Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞的杀伤效应
关键词：Herceptin；阿霉素；乳腺肿瘤/药物治疗；序贯给药
摘要：目的 探讨Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞株的杀伤效应。 方法 应用Herceptin、阿霉素及二者联合序贯应用于对数生长期的乳腺癌BT-474细胞，光学显微镜下观察各组细胞用药前后细胞形态变化，流式细胞仪检测各组细胞HER-2/neu的表达率、HER-2/neu表达的平均荧光强度及各组细胞的死亡率。 结果 光学显微镜下各用药组细胞均有不同程度的变暗、细胞碎片增多、细胞外形部分不规则、细胞内颗粒增多；流式细胞仪检测表明各组间细胞HER-2/neu表达率无显著性差异，但各用药组细胞HER-2/neu表达的平均荧光强度明显低于对照组(P<0.05)；流式细胞仪检测表明各用药组细胞的的死亡率明显高于对照组，Herceptin后续应用阿霉素组细胞的的死亡率明显高于阿霉素后续应用Herceptin组(P<0.05)。 结论 应用Herceptin后再辅以阿霉素化疗，对乳腺癌细胞杀伤效应最强，为临床乳腺癌生物化疗的序贯应用模式提供了实验依据。
Killing effect of sequential Herceptin and adriamycin treatment on breast cancer cell line in vitro
TAN Ke, FAN Yi-xiang, MIAO Jing-xia, LÜ Cheng-wei, YAN Xiao, LUO Rong-cheng
Center of Oncology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China
Abstract: Objective To observe the killing effect of Herceptin and adriamycin sequentially applied on breast cancer cell line in vitro. Methods BT-474 human breast cancer cells in exponential phase of growth were treated with Herceptin alone, adriamycin alone and their sequential administration (Herceptin before adriamycin and vice versa), respectively. Under optical microscope, the morphological changes of the cells were observed before and after drug administration. The expression rate and mean fluorescence intensity (MFI) of HER-2/neu and cell death rate were detected by flow cytometry. Results Microscopically, the cells treated with different protocols all exhibited such changes as darkening and increase of cellular debris with irregular cell morphology. Flow cytometry revealed no significant difference in the expression rate of HER-2/neu in each group before and after treatment, but the MFI of HER-2/neu and death rate of the treated cells were significant different from those of the control group (P<0.05). The cell death rate of Herceptin-pretreated cells was significantly higher than that of adriamycin-pretreated ones (P<0.05). Conclusion Herceptin pretreatment enhances the killing effect of adriamycin on breast cancer cell line BT-474, which provides experimental evidence for designing clinical sequential biochemothrapy of breast cancer.
Key words: Herceptin; adriamycin; breast neoplasms/drug therapy; sequentially applied
乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，传统的方法如手术、放疗和化疗等均存在不同程度的不足[1-4]。20世纪80年代起生物治疗已逐渐成为继上述3种传统模式后的第4大治疗模式，在肿瘤的综合治疗中发挥着越来越重要的作用。已有许多临床试验证明，Herceptin单药治疗或与诺维本、泰索帝、泰素、健择、希罗达等化疗药物联用治疗转移性乳腺癌均有较好的疗效[5]。本研究从细胞水平探讨Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞的杀伤作用，旨在为临床乳腺癌生物化疗的序贯应用模式提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 试剂与仪器
RMPI1640培养液购自美国Gibco公司，胎牛血清(FCS)购自美国Hyclone公司，小牛血清购自兰州民海生物公司，0.25%胰蛋白酶购自上海化学试剂公司，Herceptin由上海罗氏公司购进(终浓度1.05 mg/ml)，阿霉素由深圳万乐公司购进(终浓度1 mg/ml)，Annexin V-FIFC试剂盒购自晶美生物公司。人乳腺癌细胞系BT-474由北京协和医科大学基础医学研究所细胞室购进。流式细胞仪(FACS)采用Becton Dickinson FACS Calibur型。
1.2 方法
1.2.1 杀伤实验 BT-474细胞培养于含10%FCS的RPMI1640液中。待乳腺癌细胞长至对数生长期，用24孔板培养BT-474细胞，1×105细胞/孔。37 ℃、5%CO2培养箱中培养过夜，镜下观察细胞呈贴壁生长。每3孔为1组，分阿霉素组、Herceptin组、先阿霉素后续应用Herceptin组、先Herceptin后续应用阿霉素及空白对照共5组。先阿霉素后续应用Herceptin组加阿霉素10 μl，先Herceptin后续应用阿霉素加Herceptin 167 μl；该两组作用4 h后，上述4组分别加入阿霉素10 μl、Herceptin 167 μl、Herceptin 168 μl、阿霉素12 μl，空白对照组加等体积培养液；继续作用4 h后，移去药液换培养液继续培养12 h。反应终止后消化、收集细胞，进行以下实验。
1.2.2 细胞形态观察 光学显微镜高倍和低倍下观察不同用药组及对照组细胞形态及内部结构的变化。
1.2.3 HER-2/neu表达的变化 各取上述实验组及对照组的部分细胞，移入Ependorf管后以0.01 mol/L、pH7.4的PBS洗涤2次；各管加入Anti-HER-2/neu APC 5 µl，吹打混匀，避光于室温反应30 min后，1000×g离心3 min，弃上清。PBS洗涤1次以去除游离Anti-HER-2/neu APC。FACS检测各组细胞HER-2/neu表达率及HER-2/neu表达的平均荧光强度(MFI)。
1.2.4 杀伤效应检测 各取上述实验组及对照组的部分细胞，移入Ependorf管后以0.01 mol/L、pH 7.4的PBS洗涤2次。各管加入Annexin V/FITC 5 µl及碘化丙锭10 µl，吹打、混匀后室温下避光反应15 min，1000×g离心3 min，弃上清。PBS洗涤细胞1次以去除游离的Annexin V/FITC及碘化丙锭。FACS检测各组细胞的死亡率。
1.3 统计学处理
统计软件为SPSS10.0，各组HER-2/neu表达率、MFI、细胞死亡率均用x±s表示，上述指标在实验组与对照组之间以及各实验组之间的比较采用t检验，
2 结果
2.1 细胞形态改变
低倍镜下：各用药组细胞均有不同程度的变暗、细胞碎片增多，而对照组则细胞透亮且细胞碎片少；高倍镜下：各用药组细胞外形部分不规则、细胞内颗粒增多，而对照组细胞圆而规则且胞内颗粒少。
2.2 HER-2/neu表达的变化
对照组HER-2/neu表达率为99.1%，阿霉素组、Herceptin组、阿霉素后续应用Herceptin组、Herceptin后续应用阿霉素组HER-2/neu表达率分别为98.8%、97.4%、97.7%和96.6%。对照组MFI为3369±480，阿霉素组为1859±185，Herceptin组为2259±225，阿霉素后续应用Herceptin组为1923±213，Herceptin后续应用阿霉素组为2459±251，其中阿霉素组(t=5.084，P<0.01)、Herceptin组(t=3.624，P<0.05)、阿霉素后续应用Herceptin组(t=4.765，P<0.01)以及Herceptin后续应用阿霉素组(t=2.905，P<0.05)MFI值均显著低于对照组。阿霉素后续应用Herceptin组MFI值亦显著低于Herceptin后续应用阿霉素组(t=2.821，P<0.05)，但阿霉素组与阿霉素后续应用Herceptin组之间MFI值未见显著性差异(t=0.401，P>0.05)，阿霉素组与Herceptin组之间MFI值未见显著性差异(t=2.382，P>0.05)，Herceptin组与阿霉素后续应用Herceptin组之间MFI值未见显著性差异(t=1.875，P>0.05)，Herceptin组与Herceptin后续应用阿霉素组之间MFI值亦无显著性差异(t=1.031，P>0.05)。
2.3 细胞死亡率检测及比较
对照组、阿霉素组、Herceptin组、阿霉素后续应用Herceptin组、Herceptin后续应用阿霉素组细胞死亡率(%)分别为0.16±0.05、75.6±9.2、0.47±0.15、63.6±7.5和87.1±10.8。其中阿霉素组(t=14.234，P<0.001)、Herceptin组(t=3.444，P<0.05)、阿霉素后续应用Herceptin组(t=14.753，P<0.001)以及Herceptin后续应用阿霉素组(t=14.023，P<0.001)细胞死亡率均显著高于对照组，而且阿霉素后续应用Herceptin组细胞死亡率显著低于Herceptin后续应用阿霉素组(t=3.092，P<0.05)，Herceptin组细胞死亡率显著低于阿霉素组(t=14.175，P<0.001)，Herceptin组细胞死亡率显著低于阿霉素后续应用Herceptin组(t=14.681，P<0.001)，Herceptin组细胞死亡率显著低于Herceptin后续应用阿霉素组(t=13.973，P<0.001)。但阿霉素组细胞死亡率与Herceptin后续应用阿霉素组未见显著性差异(t=1.402，P>0.05)，阿霉素组与阿霉素后续应用Herceptin组之间细胞死亡率未见显著性差异(t=1.739，P>0.05)。
3 讨论
阿霉素是广泛应用于乳腺癌的化疗药物之一，它通过诱导DNA丝条断裂产生自由基，发挥其细胞毒性和抗肿瘤活性。Herceptin是抗HER-2/neu蛋白的一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，对HER-2/neu高表达的乳腺癌细胞有较强的选择性[6-10]。研究表明，在HER-2/neu高表达和野生型p53的乳腺癌治疗中，通过单抗使HER-2/neu表达下调，可阻止肿瘤细胞对化疗药耐药的信号通路而逆转其耐药性[11]。因此以HER-2/neu作为靶点并联合化疗的生物化疗成为晚期乳腺癌治疗的研究热点[12-14]。
本研究结果表明，乳腺癌细胞经不同因素处理后，镜下可见细胞碎片增多，形态不规则，胞内颗粒增多等。而单用Herceptin组细胞杀伤效应最低，提示乳腺癌细胞的杀伤主要由阿霉素引起，而Herceptin虽可通过抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)或补体依赖性细胞毒性作用(CDC)对肿瘤细胞产生杀伤作用，但其强度低于阿霉素[9]，且本实验没有ADCC和CDC效应也是主要原因。肿瘤细胞对化疗药物的敏感性是决定其凋亡能力的主要因素。阿霉素在乳腺癌化疗中经常使用，但由于其广泛的组织学毒性，使它在临床使用受到一定的限制，因此，怎样增加阿霉素的敏感性是一个急需解决的问题。有研究证实，在HER-2/neu低表达如MCF-7细胞、中度表达如MDA-MB453以及高度表达如SK-BR3的乳腺癌细胞中，Herceptin与化疗药物联合应用，在疗效上至少均可起到叠加作用[15]。本实验结果显示，先Herceptin后阿霉素，其对乳腺癌细胞的杀伤效应明显优于先阿霉素后Herceptin组以及其他各组，这表明乳腺癌中高表达的HER-2/neu被Herceptin特异阻滞后，其转录激活剂3下调和Bcl-2水平下降，导致对化疗敏感性增加，从而可以放大阿霉素所产生的杀伤效应[16，17]，其机制可能是Herceptin能下调 HER-2/neu表达强度，减少对p34 Cdc2 (一种增加肿瘤细胞对化疗药敏感的蛋白)活性的抑制；或Herceptin抑制由HER-2/neu调节的Cdc2(鹅去氧胆酸)- Tyr-15(酪氨酸)磷酸化作用，下调了p21Cip1(Cdc2的抑制剂)的表达水平；以及Herceptin能使HER-2/neu快速脱磷酸化、周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p27kip1的积累，从而导致细胞周期蛋白复合物的失活、集落形成受抑、细胞周期和凋亡调节分子改变等[18，19]。而先阿霉素后续应用Herceptin，由于肿瘤细胞首先受到阿霉素诱导DNA丝条断裂所发挥的细胞毒性和抗肿瘤活性，在应用Herceptin以后，Herceptin所具有的化疗增敏等作用难以通过细胞内上述各种机制实现，从而导致该组的杀伤效应低于先Herceptin后阿霉素组。
本研究结果也表明，实验组细胞与对照组细胞HER-2/neu的表达率虽无明显变化，但细胞表面MFI存在差异，说明Herceptin可以部分下调HER-2/neu的表达强度。亦有报道，抗肿瘤药不能使乳腺癌细胞表面过表达的HER-2/neu下调，但受体经上述处理因素后，可能随着细胞内吞作用后再循环使细胞膜表面HER-2/neu的数量减少，结合FITC试剂量随之减少，从而导致MFI值降低[20]。
参考文献：
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作者简介：谭科(1975-)，男，在读硕士研究生，E-mail:tk@nfhoc.com
通讯作者： 罗荣城，男，教授、主任医师，博士生导师
(南方医科大学南方医院肿瘤中心，广东 广州 510515), http://www.100md.com(谭 科，范义湘，缪景霞，吕成伟，严 晓，罗荣城)
摘要：目的 探讨Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞株的杀伤效应。 方法 应用Herceptin、阿霉素及二者联合序贯应用于对数生长期的乳腺癌BT-474细胞，光学显微镜下观察各组细胞用药前后细胞形态变化，流式细胞仪检测各组细胞HER-2/neu的表达率、HER-2/neu表达的平均荧光强度及各组细胞的死亡率。 结果 光学显微镜下各用药组细胞均有不同程度的变暗、细胞碎片增多、细胞外形部分不规则、细胞内颗粒增多；流式细胞仪检测表明各组间细胞HER-2/neu表达率无显著性差异，但各用药组细胞HER-2/neu表达的平均荧光强度明显低于对照组(P<0.05)；流式细胞仪检测表明各用药组细胞的的死亡率明显高于对照组，Herceptin后续应用阿霉素组细胞的的死亡率明显高于阿霉素后续应用Herceptin组(P<0.05)。 结论 应用Herceptin后再辅以阿霉素化疗，对乳腺癌细胞杀伤效应最强，为临床乳腺癌生物化疗的序贯应用模式提供了实验依据。
Killing effect of sequential Herceptin and adriamycin treatment on breast cancer cell line in vitro
TAN Ke, FAN Yi-xiang, MIAO Jing-xia, LÜ Cheng-wei, YAN Xiao, LUO Rong-cheng
Center of Oncology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China
Abstract: Objective To observe the killing effect of Herceptin and adriamycin sequentially applied on breast cancer cell line in vitro. Methods BT-474 human breast cancer cells in exponential phase of growth were treated with Herceptin alone, adriamycin alone and their sequential administration (Herceptin before adriamycin and vice versa), respectively. Under optical microscope, the morphological changes of the cells were observed before and after drug administration. The expression rate and mean fluorescence intensity (MFI) of HER-2/neu and cell death rate were detected by flow cytometry. Results Microscopically, the cells treated with different protocols all exhibited such changes as darkening and increase of cellular debris with irregular cell morphology. Flow cytometry revealed no significant difference in the expression rate of HER-2/neu in each group before and after treatment, but the MFI of HER-2/neu and death rate of the treated cells were significant different from those of the control group (P<0.05). The cell death rate of Herceptin-pretreated cells was significantly higher than that of adriamycin-pretreated ones (P<0.05). Conclusion Herceptin pretreatment enhances the killing effect of adriamycin on breast cancer cell line BT-474, which provides experimental evidence for designing clinical sequential biochemothrapy of breast cancer.
Key words: Herceptin; adriamycin; breast neoplasms/drug therapy; sequentially applied
乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，传统的方法如手术、放疗和化疗等均存在不同程度的不足[1-4]。20世纪80年代起生物治疗已逐渐成为继上述3种传统模式后的第4大治疗模式，在肿瘤的综合治疗中发挥着越来越重要的作用。已有许多临床试验证明，Herceptin单药治疗或与诺维本、泰索帝、泰素、健择、希罗达等化疗药物联用治疗转移性乳腺癌均有较好的疗效[5]。本研究从细胞水平探讨Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞的杀伤作用，旨在为临床乳腺癌生物化疗的序贯应用模式提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 试剂与仪器
RMPI1640培养液购自美国Gibco公司，胎牛血清(FCS)购自美国Hyclone公司，小牛血清购自兰州民海生物公司，0.25%胰蛋白酶购自上海化学试剂公司，Herceptin由上海罗氏公司购进(终浓度1.05 mg/ml)，阿霉素由深圳万乐公司购进(终浓度1 mg/ml)，Annexin V-FIFC试剂盒购自晶美生物公司。人乳腺癌细胞系BT-474由北京协和医科大学基础医学研究所细胞室购进。流式细胞仪(FACS)采用Becton Dickinson FACS Calibur型。
1.2 方法
1.2.1 杀伤实验 BT-474细胞培养于含10%FCS的RPMI1640液中。待乳腺癌细胞长至对数生长期，用24孔板培养BT-474细胞，1×105细胞/孔。37 ℃、5%CO2培养箱中培养过夜，镜下观察细胞呈贴壁生长。每3孔为1组，分阿霉素组、Herceptin组、先阿霉素后续应用Herceptin组、先Herceptin后续应用阿霉素及空白对照共5组。先阿霉素后续应用Herceptin组加阿霉素10 μl，先Herceptin后续应用阿霉素加Herceptin 167 μl；该两组作用4 h后，上述4组分别加入阿霉素10 μl、Herceptin 167 μl、Herceptin 168 μl、阿霉素12 μl，空白对照组加等体积培养液；继续作用4 h后，移去药液换培养液继续培养12 h。反应终止后消化、收集细胞，进行以下实验。
1.2.2 细胞形态观察 光学显微镜高倍和低倍下观察不同用药组及对照组细胞形态及内部结构的变化。
1.2.3 HER-2/neu表达的变化 各取上述实验组及对照组的部分细胞，移入Ependorf管后以0.01 mol/L、pH7.4的PBS洗涤2次；各管加入Anti-HER-2/neu APC 5 µl，吹打混匀，避光于室温反应30 min后，1000×g离心3 min，弃上清。PBS洗涤1次以去除游离Anti-HER-2/neu APC。FACS检测各组细胞HER-2/neu表达率及HER-2/neu表达的平均荧光强度(MFI)。
1.2.4 杀伤效应检测 各取上述实验组及对照组的部分细胞，移入Ependorf管后以0.01 mol/L、pH 7.4的PBS洗涤2次。各管加入Annexin V/FITC 5 µl及碘化丙锭10 µl，吹打、混匀后室温下避光反应15 min，1000×g离心3 min，弃上清。PBS洗涤细胞1次以去除游离的Annexin V/FITC及碘化丙锭。FACS检测各组细胞的死亡率。
1.3 统计学处理
统计软件为SPSS10.0，各组HER-2/neu表达率、MFI、细胞死亡率均用x±s表示，上述指标在实验组与对照组之间以及各实验组之间的比较采用t检验，
2 结果
2.1 细胞形态改变
低倍镜下：各用药组细胞均有不同程度的变暗、细胞碎片增多，而对照组则细胞透亮且细胞碎片少；高倍镜下：各用药组细胞外形部分不规则、细胞内颗粒增多，而对照组细胞圆而规则且胞内颗粒少。
2.2 HER-2/neu表达的变化
对照组HER-2/neu表达率为99.1%，阿霉素组、Herceptin组、阿霉素后续应用Herceptin组、Herceptin后续应用阿霉素组HER-2/neu表达率分别为98.8%、97.4%、97.7%和96.6%。对照组MFI为3369±480，阿霉素组为1859±185，Herceptin组为2259±225，阿霉素后续应用Herceptin组为1923±213，Herceptin后续应用阿霉素组为2459±251，其中阿霉素组(t=5.084，P<0.01)、Herceptin组(t=3.624，P<0.05)、阿霉素后续应用Herceptin组(t=4.765，P<0.01)以及Herceptin后续应用阿霉素组(t=2.905，P<0.05)MFI值均显著低于对照组。阿霉素后续应用Herceptin组MFI值亦显著低于Herceptin后续应用阿霉素组(t=2.821，P<0.05)，但阿霉素组与阿霉素后续应用Herceptin组之间MFI值未见显著性差异(t=0.401，P>0.05)，阿霉素组与Herceptin组之间MFI值未见显著性差异(t=2.382，P>0.05)，Herceptin组与阿霉素后续应用Herceptin组之间MFI值未见显著性差异(t=1.875，P>0.05)，Herceptin组与Herceptin后续应用阿霉素组之间MFI值亦无显著性差异(t=1.031，P>0.05)。
2.3 细胞死亡率检测及比较
对照组、阿霉素组、Herceptin组、阿霉素后续应用Herceptin组、Herceptin后续应用阿霉素组细胞死亡率(%)分别为0.16±0.05、75.6±9.2、0.47±0.15、63.6±7.5和87.1±10.8。其中阿霉素组(t=14.234，P<0.001)、Herceptin组(t=3.444，P<0.05)、阿霉素后续应用Herceptin组(t=14.753，P<0.001)以及Herceptin后续应用阿霉素组(t=14.023，P<0.001)细胞死亡率均显著高于对照组，而且阿霉素后续应用Herceptin组细胞死亡率显著低于Herceptin后续应用阿霉素组(t=3.092，P<0.05)，Herceptin组细胞死亡率显著低于阿霉素组(t=14.175，P<0.001)，Herceptin组细胞死亡率显著低于阿霉素后续应用Herceptin组(t=14.681，P<0.001)，Herceptin组细胞死亡率显著低于Herceptin后续应用阿霉素组(t=13.973，P<0.001)。但阿霉素组细胞死亡率与Herceptin后续应用阿霉素组未见显著性差异(t=1.402，P>0.05)，阿霉素组与阿霉素后续应用Herceptin组之间细胞死亡率未见显著性差异(t=1.739，P>0.05)。
3 讨论
阿霉素是广泛应用于乳腺癌的化疗药物之一，它通过诱导DNA丝条断裂产生自由基，发挥其细胞毒性和抗肿瘤活性。Herceptin是抗HER-2/neu蛋白的一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，对HER-2/neu高表达的乳腺癌细胞有较强的选择性[6-10]。研究表明，在HER-2/neu高表达和野生型p53的乳腺癌治疗中，通过单抗使HER-2/neu表达下调，可阻止肿瘤细胞对化疗药耐药的信号通路而逆转其耐药性[11]。因此以HER-2/neu作为靶点并联合化疗的生物化疗成为晚期乳腺癌治疗的研究热点[12-14]。
本研究结果表明，乳腺癌细胞经不同因素处理后，镜下可见细胞碎片增多，形态不规则，胞内颗粒增多等。而单用Herceptin组细胞杀伤效应最低，提示乳腺癌细胞的杀伤主要由阿霉素引起，而Herceptin虽可通过抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)或补体依赖性细胞毒性作用(CDC)对肿瘤细胞产生杀伤作用，但其强度低于阿霉素[9]，且本实验没有ADCC和CDC效应也是主要原因。肿瘤细胞对化疗药物的敏感性是决定其凋亡能力的主要因素。阿霉素在乳腺癌化疗中经常使用，但由于其广泛的组织学毒性，使它在临床使用受到一定的限制，因此，怎样增加阿霉素的敏感性是一个急需解决的问题。有研究证实，在HER-2/neu低表达如MCF-7细胞、中度表达如MDA-MB453以及高度表达如SK-BR3的乳腺癌细胞中，Herceptin与化疗药物联合应用，在疗效上至少均可起到叠加作用[15]。本实验结果显示，先Herceptin后阿霉素，其对乳腺癌细胞的杀伤效应明显优于先阿霉素后Herceptin组以及其他各组，这表明乳腺癌中高表达的HER-2/neu被Herceptin特异阻滞后，其转录激活剂3下调和Bcl-2水平下降，导致对化疗敏感性增加，从而可以放大阿霉素所产生的杀伤效应[16，17]，其机制可能是Herceptin能下调 HER-2/neu表达强度，减少对p34 Cdc2 (一种增加肿瘤细胞对化疗药敏感的蛋白)活性的抑制；或Herceptin抑制由HER-2/neu调节的Cdc2(鹅去氧胆酸)- Tyr-15(酪氨酸)磷酸化作用，下调了p21Cip1(Cdc2的抑制剂)的表达水平；以及Herceptin能使HER-2/neu快速脱磷酸化、周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p27kip1的积累，从而导致细胞周期蛋白复合物的失活、集落形成受抑、细胞周期和凋亡调节分子改变等[18，19]。而先阿霉素后续应用Herceptin，由于肿瘤细胞首先受到阿霉素诱导DNA丝条断裂所发挥的细胞毒性和抗肿瘤活性，在应用Herceptin以后，Herceptin所具有的化疗增敏等作用难以通过细胞内上述各种机制实现，从而导致该组的杀伤效应低于先Herceptin后阿霉素组。
本研究结果也表明，实验组细胞与对照组细胞HER-2/neu的表达率虽无明显变化，但细胞表面MFI存在差异，说明Herceptin可以部分下调HER-2/neu的表达强度。亦有报道，抗肿瘤药不能使乳腺癌细胞表面过表达的HER-2/neu下调，但受体经上述处理因素后，可能随着细胞内吞作用后再循环使细胞膜表面HER-2/neu的数量减少，结合FITC试剂量随之减少，从而导致MFI值降低[20]。
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作者简介：谭科(1975-)，男，在读硕士研究生，E-mail:tk@nfhoc.com
通讯作者： 罗荣城，男，教授、主任医师，博士生导师
(南方医科大学南方医院肿瘤中心，广东 广州 510515), http://www.100md.com(谭 科，范义湘，缪景霞，吕成伟，严 晓，罗荣城)