HPLC法测定盐酸伪麻黄碱缓释片的相关物质
摘要:报道盐酸伪麻黄碱缓释片的相关物质HPLC测定方法。使用色谱柱DiamonsilTMC18 (250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相0.5%三乙胺(用磷酸调pH值至3.0)甲醇(9∶1)，检测波长为257 nm，对盐酸伪麻黄碱缓释片的相关物质进行测定，并确定其限量。本方法能有效检查样品的相关物质。本法快捷、简便，适用于盐酸伪麻黄碱缓释片的质量控制。
关键词:盐酸伪麻黄碱；缓释片；高效液相色谱法；相关物质
Stabilityindicating HPLC assay for pseudoephedrine hydrochloride sustainedrelease tablets
LU Zhufen, XIE Qingchun, SHEN Lou
(Institute of Materia Medica, Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou 510240, China)
Abstract: The stability of the stressed samples of pseudoephedrine hydrochloride sustainedrelease tablets was evaluated after acid, alkali, hydrogen peroxide, heat and light treatment. Reversedphase highperformance liquid chromatography for the simultaneous determination of impurities associated with the tablets was developed and validated. The examined samples were analyzed on a C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) and a mobile phase containing 0.5% triethylamine(adjusted the pH to 3.0 with phosphoric acid)methanol(9∶1), a flow rate of 1.2 mL/min and UV detection wavelength of 257 nm. The degradants generated during the test were well detected, suggesting that HPLC can be used for the quality control of pseudoephedrine hydrochloride sustainedrelease tablets.
Key words:pseudoephedrine hydrochloride; sustainedrelease tablets; HPLC；relative substances
盐酸伪麻黄碱(Pseudoephedrine hydrochloride,PSE)是麻黄碱(ephedrine hydrochloride，EP)的差向异构体，临床所用的为盐酸右旋伪麻黄碱，它是一种口服拟交感神经药，主要作用于α肾上腺素能受体[1]。PSE于1973年载入英国药典，1980年后载入美国药典，在英、美、德等国被列为非处方药物。《中国药典》2000年版也有收载PSE原料药，但并没有对其相关物质进行检查。
本文采用自身对照法测定其相关物质，方法简单、可行，实验证明本色谱系统能较好地分离主成分及其分解物，可用于考察PSE缓释片生产、贮藏过程的杂质变化情况。
1 试药与仪器
盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号：0714-9903)；盐酸伪麻黄碱对照品(国家麻醉品实验室,批号：1237200002)；盐酸伪麻黄碱缓释片(批号：031201、031202、031203,均为本院药物研究所研制)；甲醇、三乙胺均为色谱纯。高效液相色谱仪(P680 DIONEX公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：ψ[0.5%三乙胺(用磷酸调pH值至3.0)∶甲醇]=9∶1；流速：12 mL/min；检测波长257 nm。精密称取盐酸伪麻黄碱对照品30 mg，盐酸麻黄碱对照品10 mg置同一100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，盐酸伪麻黄碱峰和盐酸麻黄碱峰之间的分离度应不少于1.5,见图1b。
2.2 测定法
取本品细粉适量(约相当于盐酸伪麻黄碱75 mg)，置25 mL量瓶中，加水适量，超声15 min，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液(每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg)。另精密量取供试品溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的25倍，供试品溶液有关物质峰面积应不超过对照品溶液主峰峰面积，限度定为1.0%。
2.3 方法验证
2.3.1 破坏性试验
2.3.1.1 酸破坏
取本品细粉适量，加稀盐酸溶解，100 ℃水浴加热0.5 h。放冷，用10%NaOH溶液调pH=7，取溶液适量，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与酸破坏分解物分离，见图1c-2。
2.3.1.2 碱破坏
取本品细粉适量，加10%NaOH溶液溶解，100 ℃水浴加热0.5 h，放冷，用稀盐酸调至pH=7，取溶液适量，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与碱破坏分解物分离，见图1c-3。
2.3.1.3 高温破坏
取本品细粉适量，加水溶解，100 ℃水浴加热0.5 h，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与高温破坏分解物分离,见图1c-4。
2.3.1.4 光照破坏
取本品细粉适量，加水溶解置石英吸收池中，于紫外灯(366 nm)下照射1 h，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与光照破坏分解物分离,见图1c-5。
2.3.1.5 氧化破坏
取本品细粉适量，加10% H2O2溶液溶解，100 ℃水浴加热0.5 h放冷，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与氧化破坏分解物分离,见图1c-6。
2.3.2 空白试验
按片剂处方取本品的空白辅料，按“2.2”项下测定法配制供试液，进样，记录色谱图,结果表明本品辅料在盐酸伪麻黄碱主峰处无色谱峰，对样品相关物质检查无影响,见图1a、图1c-1。
2.3.3 最低检测限测定
以信噪比的3倍为最低检出限，测得盐酸伪麻黄碱的最低检测限为7.4 ng。
2.3.4 线性试验
HPLC法测定盐酸伪麻黄碱缓释片的相关物质称取盐酸伪麻黄碱对照品适量，用水制成每1 mL含1 mg的溶液，作为贮备液，分别量取0.5、1、2、3、4 mL，加水稀释至100 mL，摇匀，即得，精量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，计算回归方程：A=0.013ρ+0.0121,r=0.9999 (n=5)，线性范围为：5～40 μg/mL。
2.3.5 重复性试验
同一样品连续进样5次，结果各峰面积之和与自身对照的主峰面积之比相同，RSD=0.25%(n=5)。同一批样品连续6次的有关物质检查，结果各峰面积之和与自身对照的主峰面积之比相同，RSD=0.42%(n=6)。
2.3.6 稳定性与耐用性试验
取供试品溶液分别在0、2、4、8、24 h进样，测得杂峰总面积与对照液主峰面积比较，其比例基本不变，RSD=0.72%。用不同型号的C18柱对同一样品进行测定，保留时间有改变，但各杂峰总面积与对照液主峰面积比较，其比例基本不变。
2.4 样品测定
取自制样品3批，按上述方法测定，伪麻黄碱缓释片的相关物质含量均≤0.1%,结果见表1。表1 盐酸伪麻黄碱缓释片相关物质含量(略)
3 讨 论
3.1 文献[2]采用的色谱系统：色谱柱为苯基柱，流动相为甲醇-醋酸铵系统。笔者通过方法学研究证明，采用本文色谱条件同样可以测定样品的相关物质，与文献方法测定的结果一致，而且所使用的是普通C18柱，成本低廉。
3.2 采用本法测定了盐酸伪麻黄碱缓释片及其经过影响因素试验和加速试验的样品，结果表明样品相对稳定。
参考文献：
[1]史宇翔,苏常娥.中美两国OTC药物中伪麻黄碱的应用[J].中国药师，2001,4(3):225.
[2]British Pharmacopoeia[S]. 2002.
(广东药学院 药物研究所，广东 广州 510240), http://www.100md.com(吕竹芬，谢清春，申楼)
关键词:盐酸伪麻黄碱；缓释片；高效液相色谱法；相关物质
Stabilityindicating HPLC assay for pseudoephedrine hydrochloride sustainedrelease tablets
LU Zhufen, XIE Qingchun, SHEN Lou
(Institute of Materia Medica, Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou 510240, China)
Abstract: The stability of the stressed samples of pseudoephedrine hydrochloride sustainedrelease tablets was evaluated after acid, alkali, hydrogen peroxide, heat and light treatment. Reversedphase highperformance liquid chromatography for the simultaneous determination of impurities associated with the tablets was developed and validated. The examined samples were analyzed on a C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) and a mobile phase containing 0.5% triethylamine(adjusted the pH to 3.0 with phosphoric acid)methanol(9∶1), a flow rate of 1.2 mL/min and UV detection wavelength of 257 nm. The degradants generated during the test were well detected, suggesting that HPLC can be used for the quality control of pseudoephedrine hydrochloride sustainedrelease tablets.
Key words:pseudoephedrine hydrochloride; sustainedrelease tablets; HPLC；relative substances
盐酸伪麻黄碱(Pseudoephedrine hydrochloride,PSE)是麻黄碱(ephedrine hydrochloride，EP)的差向异构体，临床所用的为盐酸右旋伪麻黄碱，它是一种口服拟交感神经药，主要作用于α肾上腺素能受体[1]。PSE于1973年载入英国药典，1980年后载入美国药典，在英、美、德等国被列为非处方药物。《中国药典》2000年版也有收载PSE原料药，但并没有对其相关物质进行检查。
本文采用自身对照法测定其相关物质，方法简单、可行，实验证明本色谱系统能较好地分离主成分及其分解物，可用于考察PSE缓释片生产、贮藏过程的杂质变化情况。
1 试药与仪器
盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号：0714-9903)；盐酸伪麻黄碱对照品(国家麻醉品实验室,批号：1237200002)；盐酸伪麻黄碱缓释片(批号：031201、031202、031203,均为本院药物研究所研制)；甲醇、三乙胺均为色谱纯。高效液相色谱仪(P680 DIONEX公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：ψ[0.5%三乙胺(用磷酸调pH值至3.0)∶甲醇]=9∶1；流速：12 mL/min；检测波长257 nm。精密称取盐酸伪麻黄碱对照品30 mg，盐酸麻黄碱对照品10 mg置同一100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，盐酸伪麻黄碱峰和盐酸麻黄碱峰之间的分离度应不少于1.5,见图1b。
2.2 测定法
取本品细粉适量(约相当于盐酸伪麻黄碱75 mg)，置25 mL量瓶中，加水适量，超声15 min，放冷，加水至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液(每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg)。另精密量取供试品溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的25倍，供试品溶液有关物质峰面积应不超过对照品溶液主峰峰面积，限度定为1.0%。
2.3 方法验证
2.3.1 破坏性试验
2.3.1.1 酸破坏
取本品细粉适量，加稀盐酸溶解，100 ℃水浴加热0.5 h。放冷，用10%NaOH溶液调pH=7，取溶液适量，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与酸破坏分解物分离，见图1c-2。
2.3.1.2 碱破坏
取本品细粉适量，加10%NaOH溶液溶解，100 ℃水浴加热0.5 h，放冷，用稀盐酸调至pH=7，取溶液适量，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与碱破坏分解物分离，见图1c-3。
2.3.1.3 高温破坏
取本品细粉适量，加水溶解，100 ℃水浴加热0.5 h，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与高温破坏分解物分离,见图1c-4。
2.3.1.4 光照破坏
取本品细粉适量，加水溶解置石英吸收池中，于紫外灯(366 nm)下照射1 h，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与光照破坏分解物分离,见图1c-5。
2.3.1.5 氧化破坏
取本品细粉适量，加10% H2O2溶液溶解，100 ℃水浴加热0.5 h放冷，加水稀释成每1 mL中含盐酸伪麻黄碱3 mg的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明，本色谱系统能将盐酸伪麻黄碱与氧化破坏分解物分离,见图1c-6。
2.3.2 空白试验
按片剂处方取本品的空白辅料，按“2.2”项下测定法配制供试液，进样，记录色谱图,结果表明本品辅料在盐酸伪麻黄碱主峰处无色谱峰，对样品相关物质检查无影响,见图1a、图1c-1。
2.3.3 最低检测限测定
以信噪比的3倍为最低检出限，测得盐酸伪麻黄碱的最低检测限为7.4 ng。
2.3.4 线性试验
HPLC法测定盐酸伪麻黄碱缓释片的相关物质称取盐酸伪麻黄碱对照品适量，用水制成每1 mL含1 mg的溶液，作为贮备液，分别量取0.5、1、2、3、4 mL，加水稀释至100 mL，摇匀，即得，精量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，计算回归方程：A=0.013ρ+0.0121,r=0.9999 (n=5)，线性范围为：5～40 μg/mL。
2.3.5 重复性试验
同一样品连续进样5次，结果各峰面积之和与自身对照的主峰面积之比相同，RSD=0.25%(n=5)。同一批样品连续6次的有关物质检查，结果各峰面积之和与自身对照的主峰面积之比相同，RSD=0.42%(n=6)。
2.3.6 稳定性与耐用性试验
取供试品溶液分别在0、2、4、8、24 h进样，测得杂峰总面积与对照液主峰面积比较，其比例基本不变，RSD=0.72%。用不同型号的C18柱对同一样品进行测定，保留时间有改变，但各杂峰总面积与对照液主峰面积比较，其比例基本不变。
2.4 样品测定
取自制样品3批，按上述方法测定，伪麻黄碱缓释片的相关物质含量均≤0.1%,结果见表1。表1 盐酸伪麻黄碱缓释片相关物质含量(略)
3 讨 论
3.1 文献[2]采用的色谱系统：色谱柱为苯基柱，流动相为甲醇-醋酸铵系统。笔者通过方法学研究证明，采用本文色谱条件同样可以测定样品的相关物质，与文献方法测定的结果一致，而且所使用的是普通C18柱，成本低廉。
3.2 采用本法测定了盐酸伪麻黄碱缓释片及其经过影响因素试验和加速试验的样品，结果表明样品相对稳定。
参考文献：
[1]史宇翔,苏常娥.中美两国OTC药物中伪麻黄碱的应用[J].中国药师，2001,4(3):225.
[2]British Pharmacopoeia[S]. 2002.
(广东药学院 药物研究所，广东 广州 510240), http://www.100md.com(吕竹芬，谢清春，申楼)