疯牛病和羊痒病WESTERN BLOT检测方法的建立
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参见附件。
以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的酶标马抗鼠二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western Blot检测方法。对Western Blot 各种反应条件进行摸索，并确定了最佳工作条件，结果表明：当匀浆缓冲液为RIPA时最佳反应条件为浓缩胶内电泳电压为恒压90V，分离胶电泳电压为恒压160V，转印的最佳电压和时间为恒压100V 1.5小时；封闭液为3%BSA时，封闭15分钟，封闭效果最好；AH6的最佳稀释浓度为1：4000，4℃下孵育过夜，马抗鼠二抗的最佳稀释浓度1：1000，室温下孵育30分钟。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics®-Check WESTERN进口试剂盒的检测结果比较，发现其敏感性为100%，特异性为99.4%，而进口试剂盒分别为100%，100%，与进口试剂盒无显著差异，这为在该基础上建立国产试剂盒提供了条件。
以朊蛋白单抗AH6和碱性磷酸酶标记的酶标马抗鼠二抗建立了疯牛病和羊痒病的Western Blot检测方法。对Western Blot 各种反应条件进行摸索，并确定了最佳工作条件，结果表明：当匀浆缓冲液为RIPA时最佳反应条件为浓缩胶内电泳电压为恒压90V，分离胶电泳电压为恒压160V，转印的最佳电压和时间为恒压100V 1.5小时；封闭液为3%BSA时，封闭15分钟，封闭效果最好；AH6的最佳稀释浓度为1：4000，4℃下孵育过夜，马抗鼠二抗的最佳稀释浓度1：1000，室温下孵育30分钟。采用已确立的反应条件对样品进行检测并与Prionics®-Check WESTERN进口试剂盒的检测结果比较，发现其敏感性为100%，特异性为99.4%，而进口试剂盒分别为100%，100%，与进口试剂盒无显著差异，这为在该基础上建立国产试剂盒提供了条件。
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