鱼腥草种质资源的RAPD分析.pdf
http://www.100md.com
| 第1页 |
| 第7页 |
参见附件(273kb)。
鱼腥草种质资源的 !"#$ 分析
吴 卫!!，郑有良!
，陈 黎!
，魏育明"
，颜泽洪"
，杨瑞武#
(四川农业大学 !$ 农学院；#$基础部，四川 雅安 %#&’!(；"$小麦研究所，四川 都江堰 %!!)"’)
摘要：目的 分析鱼腥草种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法 应用 *+,-技术对 .# 份鱼腥草种质资
源进行检测。结果 "(个随机引物中有 "# 个引物 (.(/!0) 扩增产物具多态性。"( 个引物共得到 #’’ 条扩增 -1+
片段， 其中 ."/&0的片段具多态性。每个多态性引物平均可扩增出 &/)个多态性片段。峨眉蕺菜和蕺菜种内平均遗
传相似系数 (2343567 8696:;<65=， >?) 分别为 ’/&#!和 ’/&@#， 二者种间 >? 值为 ’/&!@。峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为
"%的细胞型间相似程度最高， 其平均 >?值达 ’/&"’。栽培蕺菜类群比其野生类群遗传多样性相对较高。聚类分析
表明， 利用 *+,-技术可将全部供试材料区分开， 所有材料共划分为 !(类。其中， 绝大多数 (%#个) 聚为一类， 且根据
*+,-遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论 (!)鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗
传差异。 (#)*+,-标记可作为构建鱼腥草 -1+指纹图谱的有效工具。 (")鱼腥草药材道地性与环境因素有关， 但
更大程度上由其遗传因素所决定。
关键词：鱼腥草；蕺菜；峨眉蕺菜；*+,-；遗传多样性；-1+指纹图谱；道地性
中图分类号：A@) 文献标识码：+ 文章编号：’&!" B ()@’ (#’’#) !# B ’.)% B ’@
中药鱼腥草 (C3
科蕺菜属蕺菜 !"#$$#%&’( )"*+($( GHF4D$。具清热解
毒、 消痈排脓和利尿通淋等功能， 为 “既是药品， 又是
食品” 的极具开发潜力的资源之一。据 《中国植物
志》 和 《四川植物志》等记载， 蕺菜属仅蕺菜 !
种 [!， #] 。祝正银等 ["] (#’’!) 在四川峨眉山发现蕺菜
属一新种峨眉蕺菜 !"#$$#%&’( ,-,’,&.’. IJ IHF 35 ?K
IH;42， 该种在峨眉、 乐山等地俗称白侧耳根， 也作蔬
菜和鱼腥草药用。据作者初步调查， 鱼腥草种质资
源在形态特征、 产量质量及抗病性等方面均有较大
差异， 且染色体数目不尽相同 (另文报道) 。但彼此
间遗传背景、 亲缘关系尚不清楚， 故有必要运用新技
术手段加强鱼腥草种质资源遗传多样性研究。
*+,-标记因其操作简便、 -1+ 用量少、 ,L* 引物无
种属限制等特点， 目前已广泛应用于人参 [(] 、 西洋
参 [&] 、 当归 [%] 、 石斛 [@] 、 厚朴 [)] 、 甘草 [.] 和苍术 [!’] 等
药用植物的 -1+ 指纹图谱构建、 真伪鉴定、 亲缘关
系、 遗传多样性及药材道地性研究。本文利用
*+,-技术对蕺菜和峨眉蕺菜进行遗传多样性分
析， 旨在探讨其种间、 各材料间和不同细胞型蕺菜间
遗传关系， 以及鱼腥
收稿日期：#’’#M’!M!&$
基金项目：四川省科技厅重点攻关项目；四川省教育厅重点项
目；雅安三九药业科技基金$!通讯作者 G3: N O;P： (’)"&) #))#""%，QM9;6:：3RFR36S!%"$ 435
草道地性产生的根本原因， 为鱼腥草资源合理保护
利用和新品种选育提供理论依据， 也为鱼腥草药材
-1+指纹图谱的构建奠定基础。
材 料 与 方 法
材料 试验材料采自四川、 贵州及江苏等地不
同地点或同一地点不同生境， 共.#份。其中峨眉蕺
菜 (QT) # 份， 蕺菜 .’ 份。据细胞学观察， 蕺菜不同
材料的染色体数目不尽相同， 本文按染色体数目将
其划分为!#个细胞型。+， U， L， -， Q， O， >， C， V， W， X
和K 分别代表染色体数目为 "%， &(， @#， )’， )!， )#，)"， )(， )%， ))， .’和 !#%的不同细胞型。材料来源见
表 !。
$%"的提取 取鲜叶约 " 2在液氮冷冻下研磨
成粉末， 置于 &’ 9K 离心管中， 加入 !& 9K 预热至
%&Y的 # Z LG+U提取缓冲液 (!’’ 99E: ·KB !
G<68MCL:
[C )/’，!’ 99E:·KB !
Q-G+，#0 LG+U， #0 ,\,，’/#0! M巯基乙醇) ， %&Y水浴保温 ! ] # H， 其间倒转
离心管数次， 取出离心管冷至室温。加入等体积氯
仿M异戊醇 (#(^ !) ， 混匀， " &’’ <·964B !
离心 !# 964。
取上清液加入! N !’体积的!’0的 LG+U， 轻摇混匀，加等体积氯仿M异戊醇 (#( ^ !) 混匀， " &’’ < ·964B !
离
心!# 964， 取上清液加等体积异丙醇， 沉淀 -1+， 用
· % ) . · 药学学报 +75; ,H;<9;73F567; ?6467; #’’#， "@ (!#) ： .)% B ..#!"#乙醇冲洗 $%& 沉淀 ’ ( ) 次， 空气中干燥后用 *+溶解备用。!"#$% & !’% ()*+*),%- "./ *’% -+01(%- +2 *’% 3%14,$"-4 1%-+01(%- +2 5%1#" 5+0**).6"%
,-./.-012
(345/6/2/61 786915) &33122:/72 %/; :.- ?=9:.=.
+@()A) B"CDEA +61:，F:348=7 G/./7- H=5I17，38>.:J=.1I
B"CDC K:8L17M， <124=7， F:348=7 N:J15 5=0:I2，38>.:J=.1I
&()A) B"CDO B8./7MP:=/，<124=7，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，38>.:J=.1I
B"CDS T:7MU:，T:=7R1:，F:348=7 N:J15 5=0:I2，38>.:J=.1I
B"CDV W=7MX:=，K:7M-=7，F:348=7 N:IM12 91.R117 L:1>I2，M5/R:7M R:>I
B"CD’’ K:70:7M，W:9:7，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
B"CD’) K:7M0:7M，W:9:7，F:348=7 N:IM12 91.R117 L:1>I2，M5/R:7M R:>I
B"CD’O W:9:7，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
B"CD’S W:9:7，F:348=7 N:IM12 91.R117 L:1>I2，M5/R:7M R:>I
B"CDOE %1:X:=7M，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
B"CDS" %1:X:=7M，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
G(SO) B"CD)V ?=7>:7，Y17M248:，,4/7MP:7M *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01 ......
吴 卫!!，郑有良!
，陈 黎!
，魏育明"
，颜泽洪"
，杨瑞武#
(四川农业大学 !$ 农学院；#$基础部，四川 雅安 %#&’!(；"$小麦研究所，四川 都江堰 %!!)"’)
摘要：目的 分析鱼腥草种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法 应用 *+,-技术对 .# 份鱼腥草种质资
源进行检测。结果 "(个随机引物中有 "# 个引物 (.(/!0) 扩增产物具多态性。"( 个引物共得到 #’’ 条扩增 -1+
片段， 其中 ."/&0的片段具多态性。每个多态性引物平均可扩增出 &/)个多态性片段。峨眉蕺菜和蕺菜种内平均遗
传相似系数 (2343567 8696:;<65=， >?) 分别为 ’/&#!和 ’/&@#， 二者种间 >? 值为 ’/&!@。峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为
"%的细胞型间相似程度最高， 其平均 >?值达 ’/&"’。栽培蕺菜类群比其野生类群遗传多样性相对较高。聚类分析
表明， 利用 *+,-技术可将全部供试材料区分开， 所有材料共划分为 !(类。其中， 绝大多数 (%#个) 聚为一类， 且根据
*+,-遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论 (!)鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗
传差异。 (#)*+,-标记可作为构建鱼腥草 -1+指纹图谱的有效工具。 (")鱼腥草药材道地性与环境因素有关， 但
更大程度上由其遗传因素所决定。
关键词：鱼腥草；蕺菜；峨眉蕺菜；*+,-；遗传多样性；-1+指纹图谱；道地性
中图分类号：A@) 文献标识码：+ 文章编号：’&!" B ()@’ (#’’#) !# B ’.)% B ’@
中药鱼腥草 (C3
科蕺菜属蕺菜 !"#$$#%&’( )"*+($( GHF4D$。具清热解
毒、 消痈排脓和利尿通淋等功能， 为 “既是药品， 又是
食品” 的极具开发潜力的资源之一。据 《中国植物
志》 和 《四川植物志》等记载， 蕺菜属仅蕺菜 !
种 [!， #] 。祝正银等 ["] (#’’!) 在四川峨眉山发现蕺菜
属一新种峨眉蕺菜 !"#$$#%&’( ,-,’,&.’. IJ IHF 35 ?K
IH;42， 该种在峨眉、 乐山等地俗称白侧耳根， 也作蔬
菜和鱼腥草药用。据作者初步调查， 鱼腥草种质资
源在形态特征、 产量质量及抗病性等方面均有较大
差异， 且染色体数目不尽相同 (另文报道) 。但彼此
间遗传背景、 亲缘关系尚不清楚， 故有必要运用新技
术手段加强鱼腥草种质资源遗传多样性研究。
*+,-标记因其操作简便、 -1+ 用量少、 ,L* 引物无
种属限制等特点， 目前已广泛应用于人参 [(] 、 西洋
参 [&] 、 当归 [%] 、 石斛 [@] 、 厚朴 [)] 、 甘草 [.] 和苍术 [!’] 等
药用植物的 -1+ 指纹图谱构建、 真伪鉴定、 亲缘关
系、 遗传多样性及药材道地性研究。本文利用
*+,-技术对蕺菜和峨眉蕺菜进行遗传多样性分
析， 旨在探讨其种间、 各材料间和不同细胞型蕺菜间
遗传关系， 以及鱼腥
收稿日期：#’’#M’!M!&$
基金项目：四川省科技厅重点攻关项目；四川省教育厅重点项
目；雅安三九药业科技基金$!通讯作者 G3: N O;P： (’)"&) #))#""%，QM9;6:：3RFR36S!%"$ 435
草道地性产生的根本原因， 为鱼腥草资源合理保护
利用和新品种选育提供理论依据， 也为鱼腥草药材
-1+指纹图谱的构建奠定基础。
材 料 与 方 法
材料 试验材料采自四川、 贵州及江苏等地不
同地点或同一地点不同生境， 共.#份。其中峨眉蕺
菜 (QT) # 份， 蕺菜 .’ 份。据细胞学观察， 蕺菜不同
材料的染色体数目不尽相同， 本文按染色体数目将
其划分为!#个细胞型。+， U， L， -， Q， O， >， C， V， W， X
和K 分别代表染色体数目为 "%， &(， @#， )’， )!， )#，)"， )(， )%， ))， .’和 !#%的不同细胞型。材料来源见
表 !。
$%"的提取 取鲜叶约 " 2在液氮冷冻下研磨
成粉末， 置于 &’ 9K 离心管中， 加入 !& 9K 预热至
%&Y的 # Z LG+U提取缓冲液 (!’’ 99E: ·KB !
G<68MCL:
[C )/’，!’ 99E:·KB !
Q-G+，#0 LG+U， #0 ,\,，’/#0! M巯基乙醇) ， %&Y水浴保温 ! ] # H， 其间倒转
离心管数次， 取出离心管冷至室温。加入等体积氯
仿M异戊醇 (#(^ !) ， 混匀， " &’’ <·964B !
离心 !# 964。
取上清液加入! N !’体积的!’0的 LG+U， 轻摇混匀，加等体积氯仿M异戊醇 (#( ^ !) 混匀， " &’’ < ·964B !
离
心!# 964， 取上清液加等体积异丙醇， 沉淀 -1+， 用
· % ) . · 药学学报 +75; ,H;<9;73F567; ?6467; #’’#， "@ (!#) ： .)% B ..#!"#乙醇冲洗 $%& 沉淀 ’ ( ) 次， 空气中干燥后用 *+溶解备用。!"#$% & !’% ()*+*),%- "./ *’% -+01(%- +2 *’% 3%14,$"-4 1%-+01(%- +2 5%1#" 5+0**).6"%
,-./.-012
(345/6/2/61 786915) &33122:/72 %/; :.- ?=9:.=.
+@()A) B"CDEA +61:，F:348=7 G/./7- H=5I17，38>.:J=.1I
B"CDC K:8L17M， <124=7， F:348=7 N:J15 5=0:I2，38>.:J=.1I
&()A) B"CDO B8./7MP:=/，<124=7，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，38>.:J=.1I
B"CDS T:7MU:，T:=7R1:，F:348=7 N:J15 5=0:I2，38>.:J=.1I
B"CDV W=7MX:=，K:7M-=7，F:348=7 N:IM12 91.R117 L:1>I2，M5/R:7M R:>I
B"CD’’ K:70:7M，W:9:7，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
B"CD’) K:7M0:7M，W:9:7，F:348=7 N:IM12 91.R117 L:1>I2，M5/R:7M R:>I
B"CD’O W:9:7，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
B"CD’S W:9:7，F:348=7 N:IM12 91.R117 L:1>I2，M5/R:7M R:>I
B"CDOE %1:X:=7M，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
B"CDS" %1:X:=7M，F:348=7 *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01，M5/R:7M R:>I
G(SO) B"CD)V ?=7>:7，Y17M248:，,4/7MP:7M *4:3Q M5/R.4 /L M5=22 /7 .41 2>/01 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(273KB，7页)。