气相色谱法测定法莫替丁中有机溶剂残留量
摘要:目的 建立法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量的测定方法。方法 采用毛细管气相色谱法，色谱柱为HP-Wax；柱温：50 ℃保持3 min，以20 ℃/min升温至120 ℃保持4 min；载气为氮气；检测器为FID；外标法计算含量。结果 在该色谱条件下，测得各溶剂线性均良好(r=0.9996～0.9997)；平均回收率分别为97.86%，98.16%和98.04%，RSD分别为1.34%，1.21%和0.94%；甲醇、丙酮和乙醇的最低检测限分别为0.004%、0.002%和0.004%；3批样品中上述有机溶剂残留量均符合要求。结论 该毛细管气相色谱法灵敏、准确、可靠，适用于本品中有机溶剂残留量测定。
关键词:法莫替丁；毛细管气相色谱法；有机溶剂残留量
Analysis of residual organic solvents in famotidine samples with gas chromatography
ZHANG Shu, LV Zhufen, LIN Huaqing, DENG Hong
(Institute of Meteria Medica,Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou 510240, China)
Abstract:Objective To establish the analysis methods for the residual methanol, acetone and ethanol in famotidine samples with capillary gas chromatography. Methods Commercially available and self-prepared famotidine samples were analyzed on an HP5890 gas chromatograph using flame ionization detector with a capillary column (30 m×0.32 mm×0.50μm). Results good linear correlations were obtained during the detection(r=0.9996-0.9997). The average recoveries were 97.86%(RSD 1.34%, n=3)，98.16%(RSD 1.21%, n=3) and 98.04%(RSD 0.94%, n=3 ) for methanol, acetone and ethanol, respectively. The limits of quantification for methanol, acetone an ethanol were 0.004%, 0.002% and 0.004%, respectively. The contents of the residual solvents in three batches of products were acceptable. Conclusion the method is reliable and can be applicable in the detection of residual methanol, acetone and ethanol in famotidine samples.
Key words:famotidine；gas chromatography；residual organic solvents
药物中的残留溶剂是指在原料药或赋型剂的生产中，以及在制剂制备过程中产生或使用的有机挥发性化合物[1]。由于残留溶剂不仅没有疗效，还可能增加药物的毒副作用，而且影响药物的稳定性，故所有的有机溶剂应尽可能除去。为了保护患者免受药物中残留有机溶剂的伤害，需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行测定[2]。法莫替丁为组胺H2受体阻滞药，对胃酸分泌具有明显的抑制作用，适用于消化性溃疡(胃、十二指肠溃疡)、急性胃黏膜病变、反流性食管炎以及胃泌素瘤。由于合成本品过程中使用甲醇等有机溶剂，故有可能会残留在产品中，本文参考中国药典2000年版二部法莫替丁项下方法，建立了气相色谱法，以毛细管柱代替填充柱，同时测定法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量，结果表明本法分离度高、灵敏、准确且简便。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
美国惠普公司HP5890型气相色谱仪，甲醇、丙酮、乙醇及二甲基甲酰胺(DMF)均为分析纯试剂。法莫替丁自制样品 (批号200302001、200302002、200302003)，法莫替丁市售品(郑州瑞泰制药有限公司，批号20030203)。
1.2 色谱条件
色谱柱：HP-Wax(键合聚乙二醇，30 m×0.32 mm×0.50 μm)；柱温：50 ℃保持3 min，以20 ℃/min升温至120 ℃保持4 min；检测室温度：200 ℃；进样温度：200 ℃；载气：氮气；柱头压：68.95 kPa；FDI检测器；顶空进样0.5 mL 。
1.3 溶液配制
对照溶液：称取299.8 mg甲醇、500.2 mg丙酮、499.6 mg乙醇于100 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，为对照贮备溶液，每1 mL含2.998 mg甲醇、5.002 mg丙酮、4.996 mg乙醇。
依次取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL对照贮备溶液分别至10 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，制得系列浓度的对照溶液，每1 mL含甲醇60.0、120、180、240、300 μg；丙酮100、200、300、400、500 μg；乙醇100、200、300、400、500 μg。
供试品溶液：称取2 g供试品于20 mL容量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度。
测定：精密量取对照溶液和供试品溶液各10 mL，分别置于25 mL顶空瓶中，在80 ℃的恒温箱中加热30 min，取顶空气0.5 mL进样。
2 结果与讨论
2.1 专属性试验
取甲醇、丙酮和乙醇依次进样，记录保留时间作为定性指标。色谱图中各成分峰的保留时间分别为2577 min、1.913 mim和3.048 min，各成分峰之间峰分离度良好。如图1所示。
2.2 线性范围
取系列浓度的对照溶液(每1 mL含甲醇60.0、120、180、240、300 μg；丙酮100、200、300、400、500 μg ；乙醇100、200、300、400、500 μg)依次进样，记录峰面积。将峰面积对浓度进行回归，得回归方程(表1)。 表1 甲醇、丙酮和乙醇的标准曲线(略)
精密称定法莫替丁样品(批号200302001)约05 g,精密加入中浓度对照品溶液10 mL，混匀，进样0.5 mL，计算甲醇、丙酮和乙醇的平均回收率(n=3)分别为97.86%，98.16%和98.04%，RSD分别为134%，1.21%和0.94%，表明方法准确可靠。
2.4 精密度试验
取中浓度的对照溶液(每1 mL含甲醇180 μg、丙酮300 μg和乙醇300 μg)连续进样6次，记录色谱图，甲醇、丙酮和乙醇峰面积的RSD分别为1.91%、134%和0.93%(n=6)，表明精密度良好。
2.5 最低检测限
以信噪比3∶1(S/N=3)计算，甲醇、丙酮和乙醇的最低检测限分别为0.004%、0.002%和0.004%，根据人用药品注册技术要求协调会(简称ICH)对药品中限制使用溶剂残留限量规定为甲醇≤0.3%，丙酮和乙醇≤0.5% [3]，表明本方法的检测灵敏度符合要求。
2.6 样品测定结果
取自制样品3批(批号200302001、200302002、200302003)及上市品1批，依法测定(见图2)，用标准曲线回归方程计算甲醇、丙酮和乙醇的残留量，见表2。结果表明，3批自制样品及1批上市品中甲醇、丙酮和乙醇3种有机溶剂的残留量均符合ICH规定；自制样品所采用的合成工艺和技术路线与上市品有所不同，因此3种有机溶剂的残留量也不同，自制样品采用乙醇作为精制溶剂，故只检出乙醇；上市品则未检出乙醇，而甲醇和丙酮有一定的残留。表2 样品的检测结果(略)
3 讨论与小结
在中国药典2000年版二部，法莫替丁中甲醇的GC检查方法采用填充柱，本法采用毛细管柱法，由于毛细管柱法的分离度好[4~6]，且顶空进样与溶液法直接进样相比具有灵敏度高、干扰小的优点，因此用于同时测定药物中的甲醇、丙酮、乙醇残留量，效果令人满意。
DMF由于溶解性好，对药物和甲醇、丙酮、乙醇均有较好的溶解能力，因此，本法选用DMF作溶剂。
所建立的甲醇、丙酮和乙醇残留量的GC检查方法，经方法学检验是准确可靠的，可用于法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量的检查。
参考文献：
[1]中国药典(2000年版二部)[S].2000，附录64.
[2]王卫.药品中有机溶剂残留量及其测定[J]. 天津药学,2001, 13(6):13.
[3]周海钧.ICH药品注册的国际技术要求(质量部分)[M].北京：人民卫生出版社，2000.87.
[4]魏君，崔颖.气相色谱法同时测定氢溴酸西酞普兰原料中7种有机溶剂残留量[J].药物分析杂志，2003，23(5)：379.
[5]李慧义，魏京京,朱维华. 艾拉莫德原料药中残留溶剂检测方法的研究[J].药物分析杂志，2004，24(4)：422.
[6]陆丹. 甲磺酸瑞波西汀中有机溶剂残留量的毛细管气相色谱测定[J]. 中国医药工业杂志，2004，35(8)：492.
(广东药学院 药物研究所，广东 广州 510240), 百拇医药(张蜀，吕竹芬，林华庆，邓红)
关键词:法莫替丁；毛细管气相色谱法；有机溶剂残留量
Analysis of residual organic solvents in famotidine samples with gas chromatography
ZHANG Shu, LV Zhufen, LIN Huaqing, DENG Hong
(Institute of Meteria Medica,Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou 510240, China)
Abstract:Objective To establish the analysis methods for the residual methanol, acetone and ethanol in famotidine samples with capillary gas chromatography. Methods Commercially available and self-prepared famotidine samples were analyzed on an HP5890 gas chromatograph using flame ionization detector with a capillary column (30 m×0.32 mm×0.50μm). Results good linear correlations were obtained during the detection(r=0.9996-0.9997). The average recoveries were 97.86%(RSD 1.34%, n=3)，98.16%(RSD 1.21%, n=3) and 98.04%(RSD 0.94%, n=3 ) for methanol, acetone and ethanol, respectively. The limits of quantification for methanol, acetone an ethanol were 0.004%, 0.002% and 0.004%, respectively. The contents of the residual solvents in three batches of products were acceptable. Conclusion the method is reliable and can be applicable in the detection of residual methanol, acetone and ethanol in famotidine samples.
Key words:famotidine；gas chromatography；residual organic solvents
药物中的残留溶剂是指在原料药或赋型剂的生产中，以及在制剂制备过程中产生或使用的有机挥发性化合物[1]。由于残留溶剂不仅没有疗效，还可能增加药物的毒副作用，而且影响药物的稳定性，故所有的有机溶剂应尽可能除去。为了保护患者免受药物中残留有机溶剂的伤害，需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行测定[2]。法莫替丁为组胺H2受体阻滞药，对胃酸分泌具有明显的抑制作用，适用于消化性溃疡(胃、十二指肠溃疡)、急性胃黏膜病变、反流性食管炎以及胃泌素瘤。由于合成本品过程中使用甲醇等有机溶剂，故有可能会残留在产品中，本文参考中国药典2000年版二部法莫替丁项下方法，建立了气相色谱法，以毛细管柱代替填充柱，同时测定法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量，结果表明本法分离度高、灵敏、准确且简便。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
美国惠普公司HP5890型气相色谱仪，甲醇、丙酮、乙醇及二甲基甲酰胺(DMF)均为分析纯试剂。法莫替丁自制样品 (批号200302001、200302002、200302003)，法莫替丁市售品(郑州瑞泰制药有限公司，批号20030203)。
1.2 色谱条件
色谱柱：HP-Wax(键合聚乙二醇，30 m×0.32 mm×0.50 μm)；柱温：50 ℃保持3 min，以20 ℃/min升温至120 ℃保持4 min；检测室温度：200 ℃；进样温度：200 ℃；载气：氮气；柱头压：68.95 kPa；FDI检测器；顶空进样0.5 mL 。
1.3 溶液配制
对照溶液：称取299.8 mg甲醇、500.2 mg丙酮、499.6 mg乙醇于100 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，为对照贮备溶液，每1 mL含2.998 mg甲醇、5.002 mg丙酮、4.996 mg乙醇。
依次取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL对照贮备溶液分别至10 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，制得系列浓度的对照溶液，每1 mL含甲醇60.0、120、180、240、300 μg；丙酮100、200、300、400、500 μg；乙醇100、200、300、400、500 μg。
供试品溶液：称取2 g供试品于20 mL容量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度。
测定：精密量取对照溶液和供试品溶液各10 mL，分别置于25 mL顶空瓶中，在80 ℃的恒温箱中加热30 min，取顶空气0.5 mL进样。
2 结果与讨论
2.1 专属性试验
取甲醇、丙酮和乙醇依次进样，记录保留时间作为定性指标。色谱图中各成分峰的保留时间分别为2577 min、1.913 mim和3.048 min，各成分峰之间峰分离度良好。如图1所示。
2.2 线性范围
取系列浓度的对照溶液(每1 mL含甲醇60.0、120、180、240、300 μg；丙酮100、200、300、400、500 μg ；乙醇100、200、300、400、500 μg)依次进样，记录峰面积。将峰面积对浓度进行回归，得回归方程(表1)。 表1 甲醇、丙酮和乙醇的标准曲线(略)
精密称定法莫替丁样品(批号200302001)约05 g,精密加入中浓度对照品溶液10 mL，混匀，进样0.5 mL，计算甲醇、丙酮和乙醇的平均回收率(n=3)分别为97.86%，98.16%和98.04%，RSD分别为134%，1.21%和0.94%，表明方法准确可靠。
2.4 精密度试验
取中浓度的对照溶液(每1 mL含甲醇180 μg、丙酮300 μg和乙醇300 μg)连续进样6次，记录色谱图，甲醇、丙酮和乙醇峰面积的RSD分别为1.91%、134%和0.93%(n=6)，表明精密度良好。
2.5 最低检测限
以信噪比3∶1(S/N=3)计算，甲醇、丙酮和乙醇的最低检测限分别为0.004%、0.002%和0.004%，根据人用药品注册技术要求协调会(简称ICH)对药品中限制使用溶剂残留限量规定为甲醇≤0.3%，丙酮和乙醇≤0.5% [3]，表明本方法的检测灵敏度符合要求。
2.6 样品测定结果
取自制样品3批(批号200302001、200302002、200302003)及上市品1批，依法测定(见图2)，用标准曲线回归方程计算甲醇、丙酮和乙醇的残留量，见表2。结果表明，3批自制样品及1批上市品中甲醇、丙酮和乙醇3种有机溶剂的残留量均符合ICH规定；自制样品所采用的合成工艺和技术路线与上市品有所不同，因此3种有机溶剂的残留量也不同，自制样品采用乙醇作为精制溶剂，故只检出乙醇；上市品则未检出乙醇，而甲醇和丙酮有一定的残留。表2 样品的检测结果(略)
3 讨论与小结
在中国药典2000年版二部，法莫替丁中甲醇的GC检查方法采用填充柱，本法采用毛细管柱法，由于毛细管柱法的分离度好[4~6]，且顶空进样与溶液法直接进样相比具有灵敏度高、干扰小的优点，因此用于同时测定药物中的甲醇、丙酮、乙醇残留量，效果令人满意。
DMF由于溶解性好，对药物和甲醇、丙酮、乙醇均有较好的溶解能力，因此，本法选用DMF作溶剂。
所建立的甲醇、丙酮和乙醇残留量的GC检查方法，经方法学检验是准确可靠的，可用于法莫替丁中甲醇、丙酮和乙醇残留量的检查。
参考文献：
[1]中国药典(2000年版二部)[S].2000，附录64.
[2]王卫.药品中有机溶剂残留量及其测定[J]. 天津药学,2001, 13(6):13.
[3]周海钧.ICH药品注册的国际技术要求(质量部分)[M].北京：人民卫生出版社，2000.87.
[4]魏君，崔颖.气相色谱法同时测定氢溴酸西酞普兰原料中7种有机溶剂残留量[J].药物分析杂志，2003，23(5)：379.
[5]李慧义，魏京京,朱维华. 艾拉莫德原料药中残留溶剂检测方法的研究[J].药物分析杂志，2004，24(4)：422.
[6]陆丹. 甲磺酸瑞波西汀中有机溶剂残留量的毛细管气相色谱测定[J]. 中国医药工业杂志，2004，35(8)：492.
(广东药学院 药物研究所，广东 广州 510240), 百拇医药(张蜀，吕竹芬，林华庆，邓红)