金属_____嗜麦芽窄食单胞菌；金属β内酰胺酶；原核表达

L1型金属β内酰胺酶的原核表达及特性研究

http://www.100md.com 《四川生理科学杂志》 2005年第4期

金属,,嗜麦芽窄食单胞菌；金属β内酰胺酶；原核表达,1材料和方法,2实验结果,3讨论,参考文献

     摘要目的：对临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌所产L1型金属β内酰胺酶基因进行原核表达,并检测多种β内酰胺类抗生素对重组L1酶的稳定性。方法：PCR扩增L1酶的编码基因，将其亚克隆入pUCmT载体，测序后将L1基因克隆至表达载体pET41a(+)后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达，分光光度计测定多种β内酰胺类抗生素对L1型金属β内酰胺酶的稳定性。结果：本实验中的L1酶与国外同类酶的氨基酸同源性为92.44%。重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近，氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定。结论：对L1型金属β内酰胺酶的克隆测序及成功表达为进一步研究该酶的分子生物学特性奠定了基础。抗生素对L1酶的稳定性研究为指导临床合理应用抗生素提供了科学的理论依据。

    关键词嗜麦芽窄食单胞菌；金属β内酰胺酶；原核表达

    嗜麦芽窄食单胞菌是一种临床常见的条件致病菌，是目前导致院内感染的重要原因之一。其所产L1型金属β-内酰胺酶能够水解包括亚胺培南在内的大多数β内酰胺类抗生素，且该酶对克拉维酸及舒巴坦等β内酰胺酶抑制剂不敏感。本实验以临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌710的基因组为模板，PCR扩增L1酶的编码基因，对L1编码基因进行序列分析及表达。观察多种β内酰胺类抗生素对L1的稳定性。从基因和蛋白水平系统地探讨嗜麦芽窄食单胞菌所产金属β内酰胺酶的特性，为指导临床合理用药提供科学的理论依据。

     1 材料和方法

    1.1 菌株及试剂菌株710为医院感染病人分离出的嗜麦芽窄食单胞菌，表达宿主菌大肠埃希菌BL21(DE3)及表达载体pET41a(+)由汕头大学医学院傅玉才教授馈赠 ......

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