HMGN2_____HMGN2_；_重组表达质粒

HMGN2的重组表达质粒的构建及其抗菌功能研究

http://www.100md.com 《四川生理科学杂志》 2005年第4期

HMGN2,,HMGN2,；,重组表达质粒,；,抗菌功能,1材料与方法,2结果,3讨论,参考文献

     摘要目的：构建HMGN2重组表达载体，探讨HMGN2分子抗菌作用。方法：用基因克隆的方法构建pET 32ac(+)HMGN2重组表达质粒，经IPTG诱导表达后，用亲和层析的方法纯化HisHMGN2融合蛋白，TricineSDSPAGE电泳鉴定其分子量，行琼脂糖弥散法检测其抗菌功能。结果：成功构建了pET32ac(+)HMG17重组表达质粒，其表达的融合蛋白对致病性大肠杆菌54080，54299以及金黄色葡萄球菌ATCC25923均有抗菌活性。结论：HMGN2是一种抗菌分子，可能参与了体内的天然免疫防御作用。

    关键词 HMGN2 ；重组表达质粒；抗菌功能

    高迁移率蛋白(high mobility group，HMG)是一种广泛存在于真核生物染色质内的非组蛋白，因其分子量小，聚丙稀酰胺凝胶电泳时迁移快速而得名。近年来研究发现HMG主要结合于真核细胞的活性转录基因的核小体区域内，在维持染色质活性结构，以及基因转录，复制等过程中起着重要作用[1]。HMG蛋白可分为HMGA、HMGB、HMGN三个不同的家族。HMGN2为HMGN家族分子之一。HMGN2分子除了基因的转录调控有关外，目前对HMGN2分子其它的生物学功能报道相对较少。本实验利用基因克隆的方法构建了 pET32ac(+)HMGN2重组表达质粒，经IPTG诱导后，用亲和层析的方法纯化融合蛋白，然后行琼脂糖弥散法抗菌实验，以证实此融合蛋白的抗菌功能。

     1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂琼脂糖、溶菌酶、胰蛋白胨、酵母提取物、大豆培养基(Sigma公司)。丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、TEMED、蛋白质Marker(Merck公司)；琼脂糖、溶菌酶、过硫酸铵、Tris、Tricine(Sigma公司) ......

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