关键词: ndr2基因;细胞转染;表达

    摘 要:目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体(pIND-ndr2)，转染肺腺癌细胞GLC-82，观察ndr2基因表达，为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础. 方法 以RT-PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌GLC-82细胞ndr2的表达高低.PCR方法扩增ndr2，以BamHI+EcoRI双酶切连接入pUC19载体中，测序正确后，插入到蜕皮素诱导的真核表达载体pIND中.连有ndr2基因的载体(pIND-ndr2)用脂质体方法转染到培养的肺腺癌细胞GLC-82中.经G418和zeocin双抗生素筛选后，挑取单克隆进行培养，用蜕皮素诱导ndr2表达，用RT-PCR，western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株. 结果 PCR的方法扩增获得大小约1200bp的片段，连接入预先插入HA-tag的pUC19载体的ndr2基因经HindⅢ+EcoRI酶切后，构建到真核表达载体pIND中，酶切鉴定后证明连接片段正确.通过双载体转染和双抗生素筛选后，培养的细胞经诱导后检测到实验组ndr2的高表达，而对照组和未诱导的实验组ndr2表达均较低. 结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌GLC-82细胞，建立了ndr2的可诱导表达的细胞系.

    Research of inducible expression of ndr2gene in lung adenocarcinoma GLC┐82cells

    LI Shu-Jun WANG Hua QI Hao-Wen ZHANG Jian HE Peng ZHANG Wen-Hong JI Shao-Ping LIU Xin-Ping YAO Li-Bo

    1 Department of Biochemistry and Molecular Biolo-gy，Faculty of Preclinical Medicine，

    2 Department of Respiratory Disease，

    3 Department of Ultrasono-graphy，Xijing Hospital，Fourth Military Medical University，Xi'an710033，China

    Keywords:ndr2gene;cell transfection;expression

    Abstract:AIM To Construction a recombinant pIND-ndr2expression vector ......