[摘要] 目的 检测完全缓解后急性早幼粒细胞白血病患者微小残留病(MRD)，同时分析其对预后判断的指导价值。方法 建立逆转录PCR(RT/PCR)用以检测APL患者PML/RARα。结果 RT-PCR方法敏感而可重复。治疗前APL患者的RT-PCR阳性率为92.8%(39/42),而维甲酸或化疗诱导完全缓解后MRD阳性率为56.7%(21/37)。另外，MRD阳性与缓解后APL患者的复发有关，并可以作为缓解后预测APL患者复发的指标。同时有助于指导临床上采取巩固治疗而防止复发。结论 RT-PCR能够检测APL患者的MRD和作为预测复发的指标。

    [关键词] 急性早幼粒细胞白血病；微小残留病；RT/PCR

    白血病患者完全缓解(CR)后的微小残留病(MRD)已被证实与复发有关[1]。MRD的检测也成为指导缓解后进一步化疗的重要指标[2]。在目前血液病的应用实践中，MRD检测的最好例子是骨髓移植后RT-PCR法检测慢性粒细胞白血病(CML)的BCR-ABL融合基因[3]。

    急性早幼粒细胞性白血病(APL)以特异的染色体t(15;17)(q22;q21)易位为特征[4]。最近，许多实验室发现t(15;17)易位后，通过15染色体上的PML基因和17染色体上的RARα基因并列而导致融合基因PML/RARα形成[5]。根据PML断裂点的位置不同，可以产生2个主要的PML/RARα异构体。断裂点位于PML内含子3或4(bcr3)，则PML外显子3(P3)和RARα外显子3(r3)之间形成短(S)型融合mRNA产物，而断裂点位于PML内含子6(bcr1)或下游，PML内含子6(P6)和RARα外显子(r3)形成长(L)型融合体[6，7]。RT-PCR法的建立正是依赖于断裂点的位置而设计适当寡核苷酸引物，继而扩增PML/RARαmRNA异构体[8]。另外，RT-PCR的高度敏感性使得MRD的检测成为可能，并可在APL患者临床缓解期时早期预测白血病的复发。

     1 资料与方法

    1.1 病例选择 本研究中的42例患者均为1993～2000年发病，男26例，女16例，年龄12～72岁，根据FAB标准[9]诊断为APL。全部病例均经全反式维甲酸(ATRA)治疗[30～60mg/(m2·d)]诱导缓解。巩固化疗方案为标准的HOAP或DA方案。巩固治疗后处于缓解期的患者采用全国维甲酸协作治疗组建议的ATRA与化疗联合治疗方案维持治疗[10]。骨髓单个核细胞用Ficoll分离并保存于液氮中。

    1.2 RNA提取 10ml淋巴细胞分离液加于试管中 ......