法测定厚朴浓缩颗粒中厚朴酚、和厚朴酚的含量
摘 要 目的：控制厚朴浓缩颗粒的质量。方法：采用HPLC法对厚朴浓缩颗粒有效成分厚朴酚、和厚朴酚的含量进行测定。结果：厚朴酚平均回收率102.4% ，RSD=0.6%(n=5)，和厚朴酚平均回收率99.25%，RSD=1.6%(n=5)。结论：HPLC法可以用于厚朴浓缩颗粒的质量控制。
关键词 厚朴浓缩颗粒；质量标准；厚朴酚；和厚朴酚；HPLC法
厚朴浓缩颗粒是中药材厚朴(木兰科植物厚朴Magnolia officinalis. et Wills.h或凹叶厚朴Magnolia officinalias Rehd.et wils. var. bioba. et wils的干燥杆皮、根皮及枝皮)经提取加工制成的细粉状颗粒。具有去湿消痰、下气除满的功效，用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。是国家二级保护品种。在实际中，采用中国药典中药材厚朴检测项下有关有效成分厚朴酚、和厚朴酚含量测定的方法不适用于浓缩颗粒，有杂质峰干扰，因此我们对其进行了改进。本文以Shimpack CLCODS柱(150 mm×4.6mm,5 μm)，V(乙腈)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=62∶38为流动相，292 nm作为检测波长的HPLC法进行含量测定，取得了满意的效果。
1 仪器与试药
HP1100系列高效液相色谱仪、Shimpack CLCODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈(色谱纯)、重蒸馏水。岛津UV260紫外可见分光光度计。厚朴酚(批号为07299204)、和厚朴酚(批号为073092040)均由中国药品生物制品检定所提供。
2 实验条件选择
2.1 检测波长选择 厚朴酚(甲醇溶液)的紫外光谱扫描：最强吸收波长和次强吸收波长分别为218.6 nm、291.2 nm。和厚朴酚(甲醇溶液)的紫外光谱扫描：最强吸收波长、次强吸收波长、第三强吸收波长分别为211.8 nm、256.2 nm、293 nm。二者等量混合液的紫外光谱扫描：最强吸收波长、次强吸收波长分别为213.4 nm、291.8 nm。由于样品采用检测波长213 nm测定时，其厚朴酚峰前有一小峰干扰，而采用292 nm作为检测波长测定时，则样品中厚朴酚、和厚朴酚的分离效果均好，故采用292 nm作为检测波长。见图1。
2.2 流动相的选择 比较流动相组成：a、V(甲醇)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=75∶25，b、V(乙腈)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=62∶38，结果a所得的理论板数(以厚朴酚计)约为6500，b所得的理论板数(以厚朴酚计)约为10000，且分离效果好，故选择b。
2.3 提取条件的选择 比较提取溶媒甲醇和乙腈，结果样品以甲醇提取其厚朴酚、和厚朴酚含量分别较乙腈提取高4倍、5倍，故确定采用甲醇提取。比较超声提取时间，分别超声15、20、30 min，结果样品中厚朴酚、和厚朴酚含量基本一致，为保证提取完全和尽量缩短提取时间，确定采用超声提取20 min。
3 实验方法与结果
3.1 色谱条件与系统适用性试验 Shimpack CLCODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱，V(乙腈)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=62∶38为流动相，292 nm作为检测波长，进样量为2 μL。理论板数按厚朴酚计算，应不低于4000。所测得的对照品与样品的色谱图见图2、3。
3.2试液的制备 对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成分别含30 μg/mL和6.8 μg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备：取本品约1 g，精密称定，精密加甲醇25 mL，称重，超声提取20 min，取出，称重，加甲醇补足损失的重量，滤过，取续滤液以微孔滤膜(0.45 μm)滤过，续滤液作为供试品溶液。测定法：分别精密吸取对照品溶液5 μL，供试品溶液5～10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量不得少于0.48%。
图2 略
3.3 线性关系的考察 精密称取厚朴酚和和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL分别含18.912 μg和7.888 μg的混合溶液，分别进样2、5、10、15、20、25、30 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以厚朴酚峰面积(Y1)积分值为纵坐标，厚朴酚进样量(X1)为横坐标计算得回归方程：Y1=1.454X1+0.9925，r=1.0000 以和厚朴酚峰面积(Y2)积分值为纵坐标，和厚朴酚进样量(X2)为横坐标计算得回归方程：Y2=1.6095X2+0.2628，r=1.0000 结果表明厚朴酚在37.824～567.36 μg范围内具良好线性关系，和厚朴酚在15.776～236.64 μg范围内具良好线性关系。
3.4 精密度试验 精密吸收对照品溶液(厚朴酚29.664 μg/mL、和厚朴酚6.848 μg/mL)，按上述“3.2”方法重复进样7次，结果：厚朴酚峰面积值的RSD=0.16%(n=7)，和厚朴酚峰面积值的RSD=0.25%(n=7)。
3.5 重复性试验 取同批样品(批号为990909)各7份，按“32”方法测定厚朴酚和和厚朴酚的含量，结果：厚朴酚含量的RSD=1.5%(n=7)，和厚朴酚含量的RSD=1.5%(n=7)。
3.5 稳定性试验 取1份样品(批号：990909)，按上述“3.2”方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、3、4、5、6、7、24 h测定1次，结果表明所制备的供试品溶液室温下放置24 h基本稳定。
3.6 回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号990909)各5份，精密添加厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，按上述色谱条件测定，结果见表1、表2。结果表明本法回收率好，方法可行。
表1 厚朴酚回收率测定结果 略
3.7 样品测定结果 取3个批号样品按“3.2”方法测定，结果见表3。
4 讨论
本实验结果表明,HPLC法可以用于厚朴浓缩颗粒的质量控制。
表2 和厚朴酚回收率测定结果 略
表3 样品含量测定结果 略
参考文献
[1]中国药典(2000年版一部)[S].204.
[2]宋万志，崔建芳，章观德.厚朴类有效成分的测定及高效液相色谱图[J].天然产物研究与开发，1990，2(40)：1.
[3]Tsai Tunglla,Chou Chengjen,Chen Chiehfu,et al. Glucuronidation of Magnolol assessed Using HPLC/Fluorescence[J].Planta Medica，1995，61(50)：491.
(深圳三九医药股份有限公司，广东 深圳 518029), http://www.100md.com(周以群 沈建斌)
关键词 厚朴浓缩颗粒；质量标准；厚朴酚；和厚朴酚；HPLC法
厚朴浓缩颗粒是中药材厚朴(木兰科植物厚朴Magnolia officinalis. et Wills.h或凹叶厚朴Magnolia officinalias Rehd.et wils. var. bioba. et wils的干燥杆皮、根皮及枝皮)经提取加工制成的细粉状颗粒。具有去湿消痰、下气除满的功效，用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。是国家二级保护品种。在实际中，采用中国药典中药材厚朴检测项下有关有效成分厚朴酚、和厚朴酚含量测定的方法不适用于浓缩颗粒，有杂质峰干扰，因此我们对其进行了改进。本文以Shimpack CLCODS柱(150 mm×4.6mm,5 μm)，V(乙腈)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=62∶38为流动相，292 nm作为检测波长的HPLC法进行含量测定，取得了满意的效果。
1 仪器与试药
HP1100系列高效液相色谱仪、Shimpack CLCODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈(色谱纯)、重蒸馏水。岛津UV260紫外可见分光光度计。厚朴酚(批号为07299204)、和厚朴酚(批号为073092040)均由中国药品生物制品检定所提供。
2 实验条件选择
2.1 检测波长选择 厚朴酚(甲醇溶液)的紫外光谱扫描：最强吸收波长和次强吸收波长分别为218.6 nm、291.2 nm。和厚朴酚(甲醇溶液)的紫外光谱扫描：最强吸收波长、次强吸收波长、第三强吸收波长分别为211.8 nm、256.2 nm、293 nm。二者等量混合液的紫外光谱扫描：最强吸收波长、次强吸收波长分别为213.4 nm、291.8 nm。由于样品采用检测波长213 nm测定时，其厚朴酚峰前有一小峰干扰，而采用292 nm作为检测波长测定时，则样品中厚朴酚、和厚朴酚的分离效果均好，故采用292 nm作为检测波长。见图1。
2.2 流动相的选择 比较流动相组成：a、V(甲醇)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=75∶25，b、V(乙腈)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=62∶38，结果a所得的理论板数(以厚朴酚计)约为6500，b所得的理论板数(以厚朴酚计)约为10000，且分离效果好，故选择b。
2.3 提取条件的选择 比较提取溶媒甲醇和乙腈，结果样品以甲醇提取其厚朴酚、和厚朴酚含量分别较乙腈提取高4倍、5倍，故确定采用甲醇提取。比较超声提取时间，分别超声15、20、30 min，结果样品中厚朴酚、和厚朴酚含量基本一致，为保证提取完全和尽量缩短提取时间，确定采用超声提取20 min。
3 实验方法与结果
3.1 色谱条件与系统适用性试验 Shimpack CLCODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱，V(乙腈)∶V(ρ=0.1%磷酸溶液)=62∶38为流动相，292 nm作为检测波长，进样量为2 μL。理论板数按厚朴酚计算，应不低于4000。所测得的对照品与样品的色谱图见图2、3。
3.2试液的制备 对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成分别含30 μg/mL和6.8 μg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备：取本品约1 g，精密称定，精密加甲醇25 mL，称重，超声提取20 min，取出，称重，加甲醇补足损失的重量，滤过，取续滤液以微孔滤膜(0.45 μm)滤过，续滤液作为供试品溶液。测定法：分别精密吸取对照品溶液5 μL，供试品溶液5～10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量不得少于0.48%。
图2 略
3.3 线性关系的考察 精密称取厚朴酚和和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL分别含18.912 μg和7.888 μg的混合溶液，分别进样2、5、10、15、20、25、30 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以厚朴酚峰面积(Y1)积分值为纵坐标，厚朴酚进样量(X1)为横坐标计算得回归方程：Y1=1.454X1+0.9925，r=1.0000 以和厚朴酚峰面积(Y2)积分值为纵坐标，和厚朴酚进样量(X2)为横坐标计算得回归方程：Y2=1.6095X2+0.2628，r=1.0000 结果表明厚朴酚在37.824～567.36 μg范围内具良好线性关系，和厚朴酚在15.776～236.64 μg范围内具良好线性关系。
3.4 精密度试验 精密吸收对照品溶液(厚朴酚29.664 μg/mL、和厚朴酚6.848 μg/mL)，按上述“3.2”方法重复进样7次，结果：厚朴酚峰面积值的RSD=0.16%(n=7)，和厚朴酚峰面积值的RSD=0.25%(n=7)。
3.5 重复性试验 取同批样品(批号为990909)各7份，按“32”方法测定厚朴酚和和厚朴酚的含量，结果：厚朴酚含量的RSD=1.5%(n=7)，和厚朴酚含量的RSD=1.5%(n=7)。
3.5 稳定性试验 取1份样品(批号：990909)，按上述“3.2”方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、3、4、5、6、7、24 h测定1次，结果表明所制备的供试品溶液室温下放置24 h基本稳定。
3.6 回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号990909)各5份，精密添加厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，按上述色谱条件测定，结果见表1、表2。结果表明本法回收率好，方法可行。
表1 厚朴酚回收率测定结果 略
3.7 样品测定结果 取3个批号样品按“3.2”方法测定，结果见表3。
4 讨论
本实验结果表明,HPLC法可以用于厚朴浓缩颗粒的质量控制。
表2 和厚朴酚回收率测定结果 略
表3 样品含量测定结果 略
参考文献
[1]中国药典(2000年版一部)[S].204.
[2]宋万志，崔建芳，章观德.厚朴类有效成分的测定及高效液相色谱图[J].天然产物研究与开发，1990，2(40)：1.
[3]Tsai Tunglla,Chou Chengjen,Chen Chiehfu,et al. Glucuronidation of Magnolol assessed Using HPLC/Fluorescence[J].Planta Medica，1995，61(50)：491.
(深圳三九医药股份有限公司，广东 深圳 518029), http://www.100md.com(周以群 沈建斌)