不同来源胰蛋白酶对染色体G显带的影响
摘 要 目的：观察不同来源胰蛋白酶对染色体G显带的影响。方法：常规外周血染色体制备，G显带。用捷达801形态分析系统采集并测量，用SPSS 10.0统计软件处理。结果：发现相同浓度，来源于猪、羊、牛的胰蛋白酶在G显带中的作用不尽相同，其中牛胰蛋白酶具有使染色体拉长的作用。结论：G显带过程中用牛胰蛋白酶消化可提高分辨率。
关键词 胰蛋白酶；染色体；G显带
人类外周血淋巴细胞培养技术和显带方法的应用,使人们不仅可以根据带型鉴别每一条染色体,同时还能深入地研究染色体的形态、变异和畸变及其与表型或临床症状之间的关系。染色体的长短,在染色体结果的分析中起着重要作用,染色体越长其带型越丰富,随着染色体的逐步收缩变短,相邻的带逐步融汇,带型也逐渐简化,因此获得较长的染色体是提高其分辨率的主要途径[1]。有关外周血淋巴细胞染色体的制备影响因素报道很多，但不同来源胰酶对染色体影响报道较少。本文采用相同浓度，不同来源胰蛋白酶同时处理同一标本, 其中牛胰蛋白酶可使染色体拉长,起到提高分辨率的作用。
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂 形态分析系统(江苏省捷达科技发展有限公司)， 3110-CO2培养箱(美国Thermo Forma)，离心机(上海安亭科学仪器厂)，超净台(上海博迅实业有限公司)，恒温水浴箱(江苏金坛市中大仪器厂)，1640培养基(GIBCO)，PHA(广州市医药工业研究所),小牛血清(天津血液病研究所)，猪、羊、牛胰蛋白酶(AMOSCO)，Giemsa染液等。
1.2 方法 采集正常人外周血3ml肝素抗凝，按常规方法培养制片[2]，G显带消化分别用0.025%猪、羊、牛胰蛋白酶，其他步骤均相同，Giemsa染色，形态分析系统采集图像并测量。利用SPSS 100软件分析处理资料，组间数据比较采用方差分析。
2 结果
猪、羊、牛胰蛋白酶消化同一人外周血淋巴细胞G显带染色体如图1、图2、图3。测量结果见表1。
图1 猪胰蛋白酶消化G显带人染色体(略)
图2 羊胰蛋白酶消化G显带人染色体(略)
图3 牛胰蛋白酶消化G显带人染色体(略)
表1 不同来源胰蛋白酶消化人染色体比较(略)
3 讨论
资料报道，外周血淋巴细胞培养染色体G显带技术,从培养到制备各个环节都要求严格,不论是培养过程中的无菌操作,还是制片中的每一个细节都能影响外周血淋巴细胞制备染色体G显带技术的试验结果；获得分裂相多,染色体分散好,带纹清晰的标本,可为临床诊断染色体病提供可靠的实验依据,更好地为临床服务。在体细胞遗传学中，无论对任何细胞株和细胞系的鉴定，或要把某一基因产物或DNA片断准确定位都离不开这一技术。染色体显带方法很多，其中G显带方法较简单，带纹较清晰、精细，制片可长久保存，应用广泛\[3\]。本实验证明相同浓度不同来源胰蛋白酶在染色体G显带中的作用不完全相同，尤其牛胰蛋白酶具有使染色体拉长的作用。其机理有待探讨，但作者认为该作用或许对临床诊断的和科学研究有实用意义。
以上结果可见,牛胰蛋白酶可使染色体拉长,提高分辨率,有望达到高分辨染色体的效果,而且缩短了实验时间,避免制备高分辨染色体的复杂步骤。这样就可发现更多的细微染色体异常, 如微小缺失、重复、倒位、易位等,可使其断点的定位更加精细,提高了实验及诊断的准确率,更好地为临床诊断及优生与遗传咨询工作服务。
参考文献
[1] 任伊娜，郭湘雨. 40 例外周血淋巴细胞培养制备染色体G显带技术分析\[J\] 现代医药卫生, 2004, 20(20):2105
[2] 周焕庚,夏家辉,张思仲.人类染色体 \[M\].北京：科学出版社, 1987：274
[3] 李国珍.染色体及其研究方法\[M\].北京：科学出版社，1987：152.
作者简介：高丽君(1957-)，女，学士，高级实验师。
(包头医学院生物医学研究中心，组织胚胎学教研室*，基因诊断研究所**，内蒙古 包头 014010), http://www.100md.com(高丽君 宋芳 周立社 秦文斌)
关键词 胰蛋白酶；染色体；G显带
人类外周血淋巴细胞培养技术和显带方法的应用,使人们不仅可以根据带型鉴别每一条染色体,同时还能深入地研究染色体的形态、变异和畸变及其与表型或临床症状之间的关系。染色体的长短,在染色体结果的分析中起着重要作用,染色体越长其带型越丰富,随着染色体的逐步收缩变短,相邻的带逐步融汇,带型也逐渐简化,因此获得较长的染色体是提高其分辨率的主要途径[1]。有关外周血淋巴细胞染色体的制备影响因素报道很多，但不同来源胰酶对染色体影响报道较少。本文采用相同浓度，不同来源胰蛋白酶同时处理同一标本, 其中牛胰蛋白酶可使染色体拉长,起到提高分辨率的作用。
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂 形态分析系统(江苏省捷达科技发展有限公司)， 3110-CO2培养箱(美国Thermo Forma)，离心机(上海安亭科学仪器厂)，超净台(上海博迅实业有限公司)，恒温水浴箱(江苏金坛市中大仪器厂)，1640培养基(GIBCO)，PHA(广州市医药工业研究所),小牛血清(天津血液病研究所)，猪、羊、牛胰蛋白酶(AMOSCO)，Giemsa染液等。
1.2 方法 采集正常人外周血3ml肝素抗凝，按常规方法培养制片[2]，G显带消化分别用0.025%猪、羊、牛胰蛋白酶，其他步骤均相同，Giemsa染色，形态分析系统采集图像并测量。利用SPSS 100软件分析处理资料，组间数据比较采用方差分析。
2 结果
猪、羊、牛胰蛋白酶消化同一人外周血淋巴细胞G显带染色体如图1、图2、图3。测量结果见表1。
图1 猪胰蛋白酶消化G显带人染色体(略)
图2 羊胰蛋白酶消化G显带人染色体(略)
图3 牛胰蛋白酶消化G显带人染色体(略)
表1 不同来源胰蛋白酶消化人染色体比较(略)
3 讨论
资料报道，外周血淋巴细胞培养染色体G显带技术,从培养到制备各个环节都要求严格,不论是培养过程中的无菌操作,还是制片中的每一个细节都能影响外周血淋巴细胞制备染色体G显带技术的试验结果；获得分裂相多,染色体分散好,带纹清晰的标本,可为临床诊断染色体病提供可靠的实验依据,更好地为临床服务。在体细胞遗传学中，无论对任何细胞株和细胞系的鉴定，或要把某一基因产物或DNA片断准确定位都离不开这一技术。染色体显带方法很多，其中G显带方法较简单，带纹较清晰、精细，制片可长久保存，应用广泛\[3\]。本实验证明相同浓度不同来源胰蛋白酶在染色体G显带中的作用不完全相同，尤其牛胰蛋白酶具有使染色体拉长的作用。其机理有待探讨，但作者认为该作用或许对临床诊断的和科学研究有实用意义。
以上结果可见,牛胰蛋白酶可使染色体拉长,提高分辨率,有望达到高分辨染色体的效果,而且缩短了实验时间,避免制备高分辨染色体的复杂步骤。这样就可发现更多的细微染色体异常, 如微小缺失、重复、倒位、易位等,可使其断点的定位更加精细,提高了实验及诊断的准确率,更好地为临床诊断及优生与遗传咨询工作服务。
参考文献
[1] 任伊娜，郭湘雨. 40 例外周血淋巴细胞培养制备染色体G显带技术分析\[J\] 现代医药卫生, 2004, 20(20):2105
[2] 周焕庚,夏家辉,张思仲.人类染色体 \[M\].北京：科学出版社, 1987：274
[3] 李国珍.染色体及其研究方法\[M\].北京：科学出版社，1987：152.
作者简介：高丽君(1957-)，女，学士，高级实验师。
(包头医学院生物医学研究中心，组织胚胎学教研室*，基因诊断研究所**，内蒙古 包头 014010), http://www.100md.com(高丽君 宋芳 周立社 秦文斌)