摘 要 目的: 探讨肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae，Kp)分泌因子及活菌诱导肺上皮细胞株表达和分泌IL-8的状况。 方法: 用临床分离株Kp03116、Kp03183的细菌培养上清或活菌刺激肺上皮细胞株A549和SPC-A-1，酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞IL-8表达量。 结果: ①两株Kp培养上清分别刺激A549或SPC-A-1后，IL-8表达量均有显著增高(P<0.01)，且随上清刺激浓度增加而上升。②两株Kp及DH5(活菌分别与SPC-A-1共孵育2h，用庆大霉素杀死胞外菌，继续孵育24h后两株Kp诱导细胞IL-8表达量均显著高于DH5α(P<0.01)，且随细菌数/细胞数比例增大而上升。 结论: Kp分泌因子及活菌都能够诱导肺上皮细胞IL-8表达，而活菌上调IL-8的效应较培育上清分泌因子更显著，提示肺上皮细胞在Kp感染刺激的肺部炎症反应中起重要作用。

    关键词 肺炎克雷伯杆菌;人肺上皮细胞;白细胞介素-8

    肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae，Kp)是当前最重要的医院内机会致病菌之一 [1] 。尤其是Kp引起的肺部感染，因常常在免疫功能低下的病人中发生，临床可表现为迅速进展的多囊性肺脓肿，抗生素治疗不能及时产生疗效，所以发病率和致死率都相当高。呼吸道上皮细胞是致病菌侵入肺组织的第一道防线，有研究提示Kp粘附和入侵肺上皮细胞是肺部炎症的早期阶段 [2] 。目前对于Kp致病机制的研究多集中在其LPS和荚膜与侵袭力的关系上，对于细菌产物刺激上皮细胞或活细菌侵入上皮细胞后引起的细胞炎症反应尚未见有研究报道。IL-8是细胞炎症中分泌的一种重要的趋化细胞因子，本研究旨在通过体外实验了解Kp分泌因子及活菌对肺上皮细胞表达分泌IL-8的影响，以探讨Kp感染后机体炎症反应的机理。

     1 材料和方法

    1.1 细菌培养上清的制备 肺炎克雷伯杆菌临床分离标准株编号03116、03138(以下简写为Kp03116、Kp03183)由四川抗生素研究所惠赠，分别接种于TSB培养基(Sigma)，37℃振荡培养72h，10000g、4℃离心30min，收取上清，用分子截留量1000道尔顿的YM1超滤膜(Millipore)超滤浓缩约5倍，浓缩上清液用0.2μm滤器滤过除菌，-80℃保存待实验用。

    1.2 活菌培养 Kp03183、Kp03116、DH5α(本实验室保存)分别接种于LB培养基，37℃振荡培养过夜 ......