复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的进一步改进
复方薄荷脑滴鼻液是治疗干燥性和萎缩性鼻炎的一种常用制剂，主要成分为等质量的薄荷脑和樟脑，溶剂为液状石蜡。该制剂中樟脑的鉴别标准规定为[1]：在230～350nm进行紫外扫描，仅在289nm处有最大吸收。但在实际测量中，289nm处检测不出最大吸收峰，其主要原因是配制制剂的液状石蜡干扰吸收，且不同厂家不同批号石蜡干扰不尽相同，所以重现性很差。近年来有关复方薄荷脑滴鼻液鉴别方法改进的报道很多，如升华法[2]、薄层色谱法[3]和混合溶剂稀释后测定法[4]等。这些方法虽然是可行的，但是操作不及《中国医院制剂规范》(简称《制剂规范》)中的简便，且各有缺点，升华法得到的溶液浓度太低，混合溶剂稀释后测定法不能完全消除石蜡的影响。张全英[5]和巫炳红[6]用与配制滴鼻液同批号的液状石蜡作参比进行紫外扫描得到较好的图谱，λmax为289nm。该方法虽然简单易行且结果稳定，但在实际工作中很难甚至无法得到同批号的石蜡。本试验对这一方法进行改进，用随意一批号的液状石蜡将检验品稀释成较接近的高低两个浓度，再分别与同体积的无水乙醇混合离心，取上乙醇层，以低浓度份作参比，高浓度份作样品，进行紫外扫描，同样能得到理想的图谱，且λmax为288±1nm。该法简单易行，且重现性好。
1 仪器与试剂
U2010紫外可见分光光度计(日本日立公司)；LDZ4-0.8低速自动平衡微型离心机(北京医用离心机厂)；XW80A漩涡混合器(上海医科大学仪器厂)；液状石蜡(分别为a：武汉联碱厂，批号2000726；b：杭州炼油厂，批号980306)；无水乙醇(上海振兴化工一厂，批号00104376)；薄荷脑、樟脑(咸宁学院附属第一医院药剂科提供)；复方薄荷脑滴鼻液(咸宁学院附属第一医院药剂科，A、B、C批号分别为020611，020909，021106)。
2 方法与结果
2.1 各纯组分的测定
樟脑、薄荷脑、液状石蜡a和液状石蜡b各取0.5g，分别加入无水乙醇100ml，置漩涡混合器上震荡2min，再各取10ml以3000r/min的速度离心10min。吸取上清液作为供试品溶液，乙醇为空白在230～350nm波长范围内利用分光光度计进行扫描。发现在此波长段，樟脑在289nm处有最大吸收(见图1)，薄荷脑无吸收峰，液状石蜡有明显吸收，且两批液状石蜡的图谱有较大差异。结果表明液状石蜡对樟脑紫外吸收峰有较大的干扰，而薄荷脑没有，这一点与以前的报道相同[3]。
2.2.1 《制剂规范》中的紫外分光光度法
将复方薄荷脑滴鼻液A、B、C分别用无水乙醇配成2.5mg/ml供试品，再以乙醇为空白，在230～350nm范围扫描。结果发现三个样品都类似地在295nm左右出现了超出量程的末端吸收(见图2)，根本不能显示288.8nm处的吸收情况。原因是所配成的供试品是浊液，紫外光难以透过。
图2 《制剂规范》中樟脑的紫外吸收图谱(未离心)若将上述供试品离心取上清液，仍以无水乙醇作对照在230～350nm范围扫描，虽然能发现最大吸收峰，但在274～285nm之间变化，结果不稳定(见图3与4)，与2.1中樟脑的图谱差别很大，显然不能用来作鉴别。图3和图4在240nm处现出了量程的吸收，由于不影响289nm处的吸收峰，图谱报告中没有显示出来。
2.2.2 差示分光光度法
取复方薄荷脑滴鼻液A、B、C各5ml，加乙醇20ml；再取制备各批号滴鼻液时所用的液状石蜡各5ml，加乙醇20ml。将上述6份混合物按2.1中的方法震荡、离心、吸取上清液。分别将复方薄荷脑滴鼻液A、B、C制得的乙醇上清液作供试品，对应石蜡所制得的乙醇上清液作空白在230～350nm进行紫外扫描[6]。结果显示各样品峰形一致(见图5)，滴鼻液A、B、C λmax分别为288.6nm、288.9nm、288.4nm，说明用制备时同一批号的石蜡作空白可以消除石蜡对樟脑紫外吸收峰的干扰。
2.3 改进的差示分光光度法
取复方薄荷脑滴鼻液A、B、C各4ml，加液状石蜡a(石蜡a与制备各滴鼻液时所用的石蜡不一样) 1ml，充分振荡后加乙醇20ml；再取复方薄荷脑滴鼻液A、B、C各1ml，加液状石蜡a 4ml，充分振荡后加乙醇20ml。将上述6份混合物按2.1中的方法震荡、离心、吸取上清液。分别将各滴鼻液4ml制得的上清液作供试品，相应滴鼻液1ml制得的上清液作空白在230～350nm进行紫外扫描。再以石蜡b和c做同样的试验。结果显示各样品扫描的峰形一致(见图6)，λmax均在288±1nm(见表1)，说明用改进的差示分光光度法也可以消除石蜡对樟脑紫外吸收峰的干扰。
3 讨 论
在复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑鉴别工作中，有微量的液状石蜡溶于乙醇中。液状石蜡在230～350nm内有明显吸收，所以樟脑紫外吸收峰受到干扰。且不同厂家不同批号液状石蜡干扰不尽相同，使鉴别结果不稳定。虽然用制备滴鼻液时同一批号的液状石蜡制备空白可以消除石蜡的干扰，但是制备以后是否还有石蜡剩余，即使有剩余，能否及时得到都不能保证，所以普通的差示分光光度法很不方便。
液状石蜡在乙醇中的溶解度很小[7]，假设不管是1ml还是4ml液状石蜡都可以在20ml乙醇中达到饱和，这样随意一批液状石蜡1ml或者4ml与乙醇互混，离心分层后乙醇层的成分基本相同。在本实验改进的差示分光光度法中，除了有效成分樟脑和薄荷脑外，供试品就是4ml制备时液状石蜡和1m液状石蜡a的混合物，空白就是1ml制备时液状石蜡和4ml液状石蜡a的混合物。根据上述假说，由于制备用的液状石蜡与液状石蜡a都在乙醇中达到了饱和，所以供试品与空白乙醇中液状石蜡的种类和浓度相同，因而消除了液状石蜡的干扰。至于樟脑由于在供试品中的浓度C试要比空白C空高几倍，所以还是很容易检测出它的吸收峰。在扫描中，根据Beer定律[8]，在λ1处A1=El(C试C空)l；在λ2处A2=E2(C试C空)l，两处吸光度之比Al/A2=El/E2。用空白溶剂作对照两波长处的吸光度比值也是E1/E2[8]，所以虽然空白中含有检测成分樟脑，但是峰形没有变化，最大吸收峰也没有变化。
以上假设没有考虑液状石蜡和樟脑在液状石蜡与乙醇两相中的分配差异带来的干扰，我们认为不同厂家不同批号的液状石蜡虽然成分有差别，但是溶解性差异不大，可以忽略。我们的实验也证实了这一点，所以改进的差示分光光度法是一种简单易行稳定的方法。但是，该法中样品与对照品最恰当的浓度还有待于作交叉试验进行进一步的研究。
参考文献：
[1]卫生部药政局.中国医院制剂规范[M].第2版.北京：中国医药科技出版社，1995：166
[2]杨兴明，林志华.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法改进[J].中国药师，2003：591
[3]吴静.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的修正建议[J].基层中药杂志，1998，12(4)： 55
[4]郑菁华，陈琳，林玉仙.系数倍增法测定复方薄荷脑滴鼻液中樟脑的含量[J].海峡药学，2000，12(4):9
[5]张全英，潘杰，胡剑峰.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法改进[J]，中国医院药学杂志，2002，22(10)：635
[6]巫炳红.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的改进[J].首都医药，1999，6(3)：19
[7]罗明生.高天惠.药剂辅料大全[M].成都：四川科学技术出版社，1995：659
[8]孙毓庆.分析化学[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2000：47
(1.武汉大学医学部研究生，湖北 武汉 430071；2.咸宁学院附属第一医院药剂科), 百拇医药(汪新亮，雷振宇，余祥山)
1 仪器与试剂
U2010紫外可见分光光度计(日本日立公司)；LDZ4-0.8低速自动平衡微型离心机(北京医用离心机厂)；XW80A漩涡混合器(上海医科大学仪器厂)；液状石蜡(分别为a：武汉联碱厂，批号2000726；b：杭州炼油厂，批号980306)；无水乙醇(上海振兴化工一厂，批号00104376)；薄荷脑、樟脑(咸宁学院附属第一医院药剂科提供)；复方薄荷脑滴鼻液(咸宁学院附属第一医院药剂科，A、B、C批号分别为020611，020909，021106)。
2 方法与结果
2.1 各纯组分的测定
樟脑、薄荷脑、液状石蜡a和液状石蜡b各取0.5g，分别加入无水乙醇100ml，置漩涡混合器上震荡2min，再各取10ml以3000r/min的速度离心10min。吸取上清液作为供试品溶液，乙醇为空白在230～350nm波长范围内利用分光光度计进行扫描。发现在此波长段，樟脑在289nm处有最大吸收(见图1)，薄荷脑无吸收峰，液状石蜡有明显吸收，且两批液状石蜡的图谱有较大差异。结果表明液状石蜡对樟脑紫外吸收峰有较大的干扰，而薄荷脑没有，这一点与以前的报道相同[3]。
2.2.1 《制剂规范》中的紫外分光光度法
将复方薄荷脑滴鼻液A、B、C分别用无水乙醇配成2.5mg/ml供试品，再以乙醇为空白，在230～350nm范围扫描。结果发现三个样品都类似地在295nm左右出现了超出量程的末端吸收(见图2)，根本不能显示288.8nm处的吸收情况。原因是所配成的供试品是浊液，紫外光难以透过。
图2 《制剂规范》中樟脑的紫外吸收图谱(未离心)若将上述供试品离心取上清液，仍以无水乙醇作对照在230～350nm范围扫描，虽然能发现最大吸收峰，但在274～285nm之间变化，结果不稳定(见图3与4)，与2.1中樟脑的图谱差别很大，显然不能用来作鉴别。图3和图4在240nm处现出了量程的吸收，由于不影响289nm处的吸收峰，图谱报告中没有显示出来。
2.2.2 差示分光光度法
取复方薄荷脑滴鼻液A、B、C各5ml，加乙醇20ml；再取制备各批号滴鼻液时所用的液状石蜡各5ml，加乙醇20ml。将上述6份混合物按2.1中的方法震荡、离心、吸取上清液。分别将复方薄荷脑滴鼻液A、B、C制得的乙醇上清液作供试品，对应石蜡所制得的乙醇上清液作空白在230～350nm进行紫外扫描[6]。结果显示各样品峰形一致(见图5)，滴鼻液A、B、C λmax分别为288.6nm、288.9nm、288.4nm，说明用制备时同一批号的石蜡作空白可以消除石蜡对樟脑紫外吸收峰的干扰。
2.3 改进的差示分光光度法
取复方薄荷脑滴鼻液A、B、C各4ml，加液状石蜡a(石蜡a与制备各滴鼻液时所用的石蜡不一样) 1ml，充分振荡后加乙醇20ml；再取复方薄荷脑滴鼻液A、B、C各1ml，加液状石蜡a 4ml，充分振荡后加乙醇20ml。将上述6份混合物按2.1中的方法震荡、离心、吸取上清液。分别将各滴鼻液4ml制得的上清液作供试品，相应滴鼻液1ml制得的上清液作空白在230～350nm进行紫外扫描。再以石蜡b和c做同样的试验。结果显示各样品扫描的峰形一致(见图6)，λmax均在288±1nm(见表1)，说明用改进的差示分光光度法也可以消除石蜡对樟脑紫外吸收峰的干扰。
3 讨 论
在复方薄荷脑滴鼻液中的樟脑鉴别工作中，有微量的液状石蜡溶于乙醇中。液状石蜡在230～350nm内有明显吸收，所以樟脑紫外吸收峰受到干扰。且不同厂家不同批号液状石蜡干扰不尽相同，使鉴别结果不稳定。虽然用制备滴鼻液时同一批号的液状石蜡制备空白可以消除石蜡的干扰，但是制备以后是否还有石蜡剩余，即使有剩余，能否及时得到都不能保证，所以普通的差示分光光度法很不方便。
液状石蜡在乙醇中的溶解度很小[7]，假设不管是1ml还是4ml液状石蜡都可以在20ml乙醇中达到饱和，这样随意一批液状石蜡1ml或者4ml与乙醇互混，离心分层后乙醇层的成分基本相同。在本实验改进的差示分光光度法中，除了有效成分樟脑和薄荷脑外，供试品就是4ml制备时液状石蜡和1m液状石蜡a的混合物，空白就是1ml制备时液状石蜡和4ml液状石蜡a的混合物。根据上述假说，由于制备用的液状石蜡与液状石蜡a都在乙醇中达到了饱和，所以供试品与空白乙醇中液状石蜡的种类和浓度相同，因而消除了液状石蜡的干扰。至于樟脑由于在供试品中的浓度C试要比空白C空高几倍，所以还是很容易检测出它的吸收峰。在扫描中，根据Beer定律[8]，在λ1处A1=El(C试C空)l；在λ2处A2=E2(C试C空)l，两处吸光度之比Al/A2=El/E2。用空白溶剂作对照两波长处的吸光度比值也是E1/E2[8]，所以虽然空白中含有检测成分樟脑，但是峰形没有变化，最大吸收峰也没有变化。
以上假设没有考虑液状石蜡和樟脑在液状石蜡与乙醇两相中的分配差异带来的干扰，我们认为不同厂家不同批号的液状石蜡虽然成分有差别，但是溶解性差异不大，可以忽略。我们的实验也证实了这一点，所以改进的差示分光光度法是一种简单易行稳定的方法。但是，该法中样品与对照品最恰当的浓度还有待于作交叉试验进行进一步的研究。
参考文献：
[1]卫生部药政局.中国医院制剂规范[M].第2版.北京：中国医药科技出版社，1995：166
[2]杨兴明，林志华.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法改进[J].中国药师，2003：591
[3]吴静.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的修正建议[J].基层中药杂志，1998，12(4)： 55
[4]郑菁华，陈琳，林玉仙.系数倍增法测定复方薄荷脑滴鼻液中樟脑的含量[J].海峡药学，2000，12(4):9
[5]张全英，潘杰，胡剑峰.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法改进[J]，中国医院药学杂志，2002，22(10)：635
[6]巫炳红.复方薄荷脑滴鼻液中樟脑鉴别方法的改进[J].首都医药，1999，6(3)：19
[7]罗明生.高天惠.药剂辅料大全[M].成都：四川科学技术出版社，1995：659
[8]孙毓庆.分析化学[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2000：47
(1.武汉大学医学部研究生，湖北 武汉 430071；2.咸宁学院附属第一医院药剂科), 百拇医药(汪新亮，雷振宇，余祥山)