高效液相色谱电感耦合等离子体质谱法分析生物样品中硒的化学形态
反相离子对高效液相色谱,,反相离子对高效液相色谱，电感耦合等离子体质谱，联用技术，生物样品，形态分析，硒,摘要,关键词,1引言,2
摘要 建立了用于生物样品中含硒化合物在线分离分析的联用方法。用反相离子对高效液相色谱(RPIPHPLC)分离含硒化合物，用电感耦合等离子体质谱(ICPMS)在线分析硒含量。与标准化合物的色谱图和工作曲线对照进行定性和定量分析，实现了对硒酸钠、亚硒酸钠、硒代胱氨酸、硒代胱胺、硒代蛋氨酸、硒代尿素和三甲基硒离子等7种生物体常见的含硒小分子的分析，检出限为0.1～1.5 μg/L；线性范围为1～100 μg/L，应用于人血清、尿、肝组织细胞质溶胶等样品中含硒小分子的形态分析，所需进样量仅50 μL，各含硒化合物加标回收率在93%～117 %。本方法操作简便，灵敏度高，重现性好，适合于各种生物样品中含硒小分子的形态分析。关键词 反相离子对高效液相色谱，电感耦合等离子体质谱，联用技术，生物样品，形态分析，硒
1 引言
硒是一种重要的人体必需微量元素，它参与组成体内许多重要抗氧化酶的活性中心，近年来研究表明，其具有抗癌功能[1～4]。硒的生物功能与其化学形态和含量密切相关[5]，因此要全面研究硒的生物学意义，形态分析(确定样品中元素的一种或多种化学形态的定性和定量分析)十分必要。硒在生物和环境样品中含量极低，所以对分析的灵敏度和精确度的要求很高[6]。国外已有数篇文章综述了硒形态分析的相关方法[7，8]，联用技术被认为是进行化学形态分析 (chemical speciation) 的有效手段，其中高效液相色谱(HPLC)与电感耦合等离子质谱(ICPMS)联用作为一种高灵敏的元素形态分析方法得到广泛的应用[9～12]。
ICPMS因其超高的灵敏度成为元素选择性分析的有效手段，而且液相色谱和ICPMS联用，在具备标准物质的情况下，对已知结构的硒化合物有很好的分析效果。由于ICPMS的高灵敏度和低基体效应，很多不同的流动相都可用于联用研究。因此, HPLCICPMS成为元素形态分析的主流技术。本研究建立了分离和分析硒化合物的HPLCICPMS联用的方法，并成功地应用于不同类型实际生物样品中含硒小分子化合物的研究。
2 实验部分
2.1 试剂
硒标准物质中硒酸钠(Na2SeO4)为高纯试剂(Alfa Aesar公司)；亚硒酸钠(Na2SeO3)为分析纯试剂(北京中联化工厂)；硒代胱氨酸(SeCys)、硒代胱胺(SeCM)、硒代蛋氨酸(SeMet)为高纯试剂(Sigma公司)；硒代尿素(SeUr)和七氟丁酸为高纯试剂(Fluka公司)；三甲基硒离子(TmSeI)根据Foster等[13]的方法由本实验室合成；甲醇为国产色谱纯试剂 ......
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