摘要 利用硫堇(thionine, Thi)作为介体结合多壁碳纳米管(MWNTs)、壳聚糖(chitosan, CHIT)、辣根过氧化酶(HRP)的混合包埋物制作过氧化氢(H2O2)生物传感器。研究结果表明所得传感器对H2O2具有明显的增敏效应，线性范围为0.03~5.5 mmol/L，相关系数为0.9995;检出限为19 μmol/L(S/N=3)，具有良好的稳定性及工作寿命。

     关键词 碳纳米管，硫堇，壳聚糖，辣根过氧化酶，过氧化氢

     1 引言

    H2O2是过氧化酶参与的酶促反应产物，其含量对食品、药物和环境分析等[1]具有重要意义。迄今为止，H2O2的定量分析方法有光谱法[2，3]、化学荧光分析法[4，5]、滴定分析法[6]以及电化学分析法[7～12]。其中电化学分析法由于具有较高的灵敏度，良好的线性范围，快速而稳定的响应信号而被广泛研究。

    酶是生物传感器敏感器件，目前酶在传感器上的固定方法包括物理吸附法[9]、包埋法[10]、共价吸附法[11]以及交联法[12]等。碳纳米管(carbon nanotubes，CNTs)发现于1991年[13]，由于其具有极高的机械强度、良好的吸附能力、较大的比表面积和长径比、较多的催化位点等性质而被广泛地应用在生物传感器的研究之中[14，15]。但迄今为止，以Thi作为介体结合CNTs制作H2O2传感器的工作仍未见报道。

     2 实验部分

    2.1 试剂与仪器

    辣根过氧化钙(HRP)(国药集团化学试剂有限公司)；壳聚糖(CHIT)(上海伯奥生物科技有限公司)；脱乙酰度为99%。H2O2(30%)购自广州化学试剂厂。羧基化的多壁碳纳米管(MWNTs)(深圳纳米港公司)，纯度大于90%，直接使用。其它试剂均为分析纯。0.1 mmol/L的Thi溶液用0.05 mol/L pH 6.5的PBS溶液配制。1%的CHIT溶液用醋酸溶液配制。其余溶液用超纯水配制。

    CHI660A型电化学工作站(上海辰华仪器公司)及三电极系统：H2O2传感器为工作电极，铂丝为辅助电极，Ag/AgCl为参比电极。

    2.2 传感器的制作

    5 μL 0.5%的Nafion滴涂在抛光良好的玻碳电极表面 ......