摘 要 常规全细胞膜片钳模式形成的同时，细胞内液与电极液交换造成细胞内物质丢失，此现象对小细胞的影响更为明显。穿孔膜片钳技术使电极与细胞胞质之间保持电学连续性，它使细胞内环境保持稳定，利于研究胞内信息传导机制，并可改善常规全细胞膜片钳时破膜所造成的封接稳定性的破坏，有望提高实验的成功率。本研究报道应用此技术在猪冠状动脉平滑肌细胞上记录的全细胞K + 电流和由大电导钙激活钾通道BKCa所介导的自发瞬时外向电流ISTOCs。

    关键词 穿孔膜片钳技术;常规全细胞膜片钳技术;BKCa通道;自发瞬时外向电流;两性霉素-B 1 前言

    在全细胞记录状态形成的同时，细胞内液与电极液之间灌流造成的细胞内物质丢失(washout)，此现象对小细胞的影响尤为明显，此法可造成细胞内固有的可溶性有机分子丢失，而丢失的这类有机分子可能在维持离子通道活性和细胞内信号传递机制中起重要作用。已发现全细胞记录法可出现钙通道机能下降(rundown)等现象 [1，2] ，此外用全细胞记录法记录由受体介导的胞内信号传导机制时常出现记录失败的现象 [2] ，而且细胞内钙缓冲能力的变化也是其缺陷之一 [3] 。

    本研究室多年来从事猪冠状动脉平滑肌细胞BKCa通道的研究，此细胞体积微小(约为15×4μm 2 ) [4，5] ，已进行的研究表明常规全细胞膜片钳记录时，易引起细胞内物质丢失，而且在负压抽吸破膜或进行电穿孔时，原已形成巨阻封接的细胞容易脱落，即使形成全细胞模式，破口处也很容易被破膜形成的细胞碎片重新堵住，造成记录电流衰减的假象，最终引起记录失败。在研究胞内钙浓度局部瞬时增加(钙火花，calcium spark)对平滑肌细胞上由BKCa通道开放所介导的STOCs(spontaneous transient outward currents，自发瞬时外向电流)时，即使在电极液内添加能量如ATP，GTP，腺苷，也可能由于细胞内钙缓冲能力的变化而很难记录到STOCs，有的细胞在破膜后短时间内可记录到STOCs，稍后就再也无法记录到 [6] 。

    因此常规全细胞膜片钳记录法有一定缺陷，在一些特定的研究中其应用受到限制，为此摸索出适合我们研究，特别是进行胞内信号传导机制研究时稳定的穿孔膜片钳技术有重要意义，将为后续的工作奠定良好的实验基础。本实验通过记录猪冠状动脉平滑肌细胞的STOCs，比较穿孔膜片钳记录法与常规全细胞膜片钳记录法的差别，现报道如下。

     2 实验方法

    2.1 电极内液和浴液的配制 注意在穿孔膜片钳记录时电极液和浴液中氯离子和不通透的阴离子浓度要对称 ......