克隆__(期刊论文)

CK20单克隆抗体的制备及鉴定

http://www.100md.com 《第四军医大学学报》 2006年第3期

克隆,,抗CK20单克隆抗体；SPASepharose；杂交瘤技术；Western,Blot；ELISA,0引言,1材料和方法,2结果,3讨论,【参考文献】

     【关键词】抗CK20单克隆抗体；SPASepharose；杂交瘤技术；Western Blot；ELISA

     0引言

    研究CK20表达用于诊断和评估膀胱肿瘤，已成为国内外研究热点之一. 但目前国内的抗CK20 mAb一直依赖进口，价格昂贵且不便运输，严重影响其推广应用和研究. 我们于2002年成功地从膀胱癌T24细胞系中提取CK20抗原[1]，我们采用CK20抗原通过杂交瘤技术制备抗CK20 mAb，为进一步研制CK20 mAb胶体金试剂盒筛查膀胱癌奠定基础.

     1材料和方法

    1.1材料

    ①动物及试剂 BALB/c小鼠购自第三军医大学动物中心，鼠龄6~12 wk，体质量18~22 g，雌雄不限；CK20抗原为本实验室纯化所得；Freund氏完全佐剂和不完全佐剂及HAT培养基为Gibco产品；SP2/0骨髓瘤细胞来自中国预防医学科学院病毒研究所；细胞融合剂PEG4000为Mereck产品，SPASepharose CL4B为Pharmacia产品；IgA, IgM, IgG1, IgG2a, IgG2b及IgG3蛋白均为Sigma产品. ②仪器国产96孔和24孔培养板、超净工作台；德国Heraeus离心机，BioRad公司550酶标仪、电泳仪、转膜系统及凝胶成像分析系统；德国LKB层析系统；Olympus倒置显微镜.

    1.2方法

    1.2.1动物免疫及脾细胞收集免疫方法参照文献[2]，共免疫3只小鼠，免疫后用琼脂扩散法检测小鼠血清产生抗体情况 ......

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