单启动子双表达体pIRESp16ink4ahRb1的构建及其抑制骨肉瘤细胞增
p16ink4a,,;hRb1;内部核糖体插入位点;细胞周期,材料与方法,1主要实验试剂,2质粒、菌种及细胞株
摘要: 目的 应用内部核糖体插入位点(IRES)序列构建单启动子双表达穿梭载体质粒pIRESp16ink4ahRb1,导入骨肉瘤MG63细胞株后
,在基因和蛋白水平鉴定表达,并观察细胞增殖情况。方法 利用基因工
程技术,将p16ink4a与hRb1全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中,质
粒构建通过PCR、双酶切与测序鉴定;用Metafectene介导转染骨肉瘤细胞
株MG63,G418筛选获得抗性克隆,通过RTPCR和Western Blot半定量分
析外源基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法与细胞生长曲线观察细胞增
殖情况。结果 成功构建出含p16ink4a与hRb1全长基因片段的单启动子双
表达穿梭载体pIRESp16ink4a hRb1,RTPCR及Western Blot检测证实
p16ink4a、hRb1基因在靶细胞基金和蛋白水平分别有独立表达;并且基因
导入组细胞生长抑制率均显著上升。结论 pIRES p16ink4ahRb1双顺
反子穿梭载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功,为进一步研究
p16ink4a与hRb1相互关系在细胞周期调控中的作用奠定了基础。
关键词:;hRb1;内部核糖体插入位点;细胞周期
Construction and expression of the pIRESp16ink4ahRb1
bicistronic shuttle vector and its effect on osteosarcoma cell
proliferation
LIAO Xiang,YANG Shuhua,SHAO Zengwu,et al.
(Department of Orthopedic,Union Hospital,Tongji Medical
Collage,Huazhong university of Science and Technology,Wuhan
430022,China)
Abstract: Objective To construct the p16ink4a/hRb1
bicistronic shuttle vector by internal ribosome entry site(IRES)
sequence and explore the feasibility of it transferred into and ......
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