Coombs试验对诊断自身免疫性溶血性贫血的价值
【摘要】 目的 探讨Coombs试验对自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的诊断价值。方法 对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验。结果 31例诊断为AIHA，其中22例直接Coombs试验阳性，类型分布依次为IgG+C3型(14/22)、IgG型(5/22)、C3型(3/22)；2例间接Coombs试验阳性。临床符合率为77.4%。结论 Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，但Coombs试验存在一定的假阴性和假阳性。
【关键词】 自身免疫性溶血性贫血； Coombs试验； 诊断
Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia
WU Qin-feng, XU Zhong-ren.
The center for Disease Prevention and Control,Liyang Jiangsu 213300,China
【Abstract】 Objective To study the value of Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia(AIHA).Methods 50 samples obtained from suspected autoimmune hemolytic anemia patients were detected by Coombs test.Results 31 patients were diagnosed as AIHA,among them 22 samples detected by direct Coombs tests were positive,the type distributes in the following order: IgG+C3(14/22)、IgG(5/22)、C3(3/22);2 sample detected by indirect Coombs test was positive.The accordance rate of positivity was 77.4%.Conclusion Coombs test for the diagnosis of AIHA is sensitive,but Coombs test exists certain of false positive with false negative.
【Key words】 autoimmune hemolytic anemia; Coombs test
自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是一组由于人体免疫功能紊乱产生红细胞自身抗体被附于红细胞膜上，致使红细胞加速破坏的溶血性贫血[1]。本文对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验，探讨Coombs试验在诊断AIHA中的价值。
1 材料与方法
1.1 检测对象
根据《血液病诊断及疗效标准》中的温抗体型自身免疫性溶血性贫血的诊断标准[2]，对50例临床高度疑似为AIHA的入院患者进行Coombs试验。这些患者均有不同程度的贫血，65%有黄疸，52%有脾肿大，33%有肝肿大。
1.2 试剂
抗IgG，C3(多特异性)，抗IgG，抗C3为上海血液生物医药有限责任公司生产。用不完全抗D致敏的5%阳性细胞红细胞为临时制备。
1.3 检测原理
不完全抗体不能与含有相应抗原的红细胞发生凝集,但能与其结合,这种结合了不完全抗体的红细胞称致敏红细胞。直接Coombs试验是检测体内已被抗体和(或)补体致敏的红细胞。加入抗人球蛋白血清后，由于球蛋白-抗球蛋白的特异反应，使致敏红细胞发生凝集，从而显示出不完全抗体的存在。间接Coombs试验是检测血清中不完全抗体的方法，即通过血清与细胞的孵育，证实抗体和(或)补体与红细胞在体外的结合。
1.4 方法
直接Coombs试验参照江苏省血液病研究所的操作规程进行。间接Coombs试验参照试剂盒说明书进行操作。
1.4.1 操作
1.4.1.1 直接Coombs试验
(1)采集患者静脉血,用枸橼酸钠抗凝。将被检红细胞用生理盐水洗涤3次，配成5%的红细胞悬液。(2)分别设阴性、阳性对照管，在各试管中加入相应的反应物,混匀后置37℃恒温箱 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼和显微镜观察结果，以显微镜所见为准。(3)多价抗人球蛋白血清阳性的标本用抗IgG,抗C3的单价血清进行分型试验。
1.4.1.2 间接Coombs试验
直接Coombs试验阴性的病例做间接Coombs试验。(1)将2滴受检血清加入试管中，加1滴5%的试剂红细胞，混匀，37℃温育30min。(2)用生理盐水洗涤3次，加入2滴抗人球蛋白血清，混匀后置37℃ 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼或显微镜观察结果。(3)受检血清阳性的标本以生理盐水倍比稀释后，按上述方法进行测定。
1.4.2 直接与间接Coombs试验镜检结果判断
阴性对照管不凝集，阳性对照管凝集，则受检管出现凝集为阳性，对应的稀释度为其滴度；不凝集为阴性。
2 结果
22例直接Coombs试验阳性，其中IgG+C3阳性占63.6%(14/22),IgG阳性占22.7%(5/22),C3阳性占13.6%(3/22)；28例阴性。28例直接Coombs试验阴性的病例2例间接Coombs试验阳性，26例阴性。见表1和表2。
表1 直接Commbs试验
3 讨论
AIHA是人类自身免疫性疾病中相对较为常见的疾病,虽目前免疫机制尚不清楚[3],但开展多年的Coombs试验检查仍为诊断该病的主要依据[4]。
对于50例临床高度疑似为AIHA的病例，本次Coombs试验检测阳性占24例，阴性占26例。26例阴性的病例中19例通过酸溶血试验、高铁血红蛋白还原试验等排除为AIHA，其余7例临床医生结合病例的临床表现典型，对皮质激素治疗反应良好仍诊断为AIHA。由此可知，31例AIHA的病例24例Coombs试验阳性，临床符合率为77.4%。由此进一步证实了Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，同时由于该试验简便、快速、价廉，因而目前被广泛应用。
参照江苏省血液病研究所的操作规程所做的直接Coombs试验是一种半定量测定，它与疾病严重程度的关系，在个体间比较无意义，但在同一个体随访中有自身对照价值，可作为随访病情变化的参考指标。
Coombs试验存在一定的假阴性，常见的原因：(1)Coombs试验不能检出低致敏状态下的红细胞，当红细胞表面少于500个IgG分子时，Coombs试验可阴性。(2)即使红细胞上有相当数量的抗体，足以使溶血性贫血发生，但由于抗体位置及其分布不同，Coombs试验也可阴性。(3)由于红细胞洗涤不当，带有血浆球蛋白或洗涤红细胞过程中红细胞压积过紧使不完全抗体从红细胞上脱落等一系列技术因素也可使Coombs试验阴性。
Coombs试验存在一定的假阳性，常见的原因：(1)试剂不合格。(2)试验用的生理盐水中含有较强的铜、锌、铁，使红细胞被覆多价阳离子。(3)一些药物损伤红细胞表面。(4)α-甲基多巴长期治疗后等一系列因素可使Coombs试验呈现假阳性。
本次试验7例AIHA患者Coombs试验阴性可能与上述原因有关，但本次试验未发现假阳性。近年有学者认为Coombs试验结果与临床表现难以符合时，可以采用一些新的方法提高其诊断率,如张红梅等[5]用亲和生物素化酶复合物-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)定量检测红细胞结合IgG(EA IgG)，赵洪国等[6]通过单向免疫扩散法测定血浆血结素含量等一系列方法，其初步结果均较常规Coombs试验敏感，可提高对AIHA诊断的敏感性及精确度。因此，有条件时可作为补充试验，以弥补常规Coombs试验的不足。
【参考文献】
1 敖忠苏，林宝爵.血液病的现代治疗.南京：江苏科学技术出版社，1990，48-53.
2 张之南.血液病诊断及疗效标准.北京：科学出版社，1998，111-114.
3 Barcellini W,Clerici G,Montesano R,et al.In vitro quantication of anti-red blood cell antibody production in idiopathic autoimmune hemolytic anemia:effect of mitogen and cytokine stimulation.Br J Haematol,2000,111(2):452-460.
4 巴德年.当代免疫学技术与应用.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998，858-860.
5 张红梅，刘强，张可杰，等.ABC-ELISA检测AIHA患者EAIgG的结果分析.上海医学检验杂志,2003,18(6)：383-384.
6 赵洪国，翁维权，张春源，等. 血浆血结素的测定对自身免疫性溶血性贫血诊断的临床意义.临床内科杂志,1996，13(6)：25-26.
作者单位：213300 江苏溧阳，溧阳市疾病预防控制中心
214400江苏江阴，江阴市人民医院
(编辑：石 岚)
【摘要】 目的 探讨Coombs试验对自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的诊断价值。方法 对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验。结果 31例诊断为AIHA，其中22例直接Coombs试验阳性，类型分布依次为IgG+C3型(14/22)、IgG型(5/22)、C3型(3/22)；2例间接Coombs试验阳性。临床符合率为77.4%。结论 Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，但Coombs试验存在一定的假阴性和假阳性。
【关键词】 自身免疫性溶血性贫血； Coombs试验； 诊断
【中图分类号】 R556.62
Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia
WU Qin-feng, XU Zhong-ren.
The center for Disease Prevention and Control,Liyang Jiangsu 213300,China
【Abstract】 Objective To study the value of Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia(AIHA).Methods 50 samples obtained from suspected autoimmune hemolytic anemia patients were detected by Coombs test.Results 31 patients were diagnosed as AIHA,among them 22 samples detected by direct Coombs tests were positive,the type distributes in the following order: IgG+C3(14/22)、IgG(5/22)、C3(3/22);2 sample detected by indirect Coombs test was positive.The accordance rate of positivity was 77.4%.Conclusion Coombs test for the diagnosis of AIHA is sensitive,but Coombs test exists certain of false positive with false negative.
【Key words】 autoimmune hemolytic anemia; Coombs test
自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是一组由于人体免疫功能紊乱产生红细胞自身抗体被附于红细胞膜上，致使红细胞加速破坏的溶血性贫血[1]。本文对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验，探讨Coombs试验在诊断AIHA中的价值。
1 材料与方法
1.1 检测对象
根据《血液病诊断及疗效标准》中的温抗体型自身免疫性溶血性贫血的诊断标准[2]，对50例临床高度疑似为AIHA的入院患者进行Coombs试验。这些患者均有不同程度的贫血，65%有黄疸，52%有脾肿大，33%有肝肿大。
1.2 试剂
抗IgG，C3(多特异性)，抗IgG，抗C3为上海血液生物医药有限责任公司生产。用不完全抗D致敏的5%阳性细胞红细胞为临时制备。
1.3 检测原理
不完全抗体不能与含有相应抗原的红细胞发生凝集,但能与其结合,这种结合了不完全抗体的红细胞称致敏红细胞。直接Coombs试验是检测体内已被抗体和(或)补体致敏的红细胞。加入抗人球蛋白血清后，由于球蛋白-抗球蛋白的特异反应，使致敏红细胞发生凝集，从而显示出不完全抗体的存在。间接Coombs试验是检测血清中不完全抗体的方法，即通过血清与细胞的孵育，证实抗体和(或)补体与红细胞在体外的结合。
1.4 方法
直接Coombs试验参照江苏省血液病研究所的操作规程进行。间接Coombs试验参照试剂盒说明书进行操作。
1.4.1 操作
1.4.1.1 直接Coombs试验
(1)采集患者静脉血,用枸橼酸钠抗凝。将被检红细胞用生理盐水洗涤3次，配成5%的红细胞悬液。(2)分别设阴性、阳性对照管，在各试管中加入相应的反应物,混匀后置37℃恒温箱 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼和显微镜观察结果，以显微镜所见为准。(3)多价抗人球蛋白血清阳性的标本用抗IgG,抗C3的单价血清进行分型试验。
1.4.1.2 间接Coombs试验
直接Coombs试验阴性的病例做间接Coombs试验。(1)将2滴受检血清加入试管中，加1滴5%的试剂红细胞，混匀，37℃温育30min。(2)用生理盐水洗涤3次，加入2滴抗人球蛋白血清，混匀后置37℃ 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼或显微镜观察结果。(3)受检血清阳性的标本以生理盐水倍比稀释后，按上述方法进行测定。
1.4.2 直接与间接Coombs试验镜检结果判断
阴性对照管不凝集，阳性对照管凝集，则受检管出现凝集为阳性，对应的稀释度为其滴度；不凝集为阴性。
2 结果
22例直接Coombs试验阳性，其中IgG+C3阳性占63.6%(14/22),IgG阳性占22.7%(5/22),C3阳性占13.6%(3/22)；28例阴性。28例直接Coombs试验阴性的病例2例间接Coombs试验阳性，26例阴性。见表1和表2。
表1 直接Commbs试验
3 讨论
AIHA是人类自身免疫性疾病中相对较为常见的疾病,虽目前免疫机制尚不清楚[3],但开展多年的Coombs试验检查仍为诊断该病的主要依据[4]。
对于50例临床高度疑似为AIHA的病例，本次Coombs试验检测阳性占24例，阴性占26例。26例阴性的病例中19例通过酸溶血试验、高铁血红蛋白还原试验等排除为AIHA，其余7例临床医生结合病例的临床表现典型，对皮质激素治疗反应良好仍诊断为AIHA。由此可知，31例AIHA的病例24例Coombs试验阳性，临床符合率为77.4%。由此进一步证实了Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，同时由于该试验简便、快速、价廉，因而目前被广泛应用。
参照江苏省血液病研究所的操作规程所做的直接Coombs试验是一种半定量测定，它与疾病严重程度的关系，在个体间比较无意义，但在同一个体随访中有自身对照价值，可作为随访病情变化的参考指标。
Coombs试验存在一定的假阴性，常见的原因：(1)Coombs试验不能检出低致敏状态下的红细胞，当红细胞表面少于500个IgG分子时，Coombs试验可阴性。(2)即使红细胞上有相当数量的抗体，足以使溶血性贫血发生，但由于抗体位置及其分布不同，Coombs试验也可阴性。(3)由于红细胞洗涤不当，带有血浆球蛋白或洗涤红细胞过程中红细胞压积过紧使不完全抗体从红细胞上脱落等一系列技术因素也可使Coombs试验阴性。
Coombs试验存在一定的假阳性，常见的原因：(1)试剂不合格。(2)试验用的生理盐水中含有较强的铜、锌、铁，使红细胞被覆多价阳离子。(3)一些药物损伤红细胞表面。(4)α-甲基多巴长期治疗后等一系列因素可使Coombs试验呈现假阳性。
本次试验7例AIHA患者Coombs试验阴性可能与上述原因有关，但本次试验未发现假阳性。近年有学者认为Coombs试验结果与临床表现难以符合时，可以采用一些新的方法提高其诊断率,如张红梅等[5]用亲和生物素化酶复合物-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)定量检测红细胞结合IgG(EA IgG)，赵洪国等[6]通过单向免疫扩散法测定血浆血结素含量等一系列方法，其初步结果均较常规Coombs试验敏感，可提高对AIHA诊断的敏感性及精确度。因此，有条件时可作为补充试验，以弥补常规Coombs试验的不足。
【参考文献】
1 敖忠苏，林宝爵.血液病的现代治疗.南京：江苏科学技术出版社，1990，48-53.
2 张之南.血液病诊断及疗效标准.北京：科学出版社，1998，111-114.
3 Barcellini W,Clerici G,Montesano R,et al.In vitro quantication of anti-red blood cell antibody production in idiopathic autoimmune hemolytic anemia:effect of mitogen and cytokine stimulation.Br J Haematol,2000,111(2):452-460.
4 巴德年.当代免疫学技术与应用.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998，858-860.
5 张红梅，刘强，张可杰，等.ABC-ELISA检测AIHA患者EAIgG的结果分析.上海医学检验杂志,2003,18(6)：383-384.
6 赵洪国，翁维权，张春源，等. 血浆血结素的测定对自身免疫性溶血性贫血诊断的临床意义.临床内科杂志,1996，13(6)：25-26.
作者单位：213300 江苏溧阳，溧阳市疾病预防控制中心
214400江苏江阴，江阴市人民医院
(编辑：石 岚), 百拇医药(吴琴锋，许忠仁)
【关键词】 自身免疫性溶血性贫血； Coombs试验； 诊断
Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia
WU Qin-feng, XU Zhong-ren.
The center for Disease Prevention and Control,Liyang Jiangsu 213300,China
【Abstract】 Objective To study the value of Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia(AIHA).Methods 50 samples obtained from suspected autoimmune hemolytic anemia patients were detected by Coombs test.Results 31 patients were diagnosed as AIHA,among them 22 samples detected by direct Coombs tests were positive,the type distributes in the following order: IgG+C3(14/22)、IgG(5/22)、C3(3/22);2 sample detected by indirect Coombs test was positive.The accordance rate of positivity was 77.4%.Conclusion Coombs test for the diagnosis of AIHA is sensitive,but Coombs test exists certain of false positive with false negative.
【Key words】 autoimmune hemolytic anemia; Coombs test
自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是一组由于人体免疫功能紊乱产生红细胞自身抗体被附于红细胞膜上，致使红细胞加速破坏的溶血性贫血[1]。本文对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验，探讨Coombs试验在诊断AIHA中的价值。
1 材料与方法
1.1 检测对象
根据《血液病诊断及疗效标准》中的温抗体型自身免疫性溶血性贫血的诊断标准[2]，对50例临床高度疑似为AIHA的入院患者进行Coombs试验。这些患者均有不同程度的贫血，65%有黄疸，52%有脾肿大，33%有肝肿大。
1.2 试剂
抗IgG，C3(多特异性)，抗IgG，抗C3为上海血液生物医药有限责任公司生产。用不完全抗D致敏的5%阳性细胞红细胞为临时制备。
1.3 检测原理
不完全抗体不能与含有相应抗原的红细胞发生凝集,但能与其结合,这种结合了不完全抗体的红细胞称致敏红细胞。直接Coombs试验是检测体内已被抗体和(或)补体致敏的红细胞。加入抗人球蛋白血清后，由于球蛋白-抗球蛋白的特异反应，使致敏红细胞发生凝集，从而显示出不完全抗体的存在。间接Coombs试验是检测血清中不完全抗体的方法，即通过血清与细胞的孵育，证实抗体和(或)补体与红细胞在体外的结合。
1.4 方法
直接Coombs试验参照江苏省血液病研究所的操作规程进行。间接Coombs试验参照试剂盒说明书进行操作。
1.4.1 操作
1.4.1.1 直接Coombs试验
(1)采集患者静脉血,用枸橼酸钠抗凝。将被检红细胞用生理盐水洗涤3次，配成5%的红细胞悬液。(2)分别设阴性、阳性对照管，在各试管中加入相应的反应物,混匀后置37℃恒温箱 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼和显微镜观察结果，以显微镜所见为准。(3)多价抗人球蛋白血清阳性的标本用抗IgG,抗C3的单价血清进行分型试验。
1.4.1.2 间接Coombs试验
直接Coombs试验阴性的病例做间接Coombs试验。(1)将2滴受检血清加入试管中，加1滴5%的试剂红细胞，混匀，37℃温育30min。(2)用生理盐水洗涤3次，加入2滴抗人球蛋白血清，混匀后置37℃ 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼或显微镜观察结果。(3)受检血清阳性的标本以生理盐水倍比稀释后，按上述方法进行测定。
1.4.2 直接与间接Coombs试验镜检结果判断
阴性对照管不凝集，阳性对照管凝集，则受检管出现凝集为阳性，对应的稀释度为其滴度；不凝集为阴性。
2 结果
22例直接Coombs试验阳性，其中IgG+C3阳性占63.6%(14/22),IgG阳性占22.7%(5/22),C3阳性占13.6%(3/22)；28例阴性。28例直接Coombs试验阴性的病例2例间接Coombs试验阳性，26例阴性。见表1和表2。
表1 直接Commbs试验
3 讨论
AIHA是人类自身免疫性疾病中相对较为常见的疾病,虽目前免疫机制尚不清楚[3],但开展多年的Coombs试验检查仍为诊断该病的主要依据[4]。
对于50例临床高度疑似为AIHA的病例，本次Coombs试验检测阳性占24例，阴性占26例。26例阴性的病例中19例通过酸溶血试验、高铁血红蛋白还原试验等排除为AIHA，其余7例临床医生结合病例的临床表现典型，对皮质激素治疗反应良好仍诊断为AIHA。由此可知，31例AIHA的病例24例Coombs试验阳性，临床符合率为77.4%。由此进一步证实了Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，同时由于该试验简便、快速、价廉，因而目前被广泛应用。
参照江苏省血液病研究所的操作规程所做的直接Coombs试验是一种半定量测定，它与疾病严重程度的关系，在个体间比较无意义，但在同一个体随访中有自身对照价值，可作为随访病情变化的参考指标。
Coombs试验存在一定的假阴性，常见的原因：(1)Coombs试验不能检出低致敏状态下的红细胞，当红细胞表面少于500个IgG分子时，Coombs试验可阴性。(2)即使红细胞上有相当数量的抗体，足以使溶血性贫血发生，但由于抗体位置及其分布不同，Coombs试验也可阴性。(3)由于红细胞洗涤不当，带有血浆球蛋白或洗涤红细胞过程中红细胞压积过紧使不完全抗体从红细胞上脱落等一系列技术因素也可使Coombs试验阴性。
Coombs试验存在一定的假阳性，常见的原因：(1)试剂不合格。(2)试验用的生理盐水中含有较强的铜、锌、铁，使红细胞被覆多价阳离子。(3)一些药物损伤红细胞表面。(4)α-甲基多巴长期治疗后等一系列因素可使Coombs试验呈现假阳性。
本次试验7例AIHA患者Coombs试验阴性可能与上述原因有关，但本次试验未发现假阳性。近年有学者认为Coombs试验结果与临床表现难以符合时，可以采用一些新的方法提高其诊断率,如张红梅等[5]用亲和生物素化酶复合物-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)定量检测红细胞结合IgG(EA IgG)，赵洪国等[6]通过单向免疫扩散法测定血浆血结素含量等一系列方法，其初步结果均较常规Coombs试验敏感，可提高对AIHA诊断的敏感性及精确度。因此，有条件时可作为补充试验，以弥补常规Coombs试验的不足。
【参考文献】
1 敖忠苏，林宝爵.血液病的现代治疗.南京：江苏科学技术出版社，1990，48-53.
2 张之南.血液病诊断及疗效标准.北京：科学出版社，1998，111-114.
3 Barcellini W,Clerici G,Montesano R,et al.In vitro quantication of anti-red blood cell antibody production in idiopathic autoimmune hemolytic anemia:effect of mitogen and cytokine stimulation.Br J Haematol,2000,111(2):452-460.
4 巴德年.当代免疫学技术与应用.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998，858-860.
5 张红梅，刘强，张可杰，等.ABC-ELISA检测AIHA患者EAIgG的结果分析.上海医学检验杂志,2003,18(6)：383-384.
6 赵洪国，翁维权，张春源，等. 血浆血结素的测定对自身免疫性溶血性贫血诊断的临床意义.临床内科杂志,1996，13(6)：25-26.
作者单位：213300 江苏溧阳，溧阳市疾病预防控制中心
214400江苏江阴，江阴市人民医院
(编辑：石 岚)
【摘要】 目的 探讨Coombs试验对自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的诊断价值。方法 对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验。结果 31例诊断为AIHA，其中22例直接Coombs试验阳性，类型分布依次为IgG+C3型(14/22)、IgG型(5/22)、C3型(3/22)；2例间接Coombs试验阳性。临床符合率为77.4%。结论 Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，但Coombs试验存在一定的假阴性和假阳性。
【关键词】 自身免疫性溶血性贫血； Coombs试验； 诊断
【中图分类号】 R556.62
Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia
WU Qin-feng, XU Zhong-ren.
The center for Disease Prevention and Control,Liyang Jiangsu 213300,China
【Abstract】 Objective To study the value of Coombs test for the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia(AIHA).Methods 50 samples obtained from suspected autoimmune hemolytic anemia patients were detected by Coombs test.Results 31 patients were diagnosed as AIHA,among them 22 samples detected by direct Coombs tests were positive,the type distributes in the following order: IgG+C3(14/22)、IgG(5/22)、C3(3/22);2 sample detected by indirect Coombs test was positive.The accordance rate of positivity was 77.4%.Conclusion Coombs test for the diagnosis of AIHA is sensitive,but Coombs test exists certain of false positive with false negative.
【Key words】 autoimmune hemolytic anemia; Coombs test
自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是一组由于人体免疫功能紊乱产生红细胞自身抗体被附于红细胞膜上，致使红细胞加速破坏的溶血性贫血[1]。本文对50例临床高度疑似为AIHA的患者进行Coombs试验，探讨Coombs试验在诊断AIHA中的价值。
1 材料与方法
1.1 检测对象
根据《血液病诊断及疗效标准》中的温抗体型自身免疫性溶血性贫血的诊断标准[2]，对50例临床高度疑似为AIHA的入院患者进行Coombs试验。这些患者均有不同程度的贫血，65%有黄疸，52%有脾肿大，33%有肝肿大。
1.2 试剂
抗IgG，C3(多特异性)，抗IgG，抗C3为上海血液生物医药有限责任公司生产。用不完全抗D致敏的5%阳性细胞红细胞为临时制备。
1.3 检测原理
不完全抗体不能与含有相应抗原的红细胞发生凝集,但能与其结合,这种结合了不完全抗体的红细胞称致敏红细胞。直接Coombs试验是检测体内已被抗体和(或)补体致敏的红细胞。加入抗人球蛋白血清后，由于球蛋白-抗球蛋白的特异反应，使致敏红细胞发生凝集，从而显示出不完全抗体的存在。间接Coombs试验是检测血清中不完全抗体的方法，即通过血清与细胞的孵育，证实抗体和(或)补体与红细胞在体外的结合。
1.4 方法
直接Coombs试验参照江苏省血液病研究所的操作规程进行。间接Coombs试验参照试剂盒说明书进行操作。
1.4.1 操作
1.4.1.1 直接Coombs试验
(1)采集患者静脉血,用枸橼酸钠抗凝。将被检红细胞用生理盐水洗涤3次，配成5%的红细胞悬液。(2)分别设阴性、阳性对照管，在各试管中加入相应的反应物,混匀后置37℃恒温箱 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼和显微镜观察结果，以显微镜所见为准。(3)多价抗人球蛋白血清阳性的标本用抗IgG,抗C3的单价血清进行分型试验。
1.4.1.2 间接Coombs试验
直接Coombs试验阴性的病例做间接Coombs试验。(1)将2滴受检血清加入试管中，加1滴5%的试剂红细胞，混匀，37℃温育30min。(2)用生理盐水洗涤3次，加入2滴抗人球蛋白血清，混匀后置37℃ 5min，取出，1000r/min离心1min，然后用肉眼或显微镜观察结果。(3)受检血清阳性的标本以生理盐水倍比稀释后，按上述方法进行测定。
1.4.2 直接与间接Coombs试验镜检结果判断
阴性对照管不凝集，阳性对照管凝集，则受检管出现凝集为阳性，对应的稀释度为其滴度；不凝集为阴性。
2 结果
22例直接Coombs试验阳性，其中IgG+C3阳性占63.6%(14/22),IgG阳性占22.7%(5/22),C3阳性占13.6%(3/22)；28例阴性。28例直接Coombs试验阴性的病例2例间接Coombs试验阳性，26例阴性。见表1和表2。
表1 直接Commbs试验
3 讨论
AIHA是人类自身免疫性疾病中相对较为常见的疾病,虽目前免疫机制尚不清楚[3],但开展多年的Coombs试验检查仍为诊断该病的主要依据[4]。
对于50例临床高度疑似为AIHA的病例，本次Coombs试验检测阳性占24例，阴性占26例。26例阴性的病例中19例通过酸溶血试验、高铁血红蛋白还原试验等排除为AIHA，其余7例临床医生结合病例的临床表现典型，对皮质激素治疗反应良好仍诊断为AIHA。由此可知，31例AIHA的病例24例Coombs试验阳性，临床符合率为77.4%。由此进一步证实了Coombs试验能较敏感地测定吸附在红细胞膜上的不完全抗体(IgG等)和补体(C3)，同时由于该试验简便、快速、价廉，因而目前被广泛应用。
参照江苏省血液病研究所的操作规程所做的直接Coombs试验是一种半定量测定，它与疾病严重程度的关系，在个体间比较无意义，但在同一个体随访中有自身对照价值，可作为随访病情变化的参考指标。
Coombs试验存在一定的假阴性，常见的原因：(1)Coombs试验不能检出低致敏状态下的红细胞，当红细胞表面少于500个IgG分子时，Coombs试验可阴性。(2)即使红细胞上有相当数量的抗体，足以使溶血性贫血发生，但由于抗体位置及其分布不同，Coombs试验也可阴性。(3)由于红细胞洗涤不当，带有血浆球蛋白或洗涤红细胞过程中红细胞压积过紧使不完全抗体从红细胞上脱落等一系列技术因素也可使Coombs试验阴性。
Coombs试验存在一定的假阳性，常见的原因：(1)试剂不合格。(2)试验用的生理盐水中含有较强的铜、锌、铁，使红细胞被覆多价阳离子。(3)一些药物损伤红细胞表面。(4)α-甲基多巴长期治疗后等一系列因素可使Coombs试验呈现假阳性。
本次试验7例AIHA患者Coombs试验阴性可能与上述原因有关，但本次试验未发现假阳性。近年有学者认为Coombs试验结果与临床表现难以符合时，可以采用一些新的方法提高其诊断率,如张红梅等[5]用亲和生物素化酶复合物-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)定量检测红细胞结合IgG(EA IgG)，赵洪国等[6]通过单向免疫扩散法测定血浆血结素含量等一系列方法，其初步结果均较常规Coombs试验敏感，可提高对AIHA诊断的敏感性及精确度。因此，有条件时可作为补充试验，以弥补常规Coombs试验的不足。
【参考文献】
1 敖忠苏，林宝爵.血液病的现代治疗.南京：江苏科学技术出版社，1990，48-53.
2 张之南.血液病诊断及疗效标准.北京：科学出版社，1998，111-114.
3 Barcellini W,Clerici G,Montesano R,et al.In vitro quantication of anti-red blood cell antibody production in idiopathic autoimmune hemolytic anemia:effect of mitogen and cytokine stimulation.Br J Haematol,2000,111(2):452-460.
4 巴德年.当代免疫学技术与应用.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1998，858-860.
5 张红梅，刘强，张可杰，等.ABC-ELISA检测AIHA患者EAIgG的结果分析.上海医学检验杂志,2003,18(6)：383-384.
6 赵洪国，翁维权，张春源，等. 血浆血结素的测定对自身免疫性溶血性贫血诊断的临床意义.临床内科杂志,1996，13(6)：25-26.
作者单位：213300 江苏溧阳，溧阳市疾病预防控制中心
214400江苏江阴，江阴市人民医院
(编辑：石 岚), 百拇医药(吴琴锋，许忠仁)