关键词 RNA干扰技术;内源基因;TNF-α;Fas;caspase-8

    RNA干扰(RNA interference，RNAi)，即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing PTGS)。自2001年、2002年连续两年被美国《Science》杂志评选为年度10大突破技术之一以来，2003年～2004年继续热度高涨，已经迅速而广泛地应用到基因功能、基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。RNA干扰技术，以其高度的特异性和有效性，在功能基因组学研究中，被认为是非常有用的工具。在医学研究中，它不仅能有效抑制外源性基因的表达，显示较好的抗病毒应用价值，而且，能非常特异地沉默内源性基因的表达，为我们通过选择性地抑制有害基因表达，研究抗炎症、抗凋亡、抗肿瘤等治疗策略提供了新思路和方法 [1] 。

    1 RNA干扰机制及技术原理

    当病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应，其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约21bp～23bp)，即siRNA。

    siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链，继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)。RISC与外源性基因或内源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合，因RISC具有核酸酶的功能，在结合部位可以切割mRNA，切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解，从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。另外，siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA，而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase，RdRP)作用下合成更多新的dsR-NA，新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA，从而使RNAi的作用进一步放大，最终将靶mRNA完全降解 [2] 。

    RNAi干扰现象具有以下几个重要的特征:①RNAi是转录后水平的基因沉默机制;②RNAi具有很高的特异性，只降解与之序列相应的mR-NA [3，4] ;③RNAi抑制基因表达具有很高的效率 ......