抗真菌研究中体癣模型研究现状及方法学思考
皮肤癣菌病由皮肤癣菌侵犯表皮的角质层、毛发和甲板引起。进行抗真菌研究包括体外实验和体内实验,目前体外抗真菌实验报道较多,进行动物模型实验报道极少,本实验室研究人员查阅近年抗真菌实验参考文献和结合自身工作中实践,总结了体癣模型实验的常用方法并提出几点方法学思考。
1 体癣模型常用造模方法
实验一般选用健康白色豚鼠,在背部局部脱毛,形成直径约3~5cm的无毛区域,24小时后用无菌细砂纸檫破皮肤,以轻度渗血为宜,接着用配好的真菌菌株孢子菌丝混悬液0.1ml,均匀接种于破损皮肤上,然后每天观察局部皮肤病损程度,当局部出现红肿后,分组给药并每2天取标本做真菌镜检和培养,观察药物的抗真菌作用和豚鼠的病变程度。
2 方法学思考
(1)真菌菌株的选择:文献报道多选用石膏样毛癣菌,在实
验中我们发现石膏样小孢子菌、羊毛状小孢子菌和红色毛癣菌也能引起病变,成功造成体癣模型。但菌株可能因为来源不同而致病强弱差异很大,所以抗菌研究需要结合相应体外实验进行。
(2)真菌混悬液中真菌定量:很多文献报道缺乏接种真菌混悬液中菌丝和孢子数量,我们发现数量不同对病变程度影响较大,菌株不同需要的数量级也不同,最好先做好预试,一般以105~108数量级为宜。
(3)皮肤病变程度的评价:很多文献资料以某天治愈率和病变局部直径为主要指标判断病变程度,这缺乏相应的客观性和影响因素较大,我们采用日本文献报道的评分来衡量,具体如下:无病变为0、有少数“小红斑”性丘疹或病变倾向痊愈或出现新生毛发者为1、红斑面积扩大,周围发红者为2、红斑全面扩大,有大量鳞屑及厚痂皮形成者为3、出现出血者为4。这种标准能较好反映局部病变程度,统计也方便。
(成都中医药大学药理教研室,成都 610075), 百拇医药(曾勇)
1 体癣模型常用造模方法
实验一般选用健康白色豚鼠,在背部局部脱毛,形成直径约3~5cm的无毛区域,24小时后用无菌细砂纸檫破皮肤,以轻度渗血为宜,接着用配好的真菌菌株孢子菌丝混悬液0.1ml,均匀接种于破损皮肤上,然后每天观察局部皮肤病损程度,当局部出现红肿后,分组给药并每2天取标本做真菌镜检和培养,观察药物的抗真菌作用和豚鼠的病变程度。
2 方法学思考
(1)真菌菌株的选择:文献报道多选用石膏样毛癣菌,在实
验中我们发现石膏样小孢子菌、羊毛状小孢子菌和红色毛癣菌也能引起病变,成功造成体癣模型。但菌株可能因为来源不同而致病强弱差异很大,所以抗菌研究需要结合相应体外实验进行。
(2)真菌混悬液中真菌定量:很多文献报道缺乏接种真菌混悬液中菌丝和孢子数量,我们发现数量不同对病变程度影响较大,菌株不同需要的数量级也不同,最好先做好预试,一般以105~108数量级为宜。
(3)皮肤病变程度的评价:很多文献资料以某天治愈率和病变局部直径为主要指标判断病变程度,这缺乏相应的客观性和影响因素较大,我们采用日本文献报道的评分来衡量,具体如下:无病变为0、有少数“小红斑”性丘疹或病变倾向痊愈或出现新生毛发者为1、红斑面积扩大,周围发红者为2、红斑全面扩大,有大量鳞屑及厚痂皮形成者为3、出现出血者为4。这种标准能较好反映局部病变程度,统计也方便。
(成都中医药大学药理教研室,成都 610075), 百拇医药(曾勇)