Ce D
图1 荧光光谱
Fig. 1 Fluorescence spectra
1 ,2 ,3.激发光谱(excitation spectra) :Ce D ) , Ce D2杯8 芳
烃( calix 8 arenes ) , Ce D2calix 8 arenes 2bovine serum
albumin (BSA) ; 1′ ,2′ ,3′ . 发射光谱(emission spectra) :Ce
D , Ce D2calix8 arenes , Ce D2calix8 arenes 2BSA。
形成的超分子相互作用 ,影响其荧光强度。
312 反应时间的影响
按212实验方法配制反应体系,考察了室温下放置
对荧光强度的影响。实验表明:体系形成并迅速达到平
衡 ,在1 h内荧光强度变化不大。
313 Ce D浓度的影响
考察了不同浓度的 Ce D对体系的相对荧光强度
( F0 F)的影响 ,当 Ce D的浓度在 9. 0 ×10 - 6
～1. 1 ×
10 - 5
mol L 范围内体系的 F0 F达到最大且稳定 ......
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