外周血中生存素的表达与乳腺癌预后的关系
【摘要】 目的 探讨乳腺癌患者外周血中生存素表达的情况与预后的关系。方法 应用RT-PCR、定量PCR、免疫组化法检测，检测10例晚期乳腺癌患者外周血及组织中生存素的表达。结果 在10例患者中3例生存素阳性表达，mRNA表达与蛋白表达一致。4例临床疗效评价达到PR，且这4例患者生存素均为阴性表达。结论 生存素的表达关系到乳腺癌患者的预后，可作为判断患者预后的一个重要指标。
【关键词】 乳腺癌；外周血；生存素；预后
The relationship between expression of peripheral blood survivin and prognosis of breast cancer
LI Lan-fang，ZHANG Ai-lian，HUANG Chun，et al.
Tianjin Cancer Hospital，Tianjin 300060，China
【Abstract】 Objective To study the relationship between expression of peripheral blood survivin and prognosis of breast cancer patients.Methods Expression of peripheral blood survivin of breast cancer was determined by the methods of RT-PCR、quantitied PCR and immunohistochemistry.Results The positive ratio of the expression of survivin is 3/10.The expression detected by immunohistochemical examination coincided with their mRNA expression.The ratio of PR is 4/10 in clinical respond rate.Conclusion The results suggest that there arre some relationship between the expression of peripheral blood survivin and prognosis of breast cancer patients and survivin maybe as an important index in evaluation of prognosis of breast cancer.
【Key words】 breast cancer；survivin；prognosis；peripheral blood
生存素是1997年发现的一个凋亡抑制因子，它具有抑制凋亡和调节细胞增殖的双重作用[1]。因其在胚胎组织和大多数肿瘤组织中高表达，而在正常组织几乎不表达[2]而备受关注。近年来的研究显示生存素在乳腺癌诊断治疗中存在着很大的发展潜力。本课题通过对10例乳腺癌患者化疗前后生存素水平进行检测，分析化疗前后生存素水平的变化与患者疗效的关系，初步探讨生存素对乳腺癌患者预后进行评估的作用。
1 资料与方法
1.1 临床资料 10例晚期乳腺癌患者均有明确的病理学诊断同时具备化疗的基本条件，其中：单纯癌7例，浸润性导管癌3例。患者均为女性，年龄在40～65岁之间。
1.2 试剂来源 总RNA提取所需试剂Trizol由Invitrogen life technologies公司生产。PCR所用试剂如逆转录酶(MLV)、Taq酶及其他试剂均由Takara公司生产。定量PCR试剂盒由Invitrogen公司生产。生存素抗体由Newmarker公司生产。
1.3 RNA提取及RT-PCR、定量PCR法 化疗前后分别抽取10例患者的外周静脉血各10ml，按常规方法提取总RNA并用RT-PCR、定量PCR法分别对生存素进行半定量、定量检测。
1.4 免疫组化法 以Newmarker公司提供的生存素阳性表达的胃癌组织为阳性对照，根据切片染色的情况来判断生存素蛋白的表达情况。
2 结果
2.1 生存素表达的阳性率 在10例患者中3例生存素基因及蛋白均为阳性表达(见图1及图2)。同时生存素基因及蛋白表达的阳性率一致。
2.2 生存素的表达与疗效的关系 按照WHO的疗效评价标准，在10例患者有4例疗效达PR，其瘤组织生存素表达均为阴性，同时定量PCR结果显示外周血中生存素阴性表达的患者化疗后生存素下降幅度明显高于阳性表达的患者(见表1)。
表1 生存素的表达及化疗前后的变化 略
3 讨论
生存素的一个重要特征是在肿瘤组织与正常组织中的不同表达。生存素在胚胎中广泛表达，而在除人胸腺细胞[1]、CD34+骨髓干细胞[3]以及肠上皮细胞[4]之外的已分化正常组织几乎不表达。生存素在乳腺癌等肿瘤组织过度表达，在来自同一肿瘤的正常组织却几乎不表达。国外文献报道：Nasu[5]用荧光法测定通过多聚酶链反应(RT-PCR)取得的生存素mRNA在乳腺癌中的表达情况时，得出以下结论：在乳腺癌组织中的阳性表达率是90.2%(37/41)，而在邻近的正常组织是23%(3/13)，两者表达的差异与临床病理因素无关，因此生存素可作为诊断乳腺癌一个有效的独立标志物。Izawa[6]对39例乳腺癌患者肿瘤组织中c-erbB2、PLU-1和生存素的表达情况进行定量分析时的结果如下：c-erbB2、PLU-1和生存素的肿瘤阳性表达率分别是20.5%、7.7%和69.2%，同时，PLU-1阳性表达的患者生存素均为阴性表达，可见生存素是一种比目前临床上常用的c-erbB2和PLU-1更有诊断意义的乳腺癌标志物。另有国外文献报道[7]：生存素在年轻乳腺癌患者中明显高表达，同时在雌激素受体(ER)和(或)孕激素受体(PR)阴性患者、表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)高表达的患者中明显过度表达。这些指标已被证实是乳腺癌患者预后不良的因素。而生存素本身可作为独立预测预后的指标之一。
以上这些资料均为以生存素作为乳腺癌的诊断及预后评估指标提供了理论基础。近年来乳腺癌的发病率不断升高，化疗是治疗晚期乳腺癌的主要手段之一，对化疗的敏感程度直接关系到患者的生存时间。在本研究中，化疗疗效好的患者瘤组织生存素基因及蛋白表达均为阴性，且化疗后生存素下降的程度明显高于其他患者。可见外周血中生存素的水平与乳腺癌对化疗的敏感性有直接关系，可能对预后做出有效评估。本试验与目前国内外的研究有着相同的结果，只是他们对生存素的检测取材于肿瘤组织，不利于化疗前后的监测同时会给患者带来痛苦。而本研究的标本主要来源于患者的外周血，取材方便，并可随时监测生存素的变化。适于临床上推广应用。
体外实验发现生存素在PANC-1细胞表达的强度是MIAPaCa-2的17倍，经过5Gy的X线照射后，前者的存活率是后者的6倍。而且亚致死放射量还可诱导生存素的表达，进而在致死剂量下抑制细胞的凋亡[8]。在对化疗药顺铂的研究中也有类似的结果[9]。上述结果提示在对生存素阳性的肿瘤患者进行治疗时，应该相对加大初始剂量。这些结果为生存素在临床上的应用提供了一条新线索，它将成为指导医生用药的一个新指标。
总之，生存素与乳腺癌患者对化疗的敏感性相关，并直接关系到患者的预后，可作为判断患者预后的一个重要指标。同时可成为用于指导临床用药的指标之一。随着病例数量的积累，生存素在临床工作中的这些作用将不断被验证。
(本文图片略)
【参考文献】
1 Ambrosini G，Adida C，Sirugo G，et al.Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin genge targetiong.J Biol Chem，1998，273:11177-11182.
2 Adida C，Crotty PL，McGrath J，et al.Developmentally regulated expression of the novel caner anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation.Am J Pathol，1998，152:43-49.
3 Carter B，Milella M，Altieri DC，et al.Cytokine-regulated expression of surviving in myeloidleukemia.Blood，2001，97:278-2790.
4 Zhang T.Evidence that APC regulates surviving epression:a possible mechanism contributing to the stem cell origin of colon caner.Cancer Res，2001，68.
5 Nasu S，Yagihashi A，Izawa A，et al.Survivin mRNA expression in patiens with breast cancer.Anticancer Res，2002，22(3):1839-1843.
6 Izawa A，Kobayashi D，Nasu S，et al.Relevance of c-erbB2、PLU-1 and surviving mRNA expression to diagnostic assessment of breast cancer.Anticancer Res，2002，22(5):2965-2969.
7 Span PN，Sweep Fc，Wiegerinck ET，et al.Survivin is an independent prognostic marker for risk stratification of breast cancer patients.Clin Chem，2004，50(11):1986-1993.
8 Asanuma K，Moriai R，Yaijima T，et al.Survivin as a radioresistance factor in pancreatic cancer.Jpn J Cancer Res，2000，91(11):1204-1209.
9 Ikeguchi M，Liu J，Kaibara N.Expression of survivin mRNA and protein in gastric cancer cell line (MKN-45) during cisplatin treatment. Apoptosis，2002，7(1):23-29.
作者单位： 300060 天津，天津医科大学附属肿瘤医院
(编辑：齐 永), 百拇医药(李凯)
【关键词】 乳腺癌；外周血；生存素；预后
The relationship between expression of peripheral blood survivin and prognosis of breast cancer
LI Lan-fang，ZHANG Ai-lian，HUANG Chun，et al.
Tianjin Cancer Hospital，Tianjin 300060，China
【Abstract】 Objective To study the relationship between expression of peripheral blood survivin and prognosis of breast cancer patients.Methods Expression of peripheral blood survivin of breast cancer was determined by the methods of RT-PCR、quantitied PCR and immunohistochemistry.Results The positive ratio of the expression of survivin is 3/10.The expression detected by immunohistochemical examination coincided with their mRNA expression.The ratio of PR is 4/10 in clinical respond rate.Conclusion The results suggest that there arre some relationship between the expression of peripheral blood survivin and prognosis of breast cancer patients and survivin maybe as an important index in evaluation of prognosis of breast cancer.
【Key words】 breast cancer；survivin；prognosis；peripheral blood
生存素是1997年发现的一个凋亡抑制因子，它具有抑制凋亡和调节细胞增殖的双重作用[1]。因其在胚胎组织和大多数肿瘤组织中高表达，而在正常组织几乎不表达[2]而备受关注。近年来的研究显示生存素在乳腺癌诊断治疗中存在着很大的发展潜力。本课题通过对10例乳腺癌患者化疗前后生存素水平进行检测，分析化疗前后生存素水平的变化与患者疗效的关系，初步探讨生存素对乳腺癌患者预后进行评估的作用。
1 资料与方法
1.1 临床资料 10例晚期乳腺癌患者均有明确的病理学诊断同时具备化疗的基本条件，其中：单纯癌7例，浸润性导管癌3例。患者均为女性，年龄在40～65岁之间。
1.2 试剂来源 总RNA提取所需试剂Trizol由Invitrogen life technologies公司生产。PCR所用试剂如逆转录酶(MLV)、Taq酶及其他试剂均由Takara公司生产。定量PCR试剂盒由Invitrogen公司生产。生存素抗体由Newmarker公司生产。
1.3 RNA提取及RT-PCR、定量PCR法 化疗前后分别抽取10例患者的外周静脉血各10ml，按常规方法提取总RNA并用RT-PCR、定量PCR法分别对生存素进行半定量、定量检测。
1.4 免疫组化法 以Newmarker公司提供的生存素阳性表达的胃癌组织为阳性对照，根据切片染色的情况来判断生存素蛋白的表达情况。
2 结果
2.1 生存素表达的阳性率 在10例患者中3例生存素基因及蛋白均为阳性表达(见图1及图2)。同时生存素基因及蛋白表达的阳性率一致。
2.2 生存素的表达与疗效的关系 按照WHO的疗效评价标准，在10例患者有4例疗效达PR，其瘤组织生存素表达均为阴性，同时定量PCR结果显示外周血中生存素阴性表达的患者化疗后生存素下降幅度明显高于阳性表达的患者(见表1)。
表1 生存素的表达及化疗前后的变化 略
3 讨论
生存素的一个重要特征是在肿瘤组织与正常组织中的不同表达。生存素在胚胎中广泛表达，而在除人胸腺细胞[1]、CD34+骨髓干细胞[3]以及肠上皮细胞[4]之外的已分化正常组织几乎不表达。生存素在乳腺癌等肿瘤组织过度表达，在来自同一肿瘤的正常组织却几乎不表达。国外文献报道：Nasu[5]用荧光法测定通过多聚酶链反应(RT-PCR)取得的生存素mRNA在乳腺癌中的表达情况时，得出以下结论：在乳腺癌组织中的阳性表达率是90.2%(37/41)，而在邻近的正常组织是23%(3/13)，两者表达的差异与临床病理因素无关，因此生存素可作为诊断乳腺癌一个有效的独立标志物。Izawa[6]对39例乳腺癌患者肿瘤组织中c-erbB2、PLU-1和生存素的表达情况进行定量分析时的结果如下：c-erbB2、PLU-1和生存素的肿瘤阳性表达率分别是20.5%、7.7%和69.2%，同时，PLU-1阳性表达的患者生存素均为阴性表达，可见生存素是一种比目前临床上常用的c-erbB2和PLU-1更有诊断意义的乳腺癌标志物。另有国外文献报道[7]：生存素在年轻乳腺癌患者中明显高表达，同时在雌激素受体(ER)和(或)孕激素受体(PR)阴性患者、表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)高表达的患者中明显过度表达。这些指标已被证实是乳腺癌患者预后不良的因素。而生存素本身可作为独立预测预后的指标之一。
以上这些资料均为以生存素作为乳腺癌的诊断及预后评估指标提供了理论基础。近年来乳腺癌的发病率不断升高，化疗是治疗晚期乳腺癌的主要手段之一，对化疗的敏感程度直接关系到患者的生存时间。在本研究中，化疗疗效好的患者瘤组织生存素基因及蛋白表达均为阴性，且化疗后生存素下降的程度明显高于其他患者。可见外周血中生存素的水平与乳腺癌对化疗的敏感性有直接关系，可能对预后做出有效评估。本试验与目前国内外的研究有着相同的结果，只是他们对生存素的检测取材于肿瘤组织，不利于化疗前后的监测同时会给患者带来痛苦。而本研究的标本主要来源于患者的外周血，取材方便，并可随时监测生存素的变化。适于临床上推广应用。
体外实验发现生存素在PANC-1细胞表达的强度是MIAPaCa-2的17倍，经过5Gy的X线照射后，前者的存活率是后者的6倍。而且亚致死放射量还可诱导生存素的表达，进而在致死剂量下抑制细胞的凋亡[8]。在对化疗药顺铂的研究中也有类似的结果[9]。上述结果提示在对生存素阳性的肿瘤患者进行治疗时，应该相对加大初始剂量。这些结果为生存素在临床上的应用提供了一条新线索，它将成为指导医生用药的一个新指标。
总之，生存素与乳腺癌患者对化疗的敏感性相关，并直接关系到患者的预后，可作为判断患者预后的一个重要指标。同时可成为用于指导临床用药的指标之一。随着病例数量的积累，生存素在临床工作中的这些作用将不断被验证。
(本文图片略)
【参考文献】
1 Ambrosini G，Adida C，Sirugo G，et al.Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin genge targetiong.J Biol Chem，1998，273:11177-11182.
2 Adida C，Crotty PL，McGrath J，et al.Developmentally regulated expression of the novel caner anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation.Am J Pathol，1998，152:43-49.
3 Carter B，Milella M，Altieri DC，et al.Cytokine-regulated expression of surviving in myeloidleukemia.Blood，2001，97:278-2790.
4 Zhang T.Evidence that APC regulates surviving epression:a possible mechanism contributing to the stem cell origin of colon caner.Cancer Res，2001，68.
5 Nasu S，Yagihashi A，Izawa A，et al.Survivin mRNA expression in patiens with breast cancer.Anticancer Res，2002，22(3):1839-1843.
6 Izawa A，Kobayashi D，Nasu S，et al.Relevance of c-erbB2、PLU-1 and surviving mRNA expression to diagnostic assessment of breast cancer.Anticancer Res，2002，22(5):2965-2969.
7 Span PN，Sweep Fc，Wiegerinck ET，et al.Survivin is an independent prognostic marker for risk stratification of breast cancer patients.Clin Chem，2004，50(11):1986-1993.
8 Asanuma K，Moriai R，Yaijima T，et al.Survivin as a radioresistance factor in pancreatic cancer.Jpn J Cancer Res，2000，91(11):1204-1209.
9 Ikeguchi M，Liu J，Kaibara N.Expression of survivin mRNA and protein in gastric cancer cell line (MKN-45) during cisplatin treatment. Apoptosis，2002，7(1):23-29.
作者单位： 300060 天津，天津医科大学附属肿瘤医院
(编辑：齐 永), 百拇医药(李凯)