黄嘌呤氧化酶_____黄嘌呤氧化酶,

辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性

http://www.100md.com 《分析化学》 2006年第6期

黄嘌呤氧化酶,,黄嘌呤氧化酶,辣根过氧化物酶,酶的活力测定,分光光度法,摘要,关键词,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References

     摘要研究了以辣根过氧化物酶苯酚 4氨基安替比林反应显色新体系，检测黄嘌呤氧化酶(XOD)活力的新方法。确定该酶活性测定的最佳条件为：辣根过氧化物酶(HRP) 7000 U/L，4氨基安替比林(AAP) 1 mmol/L，苯酚(PA) 6 mmol/L，黄嘌呤(XAN) 1 mmol/L溶于50 mmol/L TrisCL缓冲液(pH 8.4)；反应温度为37℃，保温时间为20 min；检测波长为508 nm。本方法测定XOD酶活的线性范围为5.0~100.0 U/L，线性关系良好(r=0.9992)，检出限为1.3 U/L。该方法操作简单易行，测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测。

     关键词 黄嘌呤氧化酶, 辣根过氧化物酶, 酶的活力测定, 分光光度法

     1 引言

    黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XOD，EC 1. 2. 3. 22) 是一种钼羟类胞质缀合酶。主要用于痛风、心肌梗塞和细胞损伤后次黄嘌呤和黄嘌呤水平的检测[1～3]。目前测定黄嘌呤氧化酶活力主要采用NBT/ MTSPMS比色法、紫外分光光度法、电化学法及放射化学法[4～8]等方法。但比色法形成的显色物溶解度低，PMS对XOD活性有一定的抑制，且NBT、MTS和PMS试剂昂贵。紫外分光光度法中黄嘌呤和尿酸的紫外吸收波长较接近，直接进行紫外检测，干扰严重。其余两种方法操作繁琐，仪器设备要求高而难于推广。本实验根据辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP) [9]和黄嘌呤氧化酶的反应特性，提出了用XOD偶联辣根过氧化物酶，直接测定黄嘌呤氧化酶活力的新方法。

     2 实验部分

    2.1 仪器和试剂

    U300型紫外可见分光光度仪(日本日立公司); H.H.S 112R恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)；高速冷冻离心机(日本Hitachi CR22G型)。0.67 U/mg黄嘌呤氧化酶(Sigma公司)；250 U/mg辣根过氧化物酶(上海双向西巴斯科技有限公司)；4氨基安替比林(AR，华东师范大学化工厂)；苯酚(AR，国药集团上海化学试剂公司)；黄嘌呤(99% ......

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