急性子乙醇提取液对达克罗宁促透皮作用的实验研究
【摘 要】 目的 研究中药急性子乙醇提取液对盐酸达克罗宁促透皮作用。方法 采用一阶导数分光光度法和体外透皮吸收实验方法测定透过液中盐酸达克罗宁的振幅D值。结果 急性子乙醇提取液D值，与空白对照组比较，P<0.05，与氮酮标准组比较，P>0.05。结论 急性子乙醇提取液具有促进盐酸达克罗宁透皮吸收的作用。
【关键词】 急性子；氮酮；盐酸达克罗宁；透皮吸收；一阶导数分光光度法
Study on Skin Penetration Enhancing Effect for Dyclonine Hydrochloride by Extract of Jixingzi in Alcohol HAO Yong,LIU Jingdong,ZHANG Tao.Bethune Military Medical College,ShiJiazhuang 050081,China
【Abstract】 Objective To study skin penetration enhancing effect for dyclonine hydrochloride by extract of Jixingzi in alcohol. Methods To determin dyclonine hydrochloride Dvalue in transdermal solution by using transdermal test way and first order derivative spectrophotometry. Results The Dvalue of differential concentrations extract of Jixingzi in alcohol were compared with that of blank control trial group (P<0.05),compared with that of standard control trial group (P>0.05). Conclusion Extract of Jixingzi in alcohol can enhance dyclonine hydrochloride to penetrate rat skin.
【Key words】 Jixingzi；Azone；Dyclonine hydrochloride；Transdermal absorption；First order derivative spectrophotometry
急性子为凤仙花科植物凤仙Impatiens balsamina L.的种子，具有透骨软坚作用。我们已就急性子乙醇提取液对扑热息痛的促透皮作用进行了研究[1]，证实急性子乙醇提取液确有促进扑热息痛透过小白鼠去毛皮肤的作用。我们又以急性子乙醇提取液对盐酸达克罗宁促透皮作用进行了研究。
1 材料与方法
1.1 仪器、药品及实验动物 UV265紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，透皮吸收仪(北京军区药物研究所制)；盐酸达克罗宁(上海轻工实验厂)；急性子(购自石家庄乐仁堂药店)；其他试剂均为分析纯；雄性小白鼠(河北医科大学动物中心提供)。
1.2 方法
1.2.1 实验条件的选择 ①1%盐酸达克罗宁试验药液的制备：取急性子粗粉40 g，以95%的乙醇100 ml，浸泡2周，过滤，取滤液待用。精密称取盐酸达克罗宁0.5 g，用上述滤液定容至50 ml。②标准对照液的制备：精密称取盐酸达克罗宁0.5 g，并取氮酮0.25 g，以95%的乙醇定容至50 ml。③空白对照液的制备：精密称取盐酸达克罗宁0.5 g，用95%的乙醇定容至50 ml。
1.2.2 导数光谱的测定 ①盐酸达克罗宁导数光谱的测定：精密称取盐酸达克罗宁适量，用0.05 mol/L H2SO4溶解，稀释至含盐酸达克罗宁约16 μg/ml的溶液。另配制0.5%的氮酮溶液和40%的急性子乙醇溶液(不含盐酸达克罗宁)，用0.05 mol/L H2SO4稀释，并用0.45 μm微孔滤膜滤过。然后在200～340 nm波长内分别绘制零阶与一阶导数光谱，由图可知，盐酸达克罗宁在293.8 nm处有较强振幅，而0.5%的氮酮溶液和40%的急性子乙醇溶液在此与零线重合，故选用一阶导数光谱的峰零线量取293.8 nm处的振幅D值作为测定盐酸达克罗宁的定量依据。②盐酸达克罗宁标准曲线的制作：精密称取105℃干燥至恒重的盐酸达克罗宁15 mg于50 ml容量瓶中，加0.05 mol/L H2SO4溶解并定容，作为贮备液待用。精密量取上述溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 ml分别置于25 ml量瓶中，用0.05 mol/L H2SO4溶液定容，测定一阶导数光谱的振幅D值。以D值对浓度C作线性回归，得回归方程为：D=11.187 C+0.0098，r=0.9993。线性范围1.2 μg/ml～60μg/ml，见图1。③回收率试验：精密量取贮备液适量置装有急性子提取液和氮酮(40%急性子乙醇提取液1 ml加0.5%氮酮乙醇液1 ml)的量瓶中，配制5个不同浓度的盐酸达克罗宁溶液，按上法测定振幅D值，平均回收率为99. 68%，结果见表1。④稳定性试验：取不同组透过液在室温放置0，2，4，6，8，10，12，24 h后，分别测定其D值，结果D值无明显变化。
1.2.3 透皮实验方法 取18～22 g雄性小白鼠15只，随机分为3组，分别为试验组、空白组和标准对照组。剃去背部毛，处死后取其背部皮肤，去皮下脂肪，冲洗并浸泡于生理盐水，冰箱保存，备用。采用Franz扩散池，角质层面向给药室，给药室内注入2 ml释药液，接收池为定量生理盐水。实验时表1 回收率试验结果 开动磁力搅拌器，保持恒速、恒温(37±0.2)℃，在2、4、6、8、10 h各取样2 ml，同时注入2 ml生理盐水，注意注入时应避免起气泡。取样品适量，按盐酸达克罗宁一阶导数光谱的峰零线量取293.8 nm处的振幅D值，代入标准曲线方程，计算浓度，按累积渗透量公式计算各时刻累积渗透量Qn(μg/cm2)[2]。Qn=(50Cn+2Ci)/4.153(1
2 结果
见表2。表2 各组的累积渗透量及Qt方程 各个时间段，急性子乙醇提取液组与空白组比较均有显著性差异(P<0.05)；空白组与标准对照组比较有显著性差异(P<0.05)；急性子乙醇提取液组与标准对照组比较无显著性差异(P>0.05)。说明急性子乙醇提取液组具有促进盐酸达克罗宁透皮吸收作用。其累积渗透量在2～10 h与时间t基本呈直线关系。
3 讨论
本试验证实了急性子乙醇提取液对盐酸达克罗宁有促透皮作用。我国中药资源丰富，祖国医学中内病外治的方法也很多，既有穴位刺激作用，也有药物透皮进入机体而产生的作用。急性子性味苦辛、温、有小毒。功用主治为破血、消积、软坚。治经闭、积块、噎嗝、外疡坚肿、骨鲠不下等。急性子主要含凤仙甾醇(Balsaminasterol)、帕灵锐酸(Parinaric acid)、皂苷、脂肪油、多糖、蛋白质、氨基酸、挥发油，以及槲皮素的多糖苷和山柰酚的衍生物等黄酮类[3]。其促进药物透皮作用可能是其某一成分或多个成分协同致使去毛小白鼠皮肤表皮层发生物理性变化，而使药物穿透皮肤。
参考文献
1 郝勇,刘景东,宋国龙.急性子提取液促对乙酰氨基酚透皮作用.中国医院药学杂志,2005，25(7)：612.
2 吴季俭，杨晓波，朱治平,等.多塞平透皮剂的初步体外透皮试验.中国医院药学杂志,1994,14(7):312.
3 江苏新医学院编.中药大辞典.上海：上海人民出版社,1977.1715.
作者单位： 050081 石家庄 白求恩军医学院, http://www.100md.com(郝勇 刘景东 张涛)
【关键词】 急性子；氮酮；盐酸达克罗宁；透皮吸收；一阶导数分光光度法
Study on Skin Penetration Enhancing Effect for Dyclonine Hydrochloride by Extract of Jixingzi in Alcohol HAO Yong,LIU Jingdong,ZHANG Tao.Bethune Military Medical College,ShiJiazhuang 050081,China
【Abstract】 Objective To study skin penetration enhancing effect for dyclonine hydrochloride by extract of Jixingzi in alcohol. Methods To determin dyclonine hydrochloride Dvalue in transdermal solution by using transdermal test way and first order derivative spectrophotometry. Results The Dvalue of differential concentrations extract of Jixingzi in alcohol were compared with that of blank control trial group (P<0.05),compared with that of standard control trial group (P>0.05). Conclusion Extract of Jixingzi in alcohol can enhance dyclonine hydrochloride to penetrate rat skin.
【Key words】 Jixingzi；Azone；Dyclonine hydrochloride；Transdermal absorption；First order derivative spectrophotometry
急性子为凤仙花科植物凤仙Impatiens balsamina L.的种子，具有透骨软坚作用。我们已就急性子乙醇提取液对扑热息痛的促透皮作用进行了研究[1]，证实急性子乙醇提取液确有促进扑热息痛透过小白鼠去毛皮肤的作用。我们又以急性子乙醇提取液对盐酸达克罗宁促透皮作用进行了研究。
1 材料与方法
1.1 仪器、药品及实验动物 UV265紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，透皮吸收仪(北京军区药物研究所制)；盐酸达克罗宁(上海轻工实验厂)；急性子(购自石家庄乐仁堂药店)；其他试剂均为分析纯；雄性小白鼠(河北医科大学动物中心提供)。
1.2 方法
1.2.1 实验条件的选择 ①1%盐酸达克罗宁试验药液的制备：取急性子粗粉40 g，以95%的乙醇100 ml，浸泡2周，过滤，取滤液待用。精密称取盐酸达克罗宁0.5 g，用上述滤液定容至50 ml。②标准对照液的制备：精密称取盐酸达克罗宁0.5 g，并取氮酮0.25 g，以95%的乙醇定容至50 ml。③空白对照液的制备：精密称取盐酸达克罗宁0.5 g，用95%的乙醇定容至50 ml。
1.2.2 导数光谱的测定 ①盐酸达克罗宁导数光谱的测定：精密称取盐酸达克罗宁适量，用0.05 mol/L H2SO4溶解，稀释至含盐酸达克罗宁约16 μg/ml的溶液。另配制0.5%的氮酮溶液和40%的急性子乙醇溶液(不含盐酸达克罗宁)，用0.05 mol/L H2SO4稀释，并用0.45 μm微孔滤膜滤过。然后在200～340 nm波长内分别绘制零阶与一阶导数光谱，由图可知，盐酸达克罗宁在293.8 nm处有较强振幅，而0.5%的氮酮溶液和40%的急性子乙醇溶液在此与零线重合，故选用一阶导数光谱的峰零线量取293.8 nm处的振幅D值作为测定盐酸达克罗宁的定量依据。②盐酸达克罗宁标准曲线的制作：精密称取105℃干燥至恒重的盐酸达克罗宁15 mg于50 ml容量瓶中，加0.05 mol/L H2SO4溶解并定容，作为贮备液待用。精密量取上述溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 ml分别置于25 ml量瓶中，用0.05 mol/L H2SO4溶液定容，测定一阶导数光谱的振幅D值。以D值对浓度C作线性回归，得回归方程为：D=11.187 C+0.0098，r=0.9993。线性范围1.2 μg/ml～60μg/ml，见图1。③回收率试验：精密量取贮备液适量置装有急性子提取液和氮酮(40%急性子乙醇提取液1 ml加0.5%氮酮乙醇液1 ml)的量瓶中，配制5个不同浓度的盐酸达克罗宁溶液，按上法测定振幅D值，平均回收率为99. 68%，结果见表1。④稳定性试验：取不同组透过液在室温放置0，2，4，6，8，10，12，24 h后，分别测定其D值，结果D值无明显变化。
1.2.3 透皮实验方法 取18～22 g雄性小白鼠15只，随机分为3组，分别为试验组、空白组和标准对照组。剃去背部毛，处死后取其背部皮肤，去皮下脂肪，冲洗并浸泡于生理盐水，冰箱保存，备用。采用Franz扩散池，角质层面向给药室，给药室内注入2 ml释药液，接收池为定量生理盐水。实验时表1 回收率试验结果 开动磁力搅拌器，保持恒速、恒温(37±0.2)℃，在2、4、6、8、10 h各取样2 ml，同时注入2 ml生理盐水，注意注入时应避免起气泡。取样品适量，按盐酸达克罗宁一阶导数光谱的峰零线量取293.8 nm处的振幅D值，代入标准曲线方程，计算浓度，按累积渗透量公式计算各时刻累积渗透量Qn(μg/cm2)[2]。Qn=(50Cn+2Ci)/4.153(1
2 结果
见表2。表2 各组的累积渗透量及Qt方程 各个时间段，急性子乙醇提取液组与空白组比较均有显著性差异(P<0.05)；空白组与标准对照组比较有显著性差异(P<0.05)；急性子乙醇提取液组与标准对照组比较无显著性差异(P>0.05)。说明急性子乙醇提取液组具有促进盐酸达克罗宁透皮吸收作用。其累积渗透量在2～10 h与时间t基本呈直线关系。
3 讨论
本试验证实了急性子乙醇提取液对盐酸达克罗宁有促透皮作用。我国中药资源丰富，祖国医学中内病外治的方法也很多，既有穴位刺激作用，也有药物透皮进入机体而产生的作用。急性子性味苦辛、温、有小毒。功用主治为破血、消积、软坚。治经闭、积块、噎嗝、外疡坚肿、骨鲠不下等。急性子主要含凤仙甾醇(Balsaminasterol)、帕灵锐酸(Parinaric acid)、皂苷、脂肪油、多糖、蛋白质、氨基酸、挥发油，以及槲皮素的多糖苷和山柰酚的衍生物等黄酮类[3]。其促进药物透皮作用可能是其某一成分或多个成分协同致使去毛小白鼠皮肤表皮层发生物理性变化，而使药物穿透皮肤。
参考文献
1 郝勇,刘景东,宋国龙.急性子提取液促对乙酰氨基酚透皮作用.中国医院药学杂志,2005，25(7)：612.
2 吴季俭，杨晓波，朱治平,等.多塞平透皮剂的初步体外透皮试验.中国医院药学杂志,1994,14(7):312.
3 江苏新医学院编.中药大辞典.上海：上海人民出版社,1977.1715.
作者单位： 050081 石家庄 白求恩军医学院, http://www.100md.com(郝勇 刘景东 张涛)