华中科大构建成功脑啡肽星形胶质细胞株
本报湖北讯 近日，华中科技大学同济医院麻醉学教研室徐颖博士等，在一项国家自然科学基金资助的课题中，采用分子克隆技术，构建成功一株可用于基因治疗慢性疼痛的“脑啡肽永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST)”。
近年来，转基因细胞移植镇痛为慢性疼痛的治疗开辟了新领域。转基因细胞移植镇痛，是将外源性镇痛物资基因导入靶细胞内，再将这种基因修饰细胞回输入机体，使其分泌具有镇痛作用的活性产物，来达到治疗之目的的。然而，传统的转基因镇痛模式不能调控镇痛物质的分泌，而外源镇痛基因在宿主体内持续表达则会带来诸多不良后果。
为探寻一种精确调控外源基因的表达模式，研究人员以人前脑啡肽原基因(hPPE)为基础，采用分子克隆技术，将hPPE逆转录到病毒四环素反应质粒(pRevTRE/hPPE)载体上，通过病毒载体包装、荧光素酶活性检测、诱导表达及间接免疫荧光染色等系列技术处理后，成功地克隆出一株受四环素及其衍生物强力霉素定量调控表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株。
经酶切鉴定及DNA序列检测，结果发现：该细胞株重组质粒中含有hPPE基因，诱导表达值为876.1，背景表达值为42.5，诱导倍数为20.6倍，hPPE扩增片段为950bp，强力霉素剂量与hPPEmRNA表达呈显著正相关(P, http://www.100md.com(吴一福)
近年来，转基因细胞移植镇痛为慢性疼痛的治疗开辟了新领域。转基因细胞移植镇痛，是将外源性镇痛物资基因导入靶细胞内，再将这种基因修饰细胞回输入机体，使其分泌具有镇痛作用的活性产物，来达到治疗之目的的。然而，传统的转基因镇痛模式不能调控镇痛物质的分泌，而外源镇痛基因在宿主体内持续表达则会带来诸多不良后果。
为探寻一种精确调控外源基因的表达模式，研究人员以人前脑啡肽原基因(hPPE)为基础，采用分子克隆技术，将hPPE逆转录到病毒四环素反应质粒(pRevTRE/hPPE)载体上，通过病毒载体包装、荧光素酶活性检测、诱导表达及间接免疫荧光染色等系列技术处理后，成功地克隆出一株受四环素及其衍生物强力霉素定量调控表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株。
经酶切鉴定及DNA序列检测，结果发现：该细胞株重组质粒中含有hPPE基因，诱导表达值为876.1，背景表达值为42.5，诱导倍数为20.6倍，hPPE扩增片段为950bp，强力霉素剂量与hPPEmRNA表达呈显著正相关(P, http://www.100md.com(吴一福)