乌藤镇痛胶囊抗炎镇痛作用实验研究
【摘要】 目的 研究乌藤镇痛胶囊抗炎镇痛作用。方法 以小白鼠为实验动物，用乌藤镇痛胶囊内容物混悬液1.0g/kg、0.5g/kg分别灌胃给药，测定乌藤镇痛胶囊抗炎、镇痛作用。结果 乌藤镇痛胶囊能显著抑制二甲苯所致耳廓肿胀，抑制率分别为60.7%和42.0%；显著降低炎症区域毛细血管的通透性,与对照组比较，P<0.01；能显著抑制棉球肉芽组织增生；并可明显提高小鼠的痛阈值，延长痛阈时间，与对照组比较，P<0.01；并能减少小鼠的扭体次数，与对照组比较，P<0.01。结论 乌藤镇痛胶囊具有显著抗炎、镇痛作用。
【关键词】 乌藤镇痛胶囊；镇痛；抗炎
乌藤镇痛胶囊为本院临床应用多年的复方纯中药制剂，主要含有青风藤、制川乌、当归、木瓜、独活、红花等药物，具有活血化瘀、祛风除湿、抗炎止痛、舒筋活络之功效，临床上用于各种疼痛疗效显著。为了探明其抗炎镇痛作用与效果，本实验研究通过用醋酸引起的小鼠扭体反应[1]，用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和小鼠棉球肉芽肿形成实验[2]，对乌藤镇痛胶囊的镇痛抗炎等药效学进行研究，为临床治疗提供依据。
1 材料
1.1 药物与试剂 乌藤镇痛胶囊(解放军第323医院制药厂生产，批号：050406)；醋酸泼尼松(浙江仙琚制药股份有限公司)；二甲苯(北京五二九五二化工厂)；冰醋酸(洛阳化学试剂厂)；伊文思蓝(上海化学试剂采购供应站)；阿司匹林(无锡阿斯利康制药有限公司)。
1.2 实验动物 健康昆明种小鼠，体重20±2g(由西安医科大学实验动物中心提供，合格证号：陕医动字第08-004号)。实验数据均用Excel 2000处理。
1.3 仪器 AB104-N电子分析天平(上海Mettle-toledo仪器二厂)；GL-20G-Ⅱ型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；Lambda 17UV/vis spectrophotometer Perkin-elmer(美国)。
2 方法与结果
2.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 取健康♂小鼠40只，随机分为4组。每组动物连续ig给药7天，每日1次，对照组给等容积生理盐水，末次给药后1h，将15μl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎，致炎后40min处死小鼠，用直径8mm的打孔器取下左右耳片称重，以左右耳片重量差异作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率。
耳肿胀抑制率(%)＝对照组耳廓肿胀度-治疗组耳廓肿胀度 对照组耳廓肿胀度×100%
结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用。结果见表1。表1 乌藤镇痛胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(略) 注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
2.2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 取健康♂小鼠40只，分组及给药方法同上，末次给药后1h，由小鼠尾静脉注射2%伊文思蓝溶液(按0.1ml/10g),同时ip0.6%冰醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死小鼠，用5ml蒸馏水冲洗小鼠腹腔，收集冲洗液，3000r/min离心15min，取上清液于分光光度计590nm处比色，以吸收度OD值判断小鼠腹腔毛细血管的通透性。结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显的抑制作用。结果见表2。 表2 乌藤镇痛胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (略)注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
2.3 对小鼠棉球肉芽肿的影响 取健康♂小鼠40只，用乙醚麻醉后，无菌条件下手术，在小鼠腋窝部皮下植入一个10mg灭菌棉球。待动物清醒后，分组及给药方法同上，末次给药后1h处死动物，剥离出带肉芽组织的棉球称湿重，在60℃烘箱内烘24h称干重，计算肉芽肿重量。肉芽肿减少率(%)＝对照组肉芽肿干重量-治疗组肉芽肿干重量 对照组肉芽肿干重量×100%结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组对小鼠棉球肉芽均有明显的抑制作用。结果见表3。 表3 乌藤镇痛胶囊对小鼠棉球肉芽肿的影响 (略)
2.4 对小鼠热板法镇痛实验的影响 选用痛阈在5～30s内♀小鼠40只，随机分为4组，ig给药，用热板法(55±0.5)℃分别测定15，30，60min各组小鼠的痛阈值。结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组均可显著提高小鼠的痛阈值，明显延长小鼠的痛阈时间。结果见表4。表4 乌藤镇痛胶囊对小鼠热痛阈的影响 (略) 注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
2.5 对醋酸所致小鼠扭体实验的影响 取健康♂小鼠40只，ig给药。每组动物给药30min后，各组动物均腹腔注射0.8%冰醋酸(按0.1ml/10g给药)，观察记录注射冰醋酸后40min内小鼠出现扭体情况，并记录扭体次数。
乌藤镇痛胶囊镇痛百分率(%)＝ 对照组扭体次数-乌藤镇痛胶囊组扭体次数 对照组扭体次数×100% 结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量均可显著减少醋酸所致小鼠的扭体次数，结果见表5。 表5 乌藤镇痛胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 (略) 注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
3 讨论
通过实验可看出，乌藤镇痛胶囊对二甲苯所致小鼠耳廓炎症有显著抑制作用，高、低剂量组与对照组比较均有明显差异(P<0.01)；对小鼠棉球肉芽肿亦有抑制作用，与对照组比较，P<0.01，说明该药对急、慢性炎症具有较强的抗炎作用。实验还证明，高、低剂量组均能明显抑制醋酸引起的毛细血管通透性的增加，减少腹腔毛细血管的渗出，并有一定的剂量依赖性，2个剂量组与对照组比较，P<0.01。还能明显减少醋酸致痛后的小鼠扭体反应，2个剂量组与对照组比较，P<0.01，说明该药有良好的镇痛作用。通过以往的研究认为，该制剂的抗炎、镇痛作用机制与下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平[3]、抑制中枢丘脑iNOS的表达有关[4]。
本实验表明乌藤镇痛胶囊有明显的缓解疼痛反应和抗炎消肿作用，以上药效实验结果进一步确证了该药治疗疼痛的临床疗效，为开发新药和临床应用提供了有力的依据。
【参考文献】
1 李瑞林，张永林.速效止痛凝胶镇痛抗炎作用的实验研究.解放军药学学报，2006，22(1)：63.
2 陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993，356.
3 李新田，邱财荣，杨喜民，等.乌藤镇痛胶囊对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响.中国医药学刊，2005，3(11)：14.
4 李新田，杨喜民，邱财荣，等.乌藤镇痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠痛阈及下丘脑诱导型一氧化氮合酶表达的影响.医药产业资讯，2005，2(14)：18.
(编辑：若 木), http://www.100md.com(李新田，邱财荣，杨喜民，陈崇尚)
【关键词】 乌藤镇痛胶囊；镇痛；抗炎
乌藤镇痛胶囊为本院临床应用多年的复方纯中药制剂，主要含有青风藤、制川乌、当归、木瓜、独活、红花等药物，具有活血化瘀、祛风除湿、抗炎止痛、舒筋活络之功效，临床上用于各种疼痛疗效显著。为了探明其抗炎镇痛作用与效果，本实验研究通过用醋酸引起的小鼠扭体反应[1]，用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和小鼠棉球肉芽肿形成实验[2]，对乌藤镇痛胶囊的镇痛抗炎等药效学进行研究，为临床治疗提供依据。
1 材料
1.1 药物与试剂 乌藤镇痛胶囊(解放军第323医院制药厂生产，批号：050406)；醋酸泼尼松(浙江仙琚制药股份有限公司)；二甲苯(北京五二九五二化工厂)；冰醋酸(洛阳化学试剂厂)；伊文思蓝(上海化学试剂采购供应站)；阿司匹林(无锡阿斯利康制药有限公司)。
1.2 实验动物 健康昆明种小鼠，体重20±2g(由西安医科大学实验动物中心提供，合格证号：陕医动字第08-004号)。实验数据均用Excel 2000处理。
1.3 仪器 AB104-N电子分析天平(上海Mettle-toledo仪器二厂)；GL-20G-Ⅱ型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；Lambda 17UV/vis spectrophotometer Perkin-elmer(美国)。
2 方法与结果
2.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 取健康♂小鼠40只，随机分为4组。每组动物连续ig给药7天，每日1次，对照组给等容积生理盐水，末次给药后1h，将15μl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎，致炎后40min处死小鼠，用直径8mm的打孔器取下左右耳片称重，以左右耳片重量差异作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率。
耳肿胀抑制率(%)＝对照组耳廓肿胀度-治疗组耳廓肿胀度 对照组耳廓肿胀度×100%
结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用。结果见表1。表1 乌藤镇痛胶囊对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(略) 注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
2.2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 取健康♂小鼠40只，分组及给药方法同上，末次给药后1h，由小鼠尾静脉注射2%伊文思蓝溶液(按0.1ml/10g),同时ip0.6%冰醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死小鼠，用5ml蒸馏水冲洗小鼠腹腔，收集冲洗液，3000r/min离心15min，取上清液于分光光度计590nm处比色，以吸收度OD值判断小鼠腹腔毛细血管的通透性。结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显的抑制作用。结果见表2。 表2 乌藤镇痛胶囊对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 (略)注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
2.3 对小鼠棉球肉芽肿的影响 取健康♂小鼠40只，用乙醚麻醉后，无菌条件下手术，在小鼠腋窝部皮下植入一个10mg灭菌棉球。待动物清醒后，分组及给药方法同上，末次给药后1h处死动物，剥离出带肉芽组织的棉球称湿重，在60℃烘箱内烘24h称干重，计算肉芽肿重量。肉芽肿减少率(%)＝对照组肉芽肿干重量-治疗组肉芽肿干重量 对照组肉芽肿干重量×100%结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组对小鼠棉球肉芽均有明显的抑制作用。结果见表3。 表3 乌藤镇痛胶囊对小鼠棉球肉芽肿的影响 (略)
2.4 对小鼠热板法镇痛实验的影响 选用痛阈在5～30s内♀小鼠40只，随机分为4组，ig给药，用热板法(55±0.5)℃分别测定15，30，60min各组小鼠的痛阈值。结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量组均可显著提高小鼠的痛阈值，明显延长小鼠的痛阈时间。结果见表4。表4 乌藤镇痛胶囊对小鼠热痛阈的影响 (略) 注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
2.5 对醋酸所致小鼠扭体实验的影响 取健康♂小鼠40只，ig给药。每组动物给药30min后，各组动物均腹腔注射0.8%冰醋酸(按0.1ml/10g给药)，观察记录注射冰醋酸后40min内小鼠出现扭体情况，并记录扭体次数。
乌藤镇痛胶囊镇痛百分率(%)＝ 对照组扭体次数-乌藤镇痛胶囊组扭体次数 对照组扭体次数×100% 结果表明，乌藤镇痛胶囊高、低剂量均可显著减少醋酸所致小鼠的扭体次数，结果见表5。 表5 乌藤镇痛胶囊对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 (略) 注：乌藤镇痛胶囊2个剂量组与对照组比较，P<0.01
3 讨论
通过实验可看出，乌藤镇痛胶囊对二甲苯所致小鼠耳廓炎症有显著抑制作用，高、低剂量组与对照组比较均有明显差异(P<0.01)；对小鼠棉球肉芽肿亦有抑制作用，与对照组比较，P<0.01，说明该药对急、慢性炎症具有较强的抗炎作用。实验还证明，高、低剂量组均能明显抑制醋酸引起的毛细血管通透性的增加，减少腹腔毛细血管的渗出，并有一定的剂量依赖性，2个剂量组与对照组比较，P<0.01。还能明显减少醋酸致痛后的小鼠扭体反应，2个剂量组与对照组比较，P<0.01，说明该药有良好的镇痛作用。通过以往的研究认为，该制剂的抗炎、镇痛作用机制与下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平[3]、抑制中枢丘脑iNOS的表达有关[4]。
本实验表明乌藤镇痛胶囊有明显的缓解疼痛反应和抗炎消肿作用，以上药效实验结果进一步确证了该药治疗疼痛的临床疗效，为开发新药和临床应用提供了有力的依据。
【参考文献】
1 李瑞林，张永林.速效止痛凝胶镇痛抗炎作用的实验研究.解放军药学学报，2006，22(1)：63.
2 陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993，356.
3 李新田，邱财荣，杨喜民，等.乌藤镇痛胶囊对类风湿性关节炎大鼠血清IL-1β和TNF-α的影响.中国医药学刊，2005，3(11)：14.
4 李新田，杨喜民，邱财荣，等.乌藤镇痛胶囊对佐剂性关节炎大鼠痛阈及下丘脑诱导型一氧化氮合酶表达的影响.医药产业资讯，2005，2(14)：18.
(编辑：若 木), http://www.100md.com(李新田，邱财荣，杨喜民，陈崇尚)