重组质粒pEGFP-BMP7的构建及在大鼠骨髓MSCs中的表达
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目的 本研究旨在通过基因重组策略体外构建重组质粒pEGFP-BMP7，并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法 应用RT-PCR方法从大鼠肾脏中分离、扩增目的基因片段，并进行测序；随后将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中，进行双酶切来鉴定克隆的正确性。通过脂质体介导重组pEGFP-BMP7瞬时转染大鼠骨髓MSCs，确定转染效率；并通过RT-PCR、免疫细胞化学手段检测BMP7的表达。结果 通过RT-PCR成功获得了一1.3kbp的cDNA片段；该cDNA除756bp处有一碱基从T突变成A外，其余序列与大鼠BMP7基因完全相符。重组质粒双酶切图谱显示，BMP7 cDNA被正确插入到载体中。绿色荧光蛋白(GFP)在大鼠MSCs中早期瞬时转染效率可达33%。转染后RT-PCR和免疫细胞化学检测证实了重组pEGFP-BMP7在大鼠MSCs中的表达。 结论 本研究成功构建了重组真核表达质粒pEGFP-BMP7，并在大鼠骨髓MSCs中得到表达。该策略有助于应用BMP7行基因治疗，促进DO骨痂形成和修复颅颌面骨缺损。
目的 本研究旨在通过基因重组策略体外构建重组质粒pEGFP-BMP7，并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法 应用RT-PCR方法从大鼠肾脏中分离、扩增目的基因片段，并进行测序；随后将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中，进行双酶切来鉴定克隆的正确性。通过脂质体介导重组pEGFP-BMP7瞬时转染大鼠骨髓MSCs，确定转染效率；并通过RT-PCR、免疫细胞化学手段检测BMP7的表达。结果 通过RT-PCR成功获得了一1.3kbp的cDNA片段；该cDNA除756bp处有一碱基从T突变成A外，其余序列与大鼠BMP7基因完全相符。重组质粒双酶切图谱显示，BMP7 cDNA被正确插入到载体中。绿色荧光蛋白(GFP)在大鼠MSCs中早期瞬时转染效率可达33%。转染后RT-PCR和免疫细胞化学检测证实了重组pEGFP-BMP7在大鼠MSCs中的表达。 结论 本研究成功构建了重组真核表达质粒pEGFP-BMP7，并在大鼠骨髓MSCs中得到表达。该策略有助于应用BMP7行基因治疗，促进DO骨痂形成和修复颅颌面骨缺损。
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