热疗和顺铂对放射治疗人卵巢癌细胞

    的增强作用研究

    缪竞诚1

    ,GP Raaphorst

    2

    ,CE Ng2

    (1.苏州医学院细胞免疫中心 ,江苏 苏州 215007 ;2.加拿大渥太华地区肿瘤中心)

    摘要:目的 观察热疗和顺铂对放射治疗的增强作用 ,以探索一种临床更为有效的肿瘤治疗方法。方法 采

    用 X线照射前或后的人卵巢癌细胞A27802S(对顺铂敏感)和 A27802CP(抗顺铂)用顺铂和热疗处理 ,观察两者对亚

    致死剂量辐射损伤修复(SLDR)的抑制作用。结果 热疗(40℃,1小时)或顺铂处理1小时均不能抑制这一修复 ,但

    两者联合应用则对两个细胞系均有明显效果。SLDR的受抑程度取决于处理的时机。对于抗顺铂的 A27802CP ,可

    观察到 SLDR的抑制 ,而在敏感细胞A27802S ,除此之外还能观察到放疗敏感性的提高。结论 单独应用作用有限

    的热疗和低浓度顺铂联合应用可明显增强放疗疗效。

    关键词:热/治疗应用;顺铂/治疗应用;卵巢肿瘤/治疗;放射疗法

    中图分类号:R737. 3 文献标识码:A 文章编号:100121092 (1999) 0620341203

    辐射损伤过程中的修复作用可影响细胞对放疗

    的反应。许多研究指出:通过观察损伤的修复情况

    可进行改善放疗疗效的研究。有报道显示 ,某些药

    物和热疗可通过抑制修复来增强辐射对细胞的杀伤

    力[1 ,2 ]。我们以往的实验也显示热疗可以抑制亚致

    死剂量和致死剂量辐射损伤的修复( sublethal radia2

    tion damage repair ,SLDR) 。事实上 ,正是因为具有修

    复能力 ,肿瘤细胞才得以抵抗一定剂量的辐射 ,一旦

    抑制了这种修复 ,肿瘤细胞对放疗的敏感性将得以

    大大提高[3 ,4 ]。顺铂有增强放射敏感性的作用 ,因

    此常被用于与放疗联合应用治疗肿瘤[5 ]。我们以往

    的研究也证明 ,放疗与顺铂的联合应用可以明显增

    强对两者均抵抗的细胞系的放疗和化疗敏感性 ,而

    且这种敏感性的提高是通过抑制辐射损伤的修复来

    实现的[6 ,7 ]。由于热疗和顺铂均能抑制辐射损伤的

    修复 ,因此本文对两者联合应用以增强肿瘤细胞系

    (敏感和抵抗)对放疗的敏感性进行了实验研究 ,以

    期探索一种临床上更为有效的肿瘤治疗方法。

    1 材料与方法

    1. 1 材料

    1. 1. 1 细胞 来源于患者的人卵巢癌细胞系

    A27802S ,此细胞系对顺铂敏感。A27802S 经顺铂长

    期处理后筛选出对顺铂抵抗的变异株 A27802

    收稿日期:1999203229

    作者简介:缪竞诚(19522) ,男 ,硕士 ,副教授 ,从事免疫

    学和肿瘤放疗、生物治疗的基础研究.

    CP ,此细胞系能抵抗 12μg/ ml 的顺铂。细胞系培养

    于1∶ 1 混合的 DMEM和 F212 培养基中 ,加入7. 5 %

    胎牛血清和 7. 5 %新生牛血清、 10 mmol/ L NaHCO3、20 mmol/ L HEPES ,37℃,饱和湿度 ,5 % CO2。待细

    胞生长至平台期进行实验。

    1. 1. 2 试剂 顺铂注射液购自 David Bull Canada

    Inc. 。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 SLDR实验 细胞先接受第一次 4 Gy X线

    照射 ,然后在37 ℃孵育不同的时间(0～8 小时) ,再

    接受第二次 4 Gy 照射(辐射剂量为 1. 2 Gy/ min) 。

    顺铂处理浓度为 1 或 3μg/ ml ,时间为 1 小时 ,分别

    在第一次照射前 5 分钟结束或照射后 5 分钟开始。

    热疗处理为 40 ℃水浴 ,在第一次照射后 5 分钟开

    始 ,维持时间为 1 小时。顺铂处理如在第一次照射

    后进行 ,则与热疗同时进行。第二次照射后 ,细胞立

    即进行集落形成试验以测定其存活能力。

    1. 2. 2 集落形成试验 细胞经胰酶消化、洗涤后配

    成适当浓度置于平皿中 ,常规培养 10 天(A27802S)

    及14天(A27802CP) ,计数集落(每个集落内细胞 ≥

    50)得出存活率 ,每份标本设3个复份。计算细胞损

    伤修复率(repair ratio ,RR)见下式。

    细胞损伤修复率( %) =

    经修复后细胞存活率

    未经修复细胞存活率 × 100 %

    2 结 果

    两个细胞系对顺铂的反应显示 ,经 0～16μg/ ml

    顺铂 1 小时处理 ,A27802CP比 A27802S对顺铂有强

    · 143 · 实用肿瘤杂志1999年 第14卷 第6期

    ? 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.得多的抵抗力。以往 ,我们曾报道A27802CP对辐射

    也有抵抗力[8 ]。

    A27802S比A27802CP有更强的辐射敏感性。当

    照射剂量被分成两次 ,每次各4 Gy、两次照射之间细

    胞损伤可在孵育时得到修复时 ,两个细胞系都随着

    孵育时间的延长而得到逐步的修复。A27802CP 因

    对辐射有抵抗力而损伤较小 ,A27802S 因受损伤较

    严重 ,故在这一孵育中得到更充分的修复。孵育至

    8 小时 ,A27802S的修复率为12 ,而A27802CP则为4。

    当修复的同时给予40 ℃的热疗时 ,这一修复未被明

    显抑制。

    图1显示了A27802S在首次照射前或照射后给

    予顺铂 1 小时处理的结果。顺铂 1μg/ ml 处理对

    SLDR未显示作用 ,当这一浓度提高到 3μg/ ml ,并且

    在首次照射后用药时 ,SLDR被明显地抑制了(RR在

    单用 X = 12 ,X + Cis = 4. 5) ......