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编号:10970565
风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析
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     本文主要目的是在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒JR23株包膜糖蛋白E1,为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定了基础。E1基因的表达质粒pGAPZαA-E1经Avr II线性化后用LiCl法转化酵母菌,在YPD(含100μg/ml ZeocinTM)平板上两次筛选,挑出单菌落,于液体YPD中培养,并在不同时点收集培养物,用SDS-PAGE和Western-blot进行分析。SDS-PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达,在48h时表达量达到最高,之后趋于稳定,上清和细胞中均有蛋白表达。Western-blot结果表明上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应,而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应,不能与单克隆抗体反应。这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞,并经过折叠形成了正确的构像,能够与单克隆抗体结合;而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去,没有形成能够被单抗识别的构像,不能与单抗结合。这些结果表明E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达,且免疫反应性良好。

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