[摘要]目的: 观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及基质金属蛋白酶.2(MMP.2)、基质金属蛋白酶.9(MMP.9)表达的影响，研究利凡诺的抗肿瘤转移作用。 方法: 用噻唑蓝(MTT)法检测利凡诺对B16黑色素瘤细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清的MMP.2蛋白相对含量;免疫细胞化学染色检测MMP.2、MMP.9蛋白表达情况。 结果: MTT法检测结果显示，不同浓度的利凡诺对细胞都有明显抑制并伴有时间及浓度依赖性;6.25、12.5μg·ml-1 的利凡诺组在72h与同时段对照组比有显著差异(P<0.05);利凡诺各药物组的MMP.2、MMP.9蛋白阳性表达随药物浓度的增加而减弱。 结论: 利凡诺可以抑制B16细胞的生长，并且具有潜在的抑制肿瘤侵袭和转移的作用。

    [关键词] 利凡诺;B16黑色素瘤细胞;基质金属蛋白酶;转移

    利凡诺(ethacridine)是临床常用的皮肤黏膜消毒剂和中止妊娠药，本研究组已经发现其对S.180腹水瘤(小鼠腹水瘤)和实体瘤都有明显的抑制作用1] 。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一种降解细胞外基质的蛋白酶，在肿瘤侵袭和转移中起着重要作用，尤其是MMP.2和MMP.92] 。目前尚不清楚利凡诺能否通过影响肿瘤细胞MMPs的表达而抑制肿瘤的转移，我们通过观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及MMPs表达的影响，进一步探讨利凡诺抑制肿瘤细胞生长的机制以及其临床应用的可能性。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞培养及处理 B16黑色素瘤细胞株(购自中国科学院上海细胞生物研究所)接种于含10%小牛血清和100U·ml-1 青霉素、100mg·ml1 链霉素的RPMI1640培养液中，置于37℃、体积分数为0.05的CO2 恒温培养箱中培养，每隔2～3d传代1次。实验时选取对数生长期的细胞，用0.25%胰酶和0.02%EDTA混合消化液消化制成单细胞悬液。

    1.1.2 利凡诺的配制及细胞分组 每次实验加药前取利凡诺注射液[50mg·(2ml) -1 ，江苏天禾制药有限公司，批号0306041]，用含5%小牛血清的RPMI1640培养液将其稀释至浓度分别为3.13、6.25、12.5μg·ml-1 (按体积比为18000、14000、12000稀释)后立刻使用 ...... 濡傛灉鎮ㄥ湪浣跨敤鎵嬫満绛夋祦瑙堟椂鏃犳硶鏌ョ湅鎴栦笅杞藉叏鏂囷紝鍙兘鏄鎼滅储寮曟搸澶辩湡鈥滆浆鐮佲€濓紝璇风偣鍑诲睆骞曟渶涓嬫柟鐨勨€滅數鑴戠増鈥濇垨鈥滃師缃戦〉鈥濊闂€�


闄愪簬鏈嶅姟鍣ㄥ帇鍔涳紝缃戠珯閮ㄥ垎淇℃伅鍙緵鐖卞績浼氬憳鎴栨湁涓€瀹氱Н鍒嗙殑娉ㄥ唽浼氬憳娴佽銆�
姝�淇℃伅闇€瑕� 2 绉垎锛堝厤璐规敞鍐岀櫥褰曞悗姣忓ぉ鍙互棰嗗彇10涓Н鍒�锛夈€�
    淇℃伅浠呬緵鍙傝€冿紝涓嶆瀯鎴愪换浣曚箣寤鸿銆佹帹鑽愭垨鎸囧紩銆傛枃绔犵増鏉冨睘浜庡師钁椾綔鏉冧汉锛岃嫢鎮ㄨ涓烘鏂囦笉瀹滆鏀跺綍渚涘ぇ瀹跺厤璐归槄璇伙紝璇烽偖浠舵垨鐢佃瘽閫氱煡鎴戜滑锛屾垜浠敹鍒伴€氱煡鍚庯紝浼氱珛鍗冲皢鎮ㄧ殑浣滃搧浠庢湰缃戠珯鍒犻櫎銆�

寰俊鏂囩珷  鍏虫敞鐧炬媷  璇勮鍑犲彞  鎼滅储鏇村