乳腺癌细胞_____乳腺癌细胞；HSVtk基因

HSVtk基因对乳腺癌细胞的体外作用

http://www.100md.com 《第四军医大学学报》 2005年第15期

乳腺癌细胞,,乳腺癌细胞；HSVtk基因,1实验资料,2讨论,【参考文献】

     【关键词】乳腺癌细胞；HSVtk基因

    1实验资料

    逆转录病毒载体、细胞株PA317, NIH3T3和小鼠乳腺癌细胞MA782/5S8102由东南大学医学院遗传中心惠赠. 按常规方法扩增、抽提、纯化质粒DNA片段、回收HSVtk片段. 在T4 DNA Ligase的作用下，定向克隆入逆转录病毒载体pMNSM中SV40启动子下游的多克隆位点. 重组质粒转化JM109菌后经克隆筛选、鉴定获重组质粒pMNStkM. 以脂质体法将上述重组质粒DNA转染至逆病毒包装细胞PA317. 以含400 mg/L G418的DMEM选择培养基培养14 d，获G418抗性克隆PA317/tk细胞NIH3T3细胞为靶细胞在Polybrene存在条件下测定、计算病毒滴度. 病毒滴度(CFU/mL)=细胞克隆平均数×病毒液稀释倍数. 选择高滴度的病毒上清(含聚凝胺800 mg)转染MA782/5S8102. 以G418终浓度为800 mg/L的DMEM选择培养14 d ......

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