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编号:10971911
维生素K2 对K562细胞生长抑制作用的实验研究
http://www.100md.com 《东南大学学报(医学版)》 2005年第5期
维生素,,],维生素K,2,;K562细胞;细胞凋亡;细胞周期;基因表达;抗凋亡基因bcl.2,维生素K2对K562细胞生长抑制作用的实验研究,1材料与方法,2结果,3讨论,[参考文献]
     摘要]目的: 研究维生素K2 (VK 2 )对慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562细胞的生长抑制作用及其机制。 方法: 采用形态学检测VK2 作用后的细胞形态改变,MTT方法检测VK2 对K562细胞的生长抑制作用,流式细胞仪Annexin-V FITC .PI分析细胞凋亡,PI染色分析细胞周期变化,RT.PCR技术检测抗凋亡基因bcl.2、促凋亡基因bax的表达。 结果: 经VK2 作用后细胞出现明显的形态学改变:细胞变小,核固缩,核染色质聚集边挤于核膜内侧呈新月形以及典型凋亡小体形成等;MTT结果显示VK 2 对K562细胞有明显的抑制作用,作用72h半数抑制浓度为25.1μmol·L-1 ;流式细胞仪检测结果显示随着VK 2 浓度的增加凋亡率逐渐增高(P<0.05),随着作用时间的延长凋亡率也逐渐增高(P<0.05);VK 2 作用72h,S期细胞逐渐减少(r=-0.99,P<0.05),G 0 .G 1 期细胞逐渐增加(r=1.00),细胞被阻滞在G 0 .G 1 期;随着VK 2 浓度的增高抗凋亡基因bcl.2表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异。 结论: VK 2 通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,并呈浓度和时间依赖性;抗凋亡基因bcl.2下调可能是VK 2 诱导K562细胞发生凋亡的机制之一。

    [关键词] 维生素K 2 ;K562细胞;细胞凋亡;细胞周期;基因表达;抗凋亡基因bcl.2

    维生素K2 (VK2 )是天然的具有萘醌核结构的化合物,有凝血活性,临床上作为止血药物已应用多年。近几年有关VK2 抗肿瘤的作用1~7] 日益受到重视,但对作用机制研究甚少。本实验研究了VK 2 对K562细胞的生长增殖、诱导凋亡作用及其机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与细胞培养 VK2 购自Sigma公司,用无水乙醇配成浓度为5、10、20和40μmol·L-1 ,实验表明该浓度乙醇对K562细胞生长无影响。K562细胞株购自上海细胞生物研究所,用RPMI.1640培养液加10%小牛血清,在37℃饱和湿度条件下体积分数为0.05的CO 2 培养箱中培养。

    1.2 MTT比色法取对数生长期细胞,调细胞浓度为1×10 5 ml-1 接种于96孔培养板,实验组分成4组分别加入不同浓度(5、10、20和40μmol·L-1 )VK2 ,对照组不加药,另设空白对照组(只加培养液)。置37℃、体积分数为0.05的CO2 饱和湿度培养箱中孵育 ......

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