消毒剂对产超广谱B 2内酰胺酶阳性

    菌株的杀灭试验观察

    文细毛, 黄 勋, 徐秀华, 吴安华, 任 南

    (中南大学湘雅医院, 湖南 长沙 410008)

    摘要: 目的 了解产超广谱 B 2内酰胺酶(ESBL s)菌株对常用消毒剂的敏感性。方法 采用消毒剂对细菌的最小

    杀菌浓度(MBC)和最低抑菌浓度(M IC)的检测方法, 检测ESBL s阳性菌株对 5 种临床常用消毒剂的敏感性。结

    果 当“84”消毒液、爱尔施速效消毒片的有效氯含量分别为 256 mg? L、 128 mg? L , 碘伏、安尔碘有效碘含量升为

    32 mg? L、戊二醛的含量为 5 560 mg? L 时, 作用 1 m in, 能将所有菌株全部杀灭; 经浓度测定, 无论单倍还是双倍

    营养肉汤, 每亳升营养肉汤均消耗消毒剂一定量的有效浓度。结论 未发现ESBL s阳性菌株对常用消毒剂耐药;

    由于在测定消毒剂对细菌的M IC 值时受营养肉汤的影响较大, 故当消毒剂对细菌MBC 值较低时, 不能用消毒剂

    加营养肉汤的方法测定其对细菌M IC 值。

    关键词: 消毒剂; 超广谱B 2内酰胺酶; 最小杀菌浓度; 最小抑菌浓度; 敏感性

    中图分类号: R187+

    . 2 文献标识码: B 文章编号: 100524529 (2002) 0920683203

    随着产超广谱 B 2内酰胺酶(ESBL s)菌株的增多

    与研究的深入, 已对 ESBL s 阳性菌株的分布、抗菌

    药物的耐药情况、耐药机理及治疗方法做了大量探

    讨, 但其对消毒剂敏感性的文献罕见, 为了解 ES2

    BL s 阳性菌株对常用消毒剂的敏感性, 我们检测常

    用消毒剂对其最小杀菌浓度(MBC)和最低抑菌浓

    度(M IC) , 并与标准菌株比较, 现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1 . 1 材料

    1 . 1 . 1 菌株来源 11 株 ESBL s 阳性菌来源于我

    院 ICU 病房 2000 年 3～ 5 月的住院患者, 标准产酶

    菌A TCC700603、 A TCC25922 (AB B iodisk 公司) ,标准菌株A TCC8099 (湖南省卫生防疫站)。

    1 . 1 . 2 主要试剂 消毒剂: 2%强化戊二醛、安尔

    碘、爱尔施速效消毒片(有效成分为三氯异氰脲酸) ,为 上 海 高 科 技 有 限 公 司 产 品, 批 号 分 别 为

    20000704、 20000614、 20000518。“84”消毒液、碘伏为

    湖南医科大学卫生防疫厂产品, 批号分别为

    2000529、 2000715。E2test 试条及 PDM 琼脂为AB

    B iodisk 公司产品, 营养肉汤混合培养基, 购自浙江

    军区后勤部卫生防疫制品厂。

    1 . 2 方 法

    1 . 2 . 1 有效含量的测定 有效碘、有效氯、戊二醛

    含量的测定按《消毒技术规范》的有关方法进行检

    测1。

    1. 2 . 2 中和剂选择实验 按《消毒技术规范》所示

    收稿日期: 2001209211 ; 修订日期: 2002204228

    方法1 分别对每种消毒剂的中和剂进行选择。

    1 . 2 . 3 ESBL s 阳性菌株的确定 采用 E2test 法,头孢泊肟、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松中有两种

    药物的M IC 值≥2Lg? m l时为 ESBL s 阳性可疑, 进

    一步用头孢他啶和头孢他啶? 克拉维酸、头孢噻肟和

    头孢噻肟? 克拉维酸 E2test 试条确定, 结果头孢他

    啶与头孢噻肟任一种加克拉维酸与未加克拉维酸的

    M IC 差值≥8 倍可确定为ESBL s 阳性株2

    , 同时用

    A TCC700603、 A TCC25922 作质控菌株。

    1 . 2 . 4 最小杀菌浓度(MBC)的测定 将消毒剂用

    无菌蒸馏水稀释成各试验浓度, 取菌悬液 0. 1 m l,分别加入不同稀释度消毒液 5. 0 m l中混匀, 作用 1

    m in 后各取 0. 5 m l分别加入 1. 5 m l含相应中和剂

    的溶液中, 10 m in 后各取 0. 5 m l 分别加入 4. 5 m l

    营养肉汤中, 置 37℃温箱培养 18～ 24 h, 结果以消

    毒液的最高稀释度营养肉汤中无菌生长者为MBC。

    1 . 2 . 5 最低抑菌浓度(M IC)的测定 按细菌药敏

    M IC 测定方法, 用营养肉汤将消毒剂稀释成各试验

    浓度, 每管2. 0 m l, 细菌取18 h 平皿培养物, 用PBS

    悬浮比浊法稀释至 0. 5 麦氏浊度, 用 1%蛋白胨

    PBS 稀释 10 倍, 每管消毒液中加上述菌液 0. 1 m l,37℃培养 18～ 24 h, 观察结果, 以消毒液的最高稀

    释度中肉眼所见无菌生长者为M IC。

    1 . 2 . 6 营养肉汤对消毒剂有效成分减少量的测定

    分别将消毒剂用无菌蒸馏水稀释成不同浓度, 同

    一浓度各取两份, 1 份加入一定量的单倍营养肉汤,另1 份加入与单倍营养肉汤同量无菌蒸馏水, 按《消

    毒技术规范》所示方法1

    测定消毒剂有效含量; 分别

    · 386 · 中华医院感染学杂志 2002 年第 12 卷第 9 期用单倍营养肉汤、无菌蒸馏水稀释的消毒剂、无菌蒸

    馏水稀释的消毒剂加等量双倍营养肉汤, 测定三者

    中消毒剂有效含量。测定后计算出各样本中消毒剂

    的有效含量, 单倍和双倍营养肉汤中消毒剂有效成

    分减少率, 每毫升单倍和双倍营养肉汤对消毒剂有

    效成分减少程度。

    2 结 果

    2 . 1 最小杀菌浓度 经ESBL s 确证实验共收集了

    11株 ESBL s 阳性菌株, 其中肺炎克雷伯菌(KP) 3

    株, 大肠埃希菌(ECO ) 8 株。当“84”消毒液、爱尔施

    速效消毒片的有效氯含量分别为 256 m g? L、 128

    m g? L , 碘伏、安尔碘有效碘含量为32 m g? L , 戊二醛

    的含量为5560 m g? L 时, 作用1 m in, 能将所有菌株

    全部杀灭(表1) ......