法测定活血止痛胶囊中阿魏酸的含量
摘 要 用高效液相色谱法测定活血止痛胶囊中阿魏酸的含量。以V(甲醇)∶V(1%冰乙酸)=40∶60为流动相，检测波长320 nm，平均回收率为99.2%，RSD为0.9%。该方法简便，重复性好，其它组分对测定无干拢，可用于质量控制。
关键词 高效液相色谱法；阿魏酸；活血止痛胶囊；药物分析
活血止痛胶囊由当归、三七、乳香、土鳖虫等中药组成，具有活血化瘀、消炎止痛之功效，用于跌打损伤、瘀血肿痛等症。阿魏酸是当归的有效成分之一，具有明显的扩张冠脉血管、增加冠脉流量、改善心肌缺血、抑制胶原和ADP血小板聚集作用。因此，测定当归中阿魏酸的含量可作为评价含当归中成药质量的客观指标之一[1，2]。本文应用高效液相色谱法对活血止痛胶囊中的阿魏酸进行了含量测定，方法简便实用，重复性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪，510型恒流泵，486型紫外检测器，DL-800色谱工作站；恒温水浴锅。
1.2 试药 阿魏酸(中国药品生物制品检定所)，活血止痛胶囊(南京中山制药厂)，甲醇(色谱纯和分析纯)，冰乙酸、乙醚、碳酸钠、盐酸(分析纯)，水为蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱，ODSC18柱(大连依利特公司);流动相，V(甲醇)∶V(1%冰乙酸)=40：60;流速，1 mL/min;检测波长，320 nm;灵敏度，0.5AUFS;进样量，10 μL;理论塔板数，3500。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取活血止痛胶囊内容物2.5 g，加甲醇80 mL，索氏回流提取4 h，甲醇提取液水浴蒸干，残渣加ρ=5%碳酸钠水溶液30 mL溶解，转入分液漏斗中，用乙醚洗涤2次，每次20 mL，弃去乙醚相，水相用盐酸调pH值至1～2后，再用乙醚提取3次，每次20 mL，合并乙醚相，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容于25 mL量瓶中，作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察 精密称取阿魏酸对照品10.14 mg，用甲醇溶解后，定容于100mL量瓶中，作为阿魏酸标准贮备液，分别精密量取阿魏酸标准贮备液1，2，3，4，5，7.5 mL至6个10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在“2.1”项色谱条件下进行分析，以标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行回归分析，回归方程为y=144092x+88923，r=0.9999，说明阿魏酸在10.14～101.4 μg/mL质量浓度范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.4 精密度试验 取ρ=40.56 μg/mL阿魏酸对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行分析，连续进样5次，测得峰面积RSD为0.9%。
2.5 稳定性试验 将ρ=101.4 μg/mL的阿魏酸对照品溶液，在1，2，3，4，5，6，7，8 h进样，测得阿魏酸峰面积日内RSD为0.6%。将该试液于冰箱内保存，分别在第1、2、3、5、7 d进样，测得阿魏酸峰面积日间RSD为1.3%。
2.6 回收率试验 精密称取已知含量的活血止痛胶囊内容物，准确加入一定量的阿魏酸对照品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行分析。结果见表1。
表1 回收率试验结果 略
2.7 重现性试验 精密称取批号为990802活血止痛胶囊内容物5份，按“2.2”项制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行分析，平均质量分数为217.34 μg/g，RSD为1.2%。
2.8 干扰性试验 按处方比例配成缺当归的活血止痛胶囊，然后按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下进行分析，色谱图见图1。结果表明，活血止痛胶囊中其它成分对当归中阿魏酸测定无干扰。
2.9 样品测定 精密称取活血止痛胶囊内容物，按“2.2”项制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行含量测定，结果见表2，色谱图见图2。
表2 样品测定结果(略)
图1 - 图2 略
3 讨论
阿魏酸对照品溶液及供试品溶液应避光保存，否则易发生分解而使含量降低。阿魏酸易溶于热水、醇、乙酸乙酯和乙醚，微溶于石油醚及苯，曾用乙酸乙酯、甲醇超声或索氏回流提取等方法制备供试液，均有杂质干扰阿魏酸测定。实验中采用碳酸钠水溶液先使阿魏酸成钠盐，然后用乙醚脱去脂溶性成分，用盐酸酸化使阿魏酸游离，再用乙醚将阿魏酸提取出来，该方法大大减少了杂质，排除了对阿魏酸含量测定的干扰。
参考文献
[1]戴忠，钱忠直，候钦云. HPLC法测定坤顺助孕丹胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药，1997，19(7)：9.
[2]贾晓斌，施亚芬，黄一平，等.当归和川芎中阿魏酸高效液相色谱测定方法的改进[J].中成药，1998，20(6)：37.
南京市药品检验所,江苏 南京 210015, http://www.100md.com(许江 张庆 俞小陶)
关键词 高效液相色谱法；阿魏酸；活血止痛胶囊；药物分析
活血止痛胶囊由当归、三七、乳香、土鳖虫等中药组成，具有活血化瘀、消炎止痛之功效，用于跌打损伤、瘀血肿痛等症。阿魏酸是当归的有效成分之一，具有明显的扩张冠脉血管、增加冠脉流量、改善心肌缺血、抑制胶原和ADP血小板聚集作用。因此，测定当归中阿魏酸的含量可作为评价含当归中成药质量的客观指标之一[1，2]。本文应用高效液相色谱法对活血止痛胶囊中的阿魏酸进行了含量测定，方法简便实用，重复性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪，510型恒流泵，486型紫外检测器，DL-800色谱工作站；恒温水浴锅。
1.2 试药 阿魏酸(中国药品生物制品检定所)，活血止痛胶囊(南京中山制药厂)，甲醇(色谱纯和分析纯)，冰乙酸、乙醚、碳酸钠、盐酸(分析纯)，水为蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱，ODSC18柱(大连依利特公司);流动相，V(甲醇)∶V(1%冰乙酸)=40：60;流速，1 mL/min;检测波长，320 nm;灵敏度，0.5AUFS;进样量，10 μL;理论塔板数，3500。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取活血止痛胶囊内容物2.5 g，加甲醇80 mL，索氏回流提取4 h，甲醇提取液水浴蒸干，残渣加ρ=5%碳酸钠水溶液30 mL溶解，转入分液漏斗中，用乙醚洗涤2次，每次20 mL，弃去乙醚相，水相用盐酸调pH值至1～2后，再用乙醚提取3次，每次20 mL，合并乙醚相，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容于25 mL量瓶中，作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察 精密称取阿魏酸对照品10.14 mg，用甲醇溶解后，定容于100mL量瓶中，作为阿魏酸标准贮备液，分别精密量取阿魏酸标准贮备液1，2，3，4，5，7.5 mL至6个10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在“2.1”项色谱条件下进行分析，以标准溶液质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行回归分析，回归方程为y=144092x+88923，r=0.9999，说明阿魏酸在10.14～101.4 μg/mL质量浓度范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.4 精密度试验 取ρ=40.56 μg/mL阿魏酸对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行分析，连续进样5次，测得峰面积RSD为0.9%。
2.5 稳定性试验 将ρ=101.4 μg/mL的阿魏酸对照品溶液，在1，2，3，4，5，6，7，8 h进样，测得阿魏酸峰面积日内RSD为0.6%。将该试液于冰箱内保存，分别在第1、2、3、5、7 d进样，测得阿魏酸峰面积日间RSD为1.3%。
2.6 回收率试验 精密称取已知含量的活血止痛胶囊内容物，准确加入一定量的阿魏酸对照品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行分析。结果见表1。
表1 回收率试验结果 略
2.7 重现性试验 精密称取批号为990802活血止痛胶囊内容物5份，按“2.2”项制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行分析，平均质量分数为217.34 μg/g，RSD为1.2%。
2.8 干扰性试验 按处方比例配成缺当归的活血止痛胶囊，然后按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下进行分析，色谱图见图1。结果表明，活血止痛胶囊中其它成分对当归中阿魏酸测定无干扰。
2.9 样品测定 精密称取活血止痛胶囊内容物，按“2.2”项制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行含量测定，结果见表2，色谱图见图2。
表2 样品测定结果(略)
图1 - 图2 略
3 讨论
阿魏酸对照品溶液及供试品溶液应避光保存，否则易发生分解而使含量降低。阿魏酸易溶于热水、醇、乙酸乙酯和乙醚，微溶于石油醚及苯，曾用乙酸乙酯、甲醇超声或索氏回流提取等方法制备供试液，均有杂质干扰阿魏酸测定。实验中采用碳酸钠水溶液先使阿魏酸成钠盐，然后用乙醚脱去脂溶性成分，用盐酸酸化使阿魏酸游离，再用乙醚将阿魏酸提取出来，该方法大大减少了杂质，排除了对阿魏酸含量测定的干扰。
参考文献
[1]戴忠，钱忠直，候钦云. HPLC法测定坤顺助孕丹胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药，1997，19(7)：9.
[2]贾晓斌，施亚芬，黄一平，等.当归和川芎中阿魏酸高效液相色谱测定方法的改进[J].中成药，1998，20(6)：37.
南京市药品检验所,江苏 南京 210015, http://www.100md.com(许江 张庆 俞小陶)